陈宇萍
- 作品数：67 被引量：182H指数：9
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 长效重组人超氧化物歧化酶的研制及其辐射防护作用
- 1994年
- 选用无毒、无免疫原性的高分子化合物聚乙二醇(PEG)为修饰剂,以活性酯法制备出PEG- 重组人超氧化物歧化酶(PEG-rh SOD)共价结合物.修饰酶的生物半衰期为15h,比修饰前延长了90倍,对酸、碱、热的耐受力明显高于修饰前.用照射小鼠的活存率评价了PEG-rhSOD的辐射防护作用.小鼠受8.5Gy γ射线照射前1h腹腔注射30万U/kg PEG-rh SOD,可提高活存率42%,与未修饰的rhSOD相比,活存率提高14%.实验仍在进行中.
- 骆训懿王晶翼周丽君陈宇萍陈晓穗朱迎春刘晓琳谢邦铁李战青
- 关键词：超氧物歧化酶
- 抗人重组铜-锌超氧化物歧化酶单克隆抗体的制备及其在纯化抗原中的应用
- 1994年
- 利用重组质粒pCZS转化大肠杆菌,制备出人重组铜-锌超氧化物歧化酶(rhCu-Zn SOD),进一步建立了3株鼠抗rhCu-Zn SOD的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株.经鉴定,它们分泌的McAb分别属于IgG_1和IgG_2a亚类,能特异性地识别人Cu-Zn SOD,与pCZS空载菌蛋白无交叉反应.将此McAb制备了免疫亲和层析柱,从大肠杆菌的粗提液中纯化出rhCu-Zn SOD,十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胶凝胺电泳(SDS-PAGE)显示单一条带,纯度>98%,回收率50%,酶比活达10 971.3 U/mg蛋白,rhCu-Zn SOD McAb的制备为Cu-Zn SOD产品的纯化、分析及作用机理研究等提供了有力的工具.
- 陈晓穗王晶翼骆训一谢邦铁刘晓琳赵丽朱迎春周丽君陈宇萍李战青
- 关键词：单克隆抗体超氧物歧化酶铜锌
- 半合成抗体库的构建及鉴定被引量：24
- 1999年
- 目的构建半合成抗体库，不经免疫制备抗体。方法通过ＰＣＲ法，从人胎肝ＤＮＡ扩增基因组ＶＨ段基因，从Ｆｄ基因制备含有不同长度随机化ＣＤＲ３的ＦＲ３－ＣＤＲ３－Ｊ－ＣＨ１片段，然后用重叠ＰＣＲ法构建Ｆｄ库，与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库。结果通过各种组合多次建库，获得总容量为４×１０８的半合成抗体库，其Ｆｄ段和轻链基因的重组率均大于９０％，Ｆａｂ表达率为５０％。挑选２０个克隆测定ＣＤＲ３序列符合所设计的随机序列，用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体。
- 王琰化冰刘群英陈宇萍朱迎春
- 关键词：基因文库抗体生成
- 抗原表位定向选择的人源抗TNF-α Fab的鉴定被引量：4
- 1999年
- 目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列，用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ，用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性，并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同，属人ＶＨⅠ亚群；Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群；竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位；体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性；该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。
- 王卓智王琰李竞刘群英化冰陈宇萍朱迎春李振甫董志伟
- 关键词：肿瘤坏死因子EGS
- 抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达被引量：1
- 2005年
- 目的克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达。方法用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和κ链的基因,重组到Fab表达载体中,在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab;根据前导肽序列设计引物,通过PCR介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列;以NIH3T3/erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到Fd段和κ链的基因,在大肠杆菌中表达出Fab段抗体但无特异性抗原结合活性,分别将Fd段和κ链V区基因的氨基端序列矫正为亲本单抗的原始序列后,恢复了Fab段的抗原结合活性。单独恢复Fd段可变区氨基端序列可恢复抗原结合活性。但同时恢复κ链后活性却有所下降。结论成功构建了抗p185小分子抗体Fab并进行功能性表达,为进一步构建抗p185鼠单抗其他小分子抗体及其人源化改造打下基础;进一步证实抗体氨基端序列对抗体活性的重要性,为今后以PCR方法构建小分子抗体的工作提供了有益的借鉴。
- 张国民陈宇萍王琰乔媛媛安云庆
- 关键词：FAB可变区基因
- 抗乙肝病毒表面抗原单链抗体在大肠杆菌中的高效表达被引量：2
- 1999年
- 目的：在大肠杆菌中高效表达抗乙肝表面抗原的单链抗体。方法：通过ＰＣＲ将单链抗体基因重组到原核细胞表达载体ｐＴ７中，构建单链抗体高效表达载体ｐＴ７ＳＣ。将ｐＴ７ＳＣ质粒转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导进行表达。结果：获得了ＳｃＦｖ的高效表达，表达产物占菌体总蛋白的２８％以上。竞争抑制性ＥＬＩＳＡ检测诱导后的细菌培养上清，证明所表达的ＳｃＦｖ具有抗体活性。进一步将ｃＭｙｃ十肽连接在ＳｃＦｖ的羧基端，使所表达的ＳｃＦｖ易于检测。结论：在大肠杆菌高效表达抗乙肝ＳｃＦｖ。
- 高荣凯王琰刘群英朱迎春化冰陈宇萍
- 关键词：单链抗体HBSAG乙型肝炎大肠杆菌
- 六亚甲基二乙酰胺诱导人粘液表皮样癌MEC－1细胞分化实验研究被引量：1
- 1994年
- 六亚甲基二乙酰胺诱导人粘液表皮样癌ＭＥＣ－１细胞分化实验研究陈宇萍，司徒镇强，吴军正，李波本实验用一定浓度的六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）体外作用于ＭＥＣ－１细胞，探讨ＨＭＢＡ对人粘液表皮样癌细胞有无诱导分化作用，为进一步研究人粘液表皮样癌的分化和治疗...
- 陈宇萍司徒镇强吴军正李波
- 关键词：粘液表皮样癌MEC-1细胞
- 自身抗体对干燥综合征诊断意义的研究进展被引量：4
- 2011年
- 干燥综合征（SS）是一种全身自身免疫性疾病，我国人群患病率为0．3％-0．7％，老年人群中患病率为3％-4％，临床主要表现为口干、眼干，全身症状可有乏力、低热、关节痛、皮疹，30％～50％患者有肾损害，还可表现为消化不良、肝硬化、周围神经炎、甲状腺功能低下、
- 陈宇萍冯孟哲
- 关键词：干燥综合征自身抗体
- BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其人源抗体的筛选
- 2007年
- 杀菌／渗透增强蛋白（bactericidal／permeability increasing protein，BPI）是存在于人及哺乳动物多形核白细胞中的一种阳离子抗菌蛋白。研究证实BPI功能性氨基端片段（rBPl2。／rBPl23）具有与天然BPI55，相同的生物学活性，它们不仅能广谱杀伤G^-菌还能有效中和内毒素。
- 张国民陈宇萍乔媛媛王琰赵晓航安云庆
- 关键词：BPI人源抗体抗原表位PROTEINN端多形核白细胞
- 从噬菌体抗体库筛选人源性抗白细胞介素8抗体被引量：9
- 2005年
- 目的: 从噬菌体抗体库中筛选人源性抗IL- 8单链抗体(scFV)。方法: 采用原核表达载体pRSET- IL- 8在大肠杆菌BL21(DE3)中表达IL- 8 His融合蛋白, 并通过亲和层析纯化。以该融合蛋白为固相抗原, 对噬菌体抗体库进行 3轮淘筛, 并对所获阳性克隆进行抗原结合活性测定和DNA序列测定。结果: 获得 2株特异性抗IL- 8噬菌体抗体。对其DNA序列测定结果表明, 其VH基因均属于人IgGVH3亚群, Vλ基因分别属于人VλDPL5和VλDPL2亚群。结论: 利用噬菌体抗体库技术可不经免疫制备人源性抗IL- 8抗体, 为银屑病及相关疾病的临床应用提供了条件。
- 王雷乔媛媛王刚陈宇萍杨军王琰刘玉峰
- 关键词：噬菌体抗体库白细胞介素8
