郭文华
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 人自体血清支持脐血源HSCs和MSCs共培养研究
- 2012年
- 考察使用cytodex-3微载体共培养人脐带血(UCB)来源的造血干细胞(HSCs)和间充质干细胞(MSCs)的可行性,并评价其应用于未来临床治疗中的可能性.考虑到临床应用的安全性要求,尝试采用采集于UCB的人自体血清(HAS)取代目前广泛使用的胎牛血清(FBS),以期在体外共培养后可同时获得UCB-HSCs和UCB-MSCs.由于MSCs贴附的cytodex-3载体与悬浮的HSCs之间的密度差异,在共培养后自由沉降分离这两种不同类型的干细胞将会十分容易.为优化培养条件,评估了用不同含量的HAS(2.8%、5.6%、8.3%和11.1%)对UCB-MSCs和UCB-HSCs扩增的影响.结果表明,5.6%HAS培养UCB-HSCs最优,扩增倍数达(1.88±0.33)倍,且同时对UCB-MSCs的扩增亦无很大影响.因此,共培养条件下的HAS最佳含量约为5.6%.所研发的共培养体系可为临床应用提供扩增的UCB-HSCs和UCB-MSCs.
- 宋克东刘天庆殷轶群郭文华方美云石芳鑫朱丽丽吴筱婷马学虎崔占峰
- 关键词：脐带血共培养
- 脐血造血干/祖细胞与脂肪干细胞共培养的作用距离研究被引量：1
- 2011年
- 设计了一种细胞间距可调的trans well共培养方法，以研究脐带血来源的造血干／祖细胞（HS／PCs）和人脂肪干细胞（human-adipose derived stem cells，h-ADSCs）体外共培养时细胞间作用距离对造血干细胞扩增能力和脂肪干细胞在共培养后干细胞特性的影响。采用不同规格的砂纸打磨孔板的上壁面，经高精度游标卡尺测量，使两种细胞之间的有效接触间距为10--450μm不等。然后以h-ADSCs为基质细胞，分别考察HS／PCs和h-ADSCs在不同的作用距离下的共培养情况。其间每24小时对细胞进行计数，观察细胞形态。培养7天后对MNCs表面抗原CD34＋、CFU-GM集落扩增倍数进行了检测；同时也对h．ADSCs表面抗原（CD13、CD29、CD34、CD44、CIM5、CD73、CD105、CD166、HLA-DR）及其多向分化潜能（成骨、成软骨、成脂肪）进行分析以鉴定其干细胞性能。结果表明，通过transwell共培养，细胞之间在作用距离为350gm时HS／PCs的扩增效果最好，其中造血MNCs扩增了15．1±0．2倍，CD34＋扩增了5．0±0．1倍：扩增的h-ADSCs表达CD29、CD44、CD166，而不表达CD34、CD45，且在适当诱导条件下可以向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞分化。
- 宋克东刘天庆武爽郭文华郝永杰方美云石芳鑫朱丽丽马学虎崔占峰
- 关键词：脂肪干细胞造血干祖细胞TRANSWELL共培养
- 人脂肪干细胞诱导分化为心肌样细胞的研究被引量：3
- 2010年
- 体外分离培养成人脂肪组织来源的间充质干细胞,探索其基本生物学特性及向心肌样细胞诱导分化的潜能。体外分离培养人脂肪干细胞并诱导其向脂肪、成骨和软骨细胞分化,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学特点,用油红、碱性磷酸酶、von Kossa和甲苯胺蓝染色鉴定其分化情况,流式细胞仪测定细胞表面抗原CD34、CD44、CD45及HLA-DR的表达,采用血管紧张素Ⅱ诱导人脂肪干细胞向心肌样细胞分化,并与5-氮胞苷诱导结果对比。结果表明:分离培养的脂肪干细胞呈"梭形"生长,核大;流式细胞仪检测阳性表达CD44,CD105,阴性表达CD34,CD45及HLA-DR;脂肪、成骨和软骨的诱导分化证明所分离培养的细胞是间充质干细胞。血管紧张素Ⅱ诱导4周后,心肌肌钙蛋白cTn-I、缝隙连接蛋白43、肌球蛋白重链MHC呈阳性表达,但未见细胞的自发性搏动。脂肪干细胞具有间充质干细胞的特征,在一定条件下能向心肌样细胞分化,是一种有潜力的治疗心肌梗死的细胞源;血管紧张素Ⅱ能诱导人脂肪干细胞向心肌样细胞分化,可以用来替代传统的诱导剂5-氮胞苷。
- 宋克东张超刘天庆郭文华姜丽丽张文
- 关键词：脂肪干细胞细胞分化5-氮胞苷
- 包埋PLGA微球的可控释壳聚糖支架材料的研究被引量：5
- 2010年
- 为解决组织工程支架材料内部营养供应不足的问题,将营养物质包埋在聚合物微球内再植入支架,通过微球内营养物质的控制释放保持支架内部营养物质浓度的持续均匀性。以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为外包被材料,采用复乳法(w/o/w)制备聚合物微球,然后将该微球与壳聚糖溶液混合,冻干形成支架。以BCA法检测载药微球自身的释放情况以及其植入到支架后的释放情况,通过扫描电镜观察载药微球的结构以及其植入支架材料后结构变化。结果表明,微球形态圆整,粒径范围在27～55μm之间。壳聚糖支架呈多孔状结构,1%壳聚糖支架孔隙率、吸水率和降解率分别为(92.99±2.51)%、(89.66±0.66)%和(73.77±3.21)%。体外释放显示:微球可以持续释放所包埋的蛋白,突释较小,168h后PLGA微球的累积释放量为(20.24±0.83)%。电镜照片显示,微球植入支架后,与支架结合紧密,微球结构没有发生明显改变。168h后支架内部蛋白浓度为(11.44±1.81)×10-2mg·mL-1。相比传统靠外部培养基自由扩散到支架内部为支架内细胞供养的方法,营养物质或细胞因子包埋在控释微球中并与支架材料复合成可控释支架,可以长时间维持支架中这些因子的浓度均匀,从而为组织工程提供理想的支架材料。
- 宋克东刘天庆郭文华梅冠宇姜丽丽马学虎崔占峰
- 关键词：PLGA微球BSA
- 间接共培养环境下脂肪干细胞诱导分化的研究
- 2012年
- 目的肌腱病的治疗是临床的难点,脂肪干细胞(ADSCs)具有多向分化潜能,为肌腱病的治疗提供了新思路。此课题在体外构建ADSCs与肌腱细胞的间接共培养模式以探索其机制,为其临床应用提供参考。方法分别采集培养兔肌腱细胞和ADSCs及富血小板血浆(PRP)。选用孔径为0.4μm的共培养嵌盒和6孔板来构建间接共培养模式。分别将P3代肌腱细胞、ADSCs接种于内、外室,另外设置PRP干预组。分别在第3,7,14天时,收集各组内、外室细胞并进行观察及检测,分析间接共培养环境对ADSCs诱导分化与胞外基质表达产生的影响。结果间接共培养14 d,免疫组化结果显示单纯干细胞培养组ADSCs的Ⅰ型胶原与腱调蛋白(TNMD)的表达程度显著高于阴性的干细胞对照组,低于阳性肌腱细胞对照组,而PRP干预组的表达优于单纯干细胞实验组。结论间接共培养的环境下,可以诱导ADSCs上调Ⅰ型胶原和腱调蛋白的表达。PRP的干预对诱导ADSCs细胞外基质的分泌有促进作用。
- 庞坤曲鑫健郭文华王海孙玉波王子栋齐志明
- 关键词：脂肪干细胞肌腱细胞
- 人体吸脂源干细胞与脂肪细胞共培养的研究被引量：1
- 2010年
- 通过共培养人脂肪干细胞(hADSCs)与脂肪细胞来诱导hADSCs成脂分化。将hADSCs和脂肪细胞分别采用1:5、1:1、2:1和5:1共4个比例,在Transwell中进行共培养。共培养8d后,用油红O和台盼蓝对共培养后的hADSCs进行染色,显微镜下观察细胞形态及其成脂分化情况。此外,将共培养时间延长至20d,进行油红O和台盼蓝染色、流式细胞仪分析及hoechst33342/PI死活染色以检测其成脂分化情况。实验结果表明:油红O和台盼蓝染色结果显示共培养8dhADSCs具有较高活性,但并不能成脂分化;而油红O和台盼蓝染色及hoechst33342/PI死活染色结果显示共培养20d后,hADSCs亦具有高活性但仍不能成脂分化;然而流式细胞仪分析结果表明,共培养20d后hADSCs的CD105表达有所减弱。研究结果表明:hADSCs与脂肪细胞共培养尚不能促使hADSCs成脂分化。
- 宋克东郭文华刘天庆宁睿明鲍春雨马学虎
- 关键词：脂肪细胞脂肪干细胞共培养成脂分化
