郑小龙
- 作品数：116 被引量：220H指数：8
- 供职机构：山东出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划国家质检公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 焦磷酸测序技术在确证贾第鞭毛虫和隐孢子虫中的应用被引量：1
- 2013年
- 目的本研究旨在通过对贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称"两虫")进行序列信息分析的基础上,利用焦磷酸测序技术建立一种快速、简单地确证两虫的方法。方法通过序列信息比对,对贾第鞭毛虫的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,tim)基因和隐孢子虫18SrRNA基因的保守区段设计扩增引物及测序引物。用Sheather’s蔗糖密度离心法从粪便标本中分离纯化贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊。酚-氯仿法抽提孢囊、卵囊总DNA,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(Pyrosequencing Technology,PSQ)针对两虫基因保守核苷酸区段进行测序分析。同时利用扩增引物与其他原虫进行特异性试验,利用测序引物进行重复性试验。结果通过序列信息比对寻找到了表征贾第鞭毛虫tim基因和隐孢子虫18S rRNA基因的核苷酸保守区段,经焦磷酸测序后能进一步确证虫株的序列信息,同时与Sanger法测序结果比对显示一致。特异性试验表明,不与其它原虫发生交叉反应;重复性试验表明,重现性为100%。结论基于序列分析的焦磷酸测序技术可以作为进一步确证两虫的方法使用。
- 孙涛邓明俊季新成肖西志徐彪凌宗帅岳志芹王群郑小龙
- 关键词：贾第鞭毛虫隐孢子虫焦磷酸测序
- 沙门氏菌分离过程中铜绿假单孢多克隆抗体的应用
- 本发明涉及沙门氏菌分离过程中铜绿假单孢多克隆抗体的应用。本发明将多克隆抗体应用于沙门氏菌的检测，具体的是首先制备沙门氏菌的分离过程中的干扰菌-铜绿假单胞菌的多克隆抗体，经饱和硫酸铵法纯化后，将纯化的抗体添加到沙门氏菌分离...
- 肖西志吴振兴高宏伟邓明俊郑小龙王群孙涛朱来华岳志芹臧伟卢瑜孙敏林超徐彪梁成珠
- 一种牙鲆弹状病毒的检测方法
- 本发明涉及水产动物病原的检测与诊断技术领域的一种牙鲆弹状病毒的检测方法，采用实时定量逆转录－聚合酶链式反应技术检测鱼类牙鲆弹状病毒，先设计特异性引物序列和荧光探针序列，然后提取待测样品的核酸；再进行实时定量逆转录－聚合酶...
- 岳志芹梁成珠刘荭徐彪朱来华邓明俊张健郑小龙肖西志辛学谦
- 焦磷酸测序技术检测隐孢子虫的方法
- 本发明公开了一种焦磷酸测序技术检测隐孢子虫的方法，先依据隐孢子虫18S rRNA设计特异性引物及焦磷酸测序引物；再提取待测样品的脱氧核糖核酸(DNA)，然后分别以18SrRNA基因的特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR)...
- 孙涛邓明俊肖西志王群郑小龙凌宗帅
- 病毒性出血性败血症病毒N基因的病毒样颗粒制备及定值被引量：2
- 2018年
- 为制备含有病毒性出血性败血症病毒(VHSV)N基因的RNA病毒样颗粒标准样品,通过RT-RCR扩增VHSV的N基因,将其克隆至含有组氨酸标签的pNH-MS_2his载体中,构建重组原核表达载体pNHMS_2his-N;将重组质粒pNH-MS_2his-N转化至表达菌株BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG诱导表达、纯化;对病毒样颗粒进行鉴定及稳定性试验,使用数字PCR对病毒样颗粒进行定值。结果显示,该病毒样颗粒含VHSV N基因序列,并且稳定性良好,定值结果为8×10~6 copies/m L。结果表明,构建的病毒样颗粒可以作为RNA病毒检测时的标准品和质控品使用。
- 王群姜帆岳志芹孙涛郑小龙张晓文房保海
- 关键词：病毒样颗粒N基因
- 马鼻肺炎病毒的液相芯片检测引物及检测方法
- 本发明涉及一种马鼻肺炎病毒的液相芯片检测引物及检测方法，本发明的检测方法能够对样品进行快速检测，从样品处理到出结果仅需4小时左右；由于采用了接近生物反应体系的液相芯片系统和特异性的探针，使该方法可与荧光定量PCR相媲美。...
- 郑小龙徐彪梁成珠朱来华王群肖西志岳志芹邓明俊孙涛赵玉然
- 大片吸虫成虫FG0018EST序列的电子克隆分析和验证
- 目的:在吸虫的生物学中,虫卵起着重要的作用,大量虫卵的产生和排出体外造成吸虫病的传播和流行,如果能寻找到阻断或减少虫卵产生的基因从而研制疫苗,那么吸虫病的流行将被有效的遏止。虫卵卵壳蛋白基因的发现,给吸虫病疫苗研究带来了...
- 郑小龙罗洪林张为宇黄维义
- 关键词：大片吸虫电子克隆
- 大片吸虫成虫FG0018表达序列标签序列的电子克隆分析及实验验证被引量：3
- 2005年
- 用大片吸虫成虫FG0018表达序列标签(Expressed Sequence Tags,ESTs)序列对NCBI数据库进行Blastn比较,采用生物信息学方法,运用网上数据库资源,结合相关生物信息学软件将目标序列进行搜索、处理、拼接、延伸,得到的最后重叠群(contig,命名为FG0018C0N)与肝片吸虫卵壳蛋白B2序列(GenBank:M93025)相似性很高,用DNASTAR、SEQMAN程序和Blast2程序分析FG0018C0N,推测其开放阅读框为930 bp,编码310个氨基酸,蛋白质的特点及跨膜区预测其编码蛋白可能属于核蛋白,疏水性分析表明其编码一疏水蛋白。FG0018C0N基因与肝片吸虫卵壳蛋白基因有100%的相似性,310个氨基酸与之有91%的一致性。经RT_PCR、酶切验证并cDNA测序,结果证明FG0018C0N序列可能是大片吸虫的卵壳蛋白基因。
- 罗洪林郑小龙张为宇覃华黄维义
- 关键词：生物信息学大片吸虫电子克隆表达序列标签
- 施马伦贝格病毒被引量：1
- 2013年
- 施马伦贝格病毒病(Schmallenberg virus,SBV)是一种新发现的动物传染病,因于2011年底在德国施马伦贝格镇首次发现而临时得名,随后蔓延于西欧(包括比利时、法国、德国、荷兰、意大利、卢森堡、西班牙、英国和丹麦),并分别在奥地利、波兰、瑞典和芬兰等国的牛、山羊、绵羊中检测到抗体。遗传分析显示该病毒与布尼亚病毒科(Bunyaviridae)正布尼亚病毒属(Orthobunyavirus)西姆布血清群病毒(Simbu serogroup viruses)的亲缘关系最密切,西姆布血清群病毒是已知的反刍动物病原,可通过节肢动物媒介(蚊、蠓)传播。施马伦贝格病毒病有2种不同的临床症状:成年牛出现短暂轻微/温和的病症(产奶量减少、发热、腹泻)和新生哺乳动物(牛、羊)死产和先天缺陷。因为同群类似的病毒不是人畜共患病病原,也无该病毒致人发病的证据,但现阶段尚不能完全排除。尽管目前没有特效的药物和疫苗,但因已有类似病毒(赤羽病)的疫苗,疫苗接种应是控制该病的可能选项。因施马伦贝格病毒是一种新发现的病毒,许多方面尚不清楚,还有待于进一步研究。
- 朱来华郑小龙王群肖西志邓明俊魏乃林于红光辛学谦孙涛赵玉然王宫璞
- 关键词：施马伦贝格病毒反刍动物
- 荷斯坦牛瓜氨酸血症焦磷酸测序检测方法的建立与应用被引量：1
- 2014年
- 为建立一种快速高通量的荷斯坦牛瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)分子检测方法,依据CN是由于精氨酸琥珀酸(ASS)合成酶基因编码第86位精氨酸的密码子突变为终止密码子的遗传学基础,利用Assay Design SW软件设计了1对引物和1条测序引物对三种不同基因型的基因材料进行测序分析。用建立的方法对55份进境荷斯坦牛血样进行检测,发现有1例为隐性基因携带者,将PCR产物进行常规测序,结果与焦磷酸测序检测结果一致。研究表明该方法可用于荷斯坦牛瓜氨酸血症的检测,是一种有效的新方法。
- 王群孙涛张晓文郑小龙姜帆赵玉然
- 关键词：瓜氨酸血症荷斯坦牛
