目的:对比观察人羊膜(human amniotic membrane,HAM)脱细胞处理前后的形态结构变化,为人脱细胞羊膜(human acellu-lar amniotic membrane,HAAM)作为良好的生物支架材料提供依据。方法:取健康剖宫产孕妇的胎盘,剥离获取HAM,行HE染色、透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、上皮面与基质面扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)检测;将HAM经物理和胰蛋白酶等脱细胞处理后获得HAAM,亦行HE染色、TEM、上皮面与基质面SEM检测;最后将检测结果进行对比观察。结果:通过HE染色表明HAM的细胞成分去除干净;TEM断面观察HAAM表明其富含大量密集的呈点状、线状及条索状的纤维成分;SEM观察表明HAAM的上皮面与基质面呈现不同的三维结构,未见胶原纤维和网状纤维断裂。结论:HAM经脱细胞处理制备的HAAM,既去除了可引起移植排斥反应的细胞成分,又保存了完整的三维结构,为良好的生物支架材料。
目的观察超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)标记的自体BMSCs在兔椎间盘内的存活时间,为后期采用转染成功的BMSCs预防椎间盘退变提供依据,并观察其迁移规律。方法8～10周龄日本大耳白兔12只,雌雄不限,体重1.5～2.0kg,取4mL骨髓密度梯度离心法行BMSCs分离、培养。取第3代BMSCs(1×106个)用SPIO(25μg/mL)标记,普鲁士蓝铁染色检测标记效率,透射电镜观察标记细胞,锥虫蓝染色鉴定标记细胞活力,MTT法测定标记细胞及未标记细胞增殖,并绘制生长曲线。将12只兔随机分为实验组(n=8)和对照组(n=4),分别于L1、2、L2、3、L3、4、L4、5注入标记和未标记自体BMSCs悬液20μL(细胞浓度均为5×105个/mL),术后2、4、6、8周实验组和对照组分别取2只和1只动物处死,取相应椎间盘行普鲁士蓝铁染色观察细胞是否存活以及分布。结果第3代BMSCs经SPIO标记后,普鲁士蓝铁染色标记效率为95.65%±1.06%;透射电镜观察示细胞质内有电子高密度铁颗粒;锥虫蓝染色示细胞活力为98.28%±0.85%;MTT检测显示7d内未标记细胞组和标记细胞组间细胞增殖比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组细胞移植术后8周,仍可观测到位于细胞质内的蓝染颗粒。对照组未见蓝染颗粒。结论SPIO可以安全、有效地标记BMSCs,并能在体内持续存活8周。
