金瑞良
- 作品数：9 被引量：36H指数：3
- 供职机构：同济大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项上海市科学技术委员会科研基金上海市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值。方法通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值。结果成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95%以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合。酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5%(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0%(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P<0.0001)。结论成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一。
- 王庆杨华金瑞良胡忠义刘忠华
- 关键词：重组蛋白质类细菌蛋白质类酶联免疫吸附测定
- 结核分枝杆菌分泌蛋白64抗体适体的获得及血清学检测被引量：8
- 2010年
- 指数级富集配体的系统进化 （ systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX） 技术筛选的适体具有可体外合成、纯度高、稳定性强和易于保存等特点，并已用于检测多种靶物质。目前利用适体检测MTB分泌蛋白64（MPT64）及模拟胸腔积液中γ干扰素含量已有报道，由于MPT64是结核病血清学诊断的重要抗原之一，
- 蔡江丽秦莲花刘忠华郑瑞娟金瑞良胡忠义
- 关键词：血清学检测分泌蛋白结核分枝杆菌适体抗体MPT64
- 脂阿拉伯甘露聚糖的提纯及其对肺结核的诊断价值被引量：2
- 2011年
- 目的初步建立提取纯化结核分枝杆菌(M.TB)脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomanan,LAM)的方法,并将其用于血清标本检测,评价其对肺结核的诊断价值。方法 M.TB菌体经冰浴超声破碎,乙醇回流,DNase I酶RNase酶除去DNA和RNA,热酚水法去蛋白,氯仿甲醇去酚和脂质,得到粗制的脂多糖。经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。将其作为抗原,通过免疫金渗滤法检测涂阳肺结核和对照血清标本中的LAM抗体。结果所得LAM经SDS-PAGE银染,与对照标准品大小一致,为37 kDa。血清LAM抗体检测对肺结核诊断的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、和涂片符合率分别为91.7%、87.8%、92.7%、86.2%、90.2%。结论成功提取到LAM抗原,用其检测血清结核抗体显示出理想的敏感性和特异性,有望成为结核病血清学快速诊断方法之一。
- 彭荣乐军金瑞良景玲杰韩敏
- 关键词：脂多糖类
- 结核分枝杆菌CFP10和MPT48及TB8．4融合蛋白的表达与临床应用被引量：3
- 2012年
- 目的构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8．4融合蛋白，评价其用于结核病血清学检测的价值。方法选取2008年上海市肺科医院肺结核患者150例，非结核肺部疾病患者70例，健康体检者103名，采集血清标本共323份。构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8．4融合表达载体。融合蛋白经免疫印迹分析后，采用酶联免疫吸附试验检测血清标本，运用Medcalc11．5对结果进行统计学分析。结果成功构建重组质粒pET21a—cfp10—mpt48-tb8．4，获得95％以上纯度的融合蛋白。免疫印迹法发现融合蛋白与血清抗体发生免疫反应。融合蛋白检测血清抗体敏感度56．7％（85／150），特异度90．8％（157／173），其中非结核病患者特异度为85．7％（60／70），健康体检者特异度为94．2％（97／103）。结论CFP10-MPT48-TB8．4融合蛋白所具有的免疫反应性，有可能成为结核病血清学诊断的候选抗原。
- 刘忠华杨华秦莲花金瑞良崔振玲郑瑞娟毕爱笑胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核细菌蛋白质类重组融合蛋白质类
- 分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究被引量：9
- 2009年
- 目的构建重组MTB分泌蛋白MPT64，制备多克隆抗体，评价其在鉴定MTB复合群中的应用价值。方法通过PCR扩增mpt64基因，构建pET21a—mpt64重组质粒；纯化重组蛋白并免疫兔制备多克隆抗体；纯化和标记抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法；检测分枝杆菌标准菌株和临床分离株培养液中MPT64蛋白，抽提样本基因组扩增mpt64基因。结果成功构建重组质粒，纯化重组蛋白并制备多克隆抗体，检测抗体浓度为0．85g／L，ELISA法检测敏感度为0．01mg／L，MTB复合群中H37Rv、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性，24株非MTB均为阴性；rapt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符。ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97．3％（110／113），57株非MTB均未检出MPT64蛋白，检测特异度为100．0％。基因扩增MTB中2株为阴性，非MTB均为阴性。结论采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群，是一种准确、快速和简便的方法，值得临床推广应用。
- 刘忠华秦莲花冯永红毕爱笑杨华丁元生崔振玲金瑞良郑瑞娟胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核分泌蛋白
- 结核分枝杆菌38kD-16kD融合蛋白克隆表达及血清学诊断价值被引量：11
- 2009年
- 目的构建重组结核分枝杆菌38 kD-16 kD融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法通过聚合酶链反应扩增获得16 kD和38 kD基因片段,分别连接到表达载体pET21a中,同时将2片段2次连接到表达载体pET21a中,形成38 kD-16 kD(3 816),16 kD,38 kD重组载体;经表达、纯化和复性后,通过Western blot分析,以酶联免疫吸附试验检测184例血清抗体,肺结核患者96例、非结核肺部疾病患者50例,正常对照38例。结果成功构建重组质粒pET21a-3816,表达蛋白经SDS-PAGE后显示相对分子质量约为65 kD,重组蛋白经镍柱纯化后,纯度均达90%以上;经Western blotting证实重组蛋白能与结核病患者血清反应;重组蛋白3816血清检测,其敏感性为80.2%(77/96),特异性为90.9%(80/88)。结论成功表达和纯化了3816融合蛋白,其对血清学检测证明重组融合蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一。
- 刘忠华丁元生毕爱笑冯永红金瑞良杨华秦莲花胡忠义
- 关键词：重组融合蛋白质类血清学试验
- DC-SIGN基因多态性与肺结核的相关性研究被引量：1
- 2010年
- 目的 研究DC-SIGN基因启动子区-871A/G和-336A/G位点多态性和结核病易感性之间的关系.方法 采用病例-对照研究方法,应用焦磷酸测序技术对237例结核病患者和244例健康对照者DC-SIGN基因-871和-336位点进行基因分型,x2检验分析这两个位点多态性与结核病发生的相关性以及与结核病临床特征之间的相关性.结果 DC-SIGN基因-871位点携带有G等位基因的A/G＋G/G基因型和不携带有G等位基因的A/A基因型在结核组的频率分别为37.6%、62.4%,在对照组为43.4%、56.6%,二者差别无统计学意义;-336位点携带有G等位基因的A/G＋G/G基因型和不携带有G等位基因的A/A基因型在结核组的频率分别为12.2%、87.8%,在对照组为14.3%、85.7%,二者差别亦无统计学意义.中国汉族人群DC-SIGN基因-871和-336位点的G等位基因频率分别为23.2%和7.3%.-336位点A/A和A/G基因型频率在结核发热病人中的差异具有显著性（P=0.037,OR=0.191,95%CI：0.040～0.907）.结论 中国汉族人群DC-SIGN基因-871和-336位点多态性与肺结核遗传易感性不相关,-336 G等位基因对于结核病人的发热可能具有保护作用.
- 郑瑞娟秦莲花王伟炳金瑞良冯永红崔振玲杨华刘忠华王洁陆俊梅胡忠义
- 关键词：结核易感性
- 结核分枝杆菌重组蛋白RV0222的表达及血清学鉴定
- 目的:构建结核分枝杆菌重组蛋白RV0222,评价其用于结核病血清学诊断的价值。方法通过聚合酶链反应从结核分枝杆菌中扩增Rv0222基因,插入pMD18-T载体后;亚克隆入表达载体pET30a中,经表达、纯化和复性后,通过...
- 刘忠华杨华金瑞良胡忠义
- 文献传递
- 杂环酮腙与类似物的合成及其对结核杆菌的抑制活性被引量：1
- 2015年
- 22个新的杂环酮腙及其类似物被合成,其对结核分枝杆菌菌株H37Rv的抑菌活性被测定.这些化合物都显示出抑菌活性.其中,化合物(1E,4E)-1,5-二(5'-溴-2'-噻吩基)-1,4-戊二烯-3-酮-(1',4',5',6'-四氢嘧啶基)腙(1d)的MIC90为2μg/m L,显示出最高的抑菌活性;同时该化合物对单耐异烟肼菌株242、耐多药菌株2312和广泛耐药菌株1220的MIC90值分别为0.25,1.0和0.5μg/m L,也表现出很好的抑菌作用.
- 李忠洲赵升李新军王翠翠姚璐璐金瑞良邹新琢
- 关键词：结核分枝杆菌抑菌活性
