闵平
- 作品数：16 被引量：257H指数：9
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 新城疫病毒F48E9株HN基因核苷酸序列被引量：11
- 1999年
- 本研究采用 Ｓａｎｇｅｒ＇ｓ 双脱氧末端终止法测定了新城疫病毒国内标准强毒株 Ｆ４８ Ｅ９ 血凝素神经氨酸酶基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的核苷酸序列，推导出其氨基酸序列。 Ｆ４８ Ｅ９ Ｈ Ｎ 基因编码区全长为 １７１３ｂｐ，单一的开放阅读框编码５７１ 个氨基酸的糖蛋白。含有６ 个潜在的与天门冬酰胺（ Ｎ）连接的复合寡聚糖和高甘露糖寡聚糖结合位点，其中有 ５ 个簇集在蛋白分子的 Ｃ末端一半内，有１３ 个半胱氨酸残基。发现６ 个 Ｆ４８ Ｅ９ 特有的氨基酸残基，３７ 位 Ｆ（ Ｌ）、３８ 位 Ｓ（ Ａ）、６０ 位 Ｌ（ Ｐ）、１０５ 位 Ｓ（ Ｎ）、４４３ 位 Ａ（ Ｔ）、５７１ 位 Ｉ（ Ｖ），这些位点除了 ６０ 位的 Ｐ有两株为 Ｓ以外，其它的在 １３ 株已知序列中均为高度保守序列。
- 曹殿军李波郭鑫苑纯秀闵平卢景良
- 关键词：新城疫病毒HN基因核苷酸序列
- 我国部分地区NDV的分子流行病学研究被引量：141
- 2001年
- 本研究根据新城疫病毒 (NDV)F基因编码区 1_374位核苷酸序列计算其遗传距离并绘制了NDV的系统发育进化树 ,将 6 8株NDV分为 9个基因型 (30株为国内分离株 ) ,其中Ⅰ～Ⅵ是早已存在的老基因型 ,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型 ,特别是Ⅸ为我国特有的基因型 (F48E9、M3、HLJ_3、HeB_1P和NM_5 )。 1997～ 1999年在我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的YN_1P、GX_3、H1、H2、P1、GX_1、GX_2、GS_2、GS_3、SHX_2、SHX_3、SHX_6、SHX_7、XJ_2和 1991年分离的HuB_1均属于Ⅶ基因型 ,该基因型的病毒是 90年代以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为 5个基因亚型 ,分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外HuN_1/ 98、HLJ_4/ 95和HeH_1P属一个老的基因Ⅵ ,1979～ 1985年分离自青海的QH_1、QH_2、QH_4属于一个新的基因型—Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的 ,既有老基因型的危险 (Ⅰ～Ⅵ ) ,又有新基因型 (Ⅶ )的流行 ,更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因型潜伏。
- 曹殿军郭鑫梁荣闫丽辉刘培欣闵平陈杰
- 关键词：新城疫病毒F基因系统发育进化树分子流行病学
- 鸡新城疫病毒东北地区分离株融合蛋白基因的克隆与鉴定被引量：1
- 1999年
- 以 Ｎ Ｄ Ｖ 东北地区分离株 Ｄ Ｂ３ 、 Ｄ Ｂ５ 的基因组 Ｒ Ｎ Ａ 为模板， 通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增其 Ｆ 基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ，并将其克隆到质粒ｐ Ｕ Ｃ１９ 中， 转化感受态大肠杆菌 Ｄ Ｈ５α， 经分子量比较、酶切分析、 Ｐ Ｃ Ｒ 等鉴定方法证明， 我们分别获得了含有 Ｎ Ｄ Ｖ Ｄ Ｂ３ 、 Ｄ Ｂ５ 株 Ｆ基因的阳性重组质粒。
- 苑纯秀曹殿军郭鑫闵平孔宪刚卢景良
- 关键词：新城疫病毒F基因克隆
- 我国部分地区NDV的分子流行病学研究
- 本研究根据新城疫病毒(NDV)F基因编码区1-374位核苷酸序列计算其遗传距离并绘制了NDV的系统发育进化树,将68株NDV分为九个基因型(30株为国内分离株),其中Ⅰ～Ⅵ是早已存在的老基因型,Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型...
- 曹殿军郭鑫梁荣闫丽辉刘培欣闵平陈杰
- 关键词：新城疫病毒F基因系统发育进化树分子流行病学
- 文献传递
- 伪狂犬病毒胸苷激酶基因变异引起的病毒致弱作用被引量：11
- 2001年
- 为揭示PRV tk基因结构与毒力的相互关系, tk基因结构变异对病毒生物学特性的影响和探讨病毒的致弱机理, 以伪狂犬病毒湖北株(PRV HB)为材料, 用BUdR诱变选择, 分离出BUdR抗性的PRV TK-突变株. 在对野毒株和TK-突变株tk基因克隆和测序的基础上, 分析比较了两种毒株tk基因的一级结构. 测定的PRV HB野毒株tk基因片段长1587 bp, GC含量为72.7%. 包含一个1098 bp的ORF. 编码366个氨基酸残基组成的蛋白. ORF内有2个137 bp核苷酸的重复序列, 两者以一个A连接. 测定的TK-突变株tk基因片段长1458 bp, 野毒株中137 bp重复序列之一和连接A被自然删除, 另有一个8核苷酸(GCGCGCCC)重复片段的插入, 其他所有核苷酸与野毒株一致. 在TK-突变株中因核苷酸片段的缺失和插入, tk基因发生移框突变, 导致转译提前终止, 不能产生有功能的TK蛋白. 氨基酸序列分析显示, PRV HB TK具有疱疹病毒TK共有的保守功能区并多出一个保守的DRH功能位点. 实验还证实, TK-突变株具有生物学遗传稳定性, 与野毒株比较, 其毒力显著降低. 用TK-突变株接种小鼠, 能诱导小鼠产生针对PRV强毒株致死攻击的有效保护.
- 潘兹书张楚瑜丁建华闵平
- 关键词：伪狂犬病毒胸苷激酶核苷酸序列基因变异猪传染病
- 新城疫病毒鹌鹑分离株融合蛋白基因的克隆与序列分析被引量：9
- 1999年
- 本研究以一株从自然发生新城疫病死的鹌鹑中所分离到的新城疫病毒（QNDV／89）为研究对象，用反转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）对QNDV／89株的F全基因进行分段扩增、定向克隆到pUC119载体后，采用Sanger’s双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列，并推导出相应氨基酸序列。QNDV／89株F基因全长1662bp，单一的开放阅读框编码553个氨基酸的多肽，其裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-R-R-F117，是NDV强毒株所特有的序列结构，这与其生物学特性及致病性实验结果是相一致的。序列分析结果表明，QNDV／89株与F48E9株的核苷酸同源率高达99.22％，氨基酸的同源率为98.37％;而与弱毒株LaSota的核苷酸同源率为88.93％，氨基酸的同源率为90.42％。本研究首次报道了流行于我国鹌鹑中的新城疫强毒融合蛋白基因序列，并与其它新城疫病毒进行了同源性比较，证明QNDV／89株核苷酸的变异引起了其蛋白质二级结构的部分改变。
- 郭鑫曹殿军闵平闫丽辉刘培欣房海卢景良
- 关键词：新城疫病毒鹌鹑分离株融合蛋白基因克隆
- 我国部分地区NDV的分子流行病学研究被引量：12
- 2000年
- 新城疫（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＤ）是由新城疫病毒（ＮＤＶ）引起的禽类的一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状的急性传染病，其病原——ＮＤＶ是副粘病毒科、副粘病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员，为有囊膜的负链ＲＮＡ病毒。ＮＤＶ基因组为单股不分节ＲＮＡ，编码六种病毒结构蛋白，其中融合蛋白（Ｆ）和血凝素－神经氨酸酶蛋白（ＨＮ）构成囊膜外表面的纤突，是ＮＤＶ的功能性糖蛋白，在致病和免疫应答过程中起重要作用［１］。由于ＮＤＶ只有一种血清型，对ＮＤＶ不同毒株的差异性分析只能采用毒力、蚀斑形成能力测定等功能性试验来进行，但分型要么太细，无规律可循；要么过于粗放，无流行病学意义，使得ＮＤＶ流行病学研究一直难以突破。 近年来，随着分子生物学技术的广泛应用，使得人们在分子水平上对病毒遗传变异机制的研究取得了长足进展，发现病毒的遗传变异与疾病的流行有着密不可分的联系，并形成了病毒分子流行病学这样一门崭新学科，也为ＮＤ的流行病学研究提供了一种先进技术。已有研究表明，ＮＤＶＦ基因的遗传变异与ＮＤＶ的变异和流行密切相关，是ＮＤＶ分子流行病学研究的首选基因。
- 曹殿军郭鑫梁荣闫丽辉刘培欣闵平陈杰
- 关键词：新城疫病毒F基因系统发育进化树分子流行病学
- 表达猪瘟病毒E2基因和gfp报道基因的伪狂犬病病毒双基因转移载体的构建被引量：14
- 2002年
- 将以PRVgG为启动子 ,SV4 0polyA为加尾信号的CSFVE2表达盒克隆于包含伪狂犬病病毒 (PRV)tk基因和gH基因片段的重组质粒pTK2 .5 ,替换掉tk基因的SalⅠ与XhoⅠ酶切位点之间的序列 ,构建了携带CSFVE2基因的转移载体pTKE2 免疫荧光检测证实 ,转染BHK2 1细胞的pTKE2在感染PRV的情况下 ,能表达E2蛋白 采用特异性引物PCR方法扩增gfp表达盒 ,对酶切位点进行改造 ,将其克隆到pTKE2的SalⅠ位点 ,构建了用PRVgG启动子和HCMVIE启动子分别控制E2基因和gfp基因表达、两基因取向相反的双基因转移载体pTKE2 .GFP 将双基因转移载体pTKE2 .GFP转染BHK2 1细胞中 ,12h后在荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的GFP表达 。
- 潘兹书张楚瑜陈玉栋闵平
- 关键词：伪狂犬病毒E2基因
- 新城疫病毒F48E9株融合蛋白基因核苷酸序列分析被引量：9
- 1999年
- 通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。Ｆ基因全长为１６６２个ｂｐ，单一的开放阅读框编码５５３个氨基酸的多肽。Ｆ蛋白的疏水构型有三个强疏水区；其裂解位点的氨基酸序列为１１２Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｒ－１１６Ｒ－１１７Ｆ；Ｆ蛋白上共有１２个Ｃｙｓ残基位点和五个潜在糖基化位点。
- 曹殿军苑纯秀郭鑫闵平闵平卢景良
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白基因核苷酸序列
- 新城疫病毒F48E9株F基因主要功能区的核苷酸序列分析被引量：17
- 1999年
- 本试验首先以ＮＤＶＦ４８Ｅ９株的基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ第一链，再通过ＰＣＲ技术扩增Ｆ基因的ｃＤＮＡ，然后将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等方法证明，我们已经获得了ＮＤＶＦ４８Ｅ９株Ｆ基因的阳性克隆。经初步序列分析，ＦＡ段核苷酸序列与参考株（Ｄ２６／７６）序列同源性为８９％，ＦＢ段同源性为９１％。二者的氨基酸序列表明，Ｆ４８Ｅ９株Ｆ蛋白裂解位点与其它强毒株裂解位点氨基酸组成相同，即１１２ＲＲＱＲＲ１１６Ｆ１１７。这两段序列中包含的三个Ｃｙｓ残基和三个潜在的糖基化位点都相当保守。
- 苑纯秀曹殿军郭鑫闵平卢景良
- 关键词：新城疫病毒F基因克隆
