韩佩君
- 作品数：15 被引量：8H指数：2
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国肝炎防治基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。
- 乔卿华吕欣雷迎峰杨敬姚敏韩佩君党品香赵海卫翁代慧尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞株慢病毒
- 丙型肝炎病毒NS3／4A丝氨酸蛋白酶活性测定方法研究进展
- 2012年
- 丙型肝炎病毒（HCV）NS3／4A丝氨酸蛋白酶在病毒多聚蛋白体加工和RNA复制的过程中发挥着重要作用，是治疗HCV的理想靶点。因为NS3／4A丝氨酸蛋白酶在HCV多聚蛋白上负责四个位点的切割，所以可根据此特性设计其活性的测定方法。此文就目前应用于NS3／4A丝氨酸蛋白酶活性测定的方法进行综述，以期为筛选有效的抑制剂提供技术帮助。
- 韩佩君尹文
- 关键词：肝炎病毒丝氨酸内肽酶类
- gas6基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定
- 2016年
- 目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据Gen Bank中小鼠gas6基因序列设计并合成上下游引物,以MSCs提取的m RNA制备的c DNA为模板扩增gas6基因片段,克隆入慢病毒表达载体,获得Lenti-gas6-GFP-zeocin质粒并测序鉴定;采用三质粒包装系统(穿梭质粒p Lenti-gas6-GZ、包装质粒p SPAX2和p MD2.G)包装慢病毒,并验证其表达目的基因情况;将浓缩的慢病毒离心感染第4代MSCs,用吉欧霉素(zeocin)筛选培养后获得稳定表达GAS6的MSCs,采用流式细胞术检测其阳性率以及表面标志分子表达情况。结果:构建了携带gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修饰的MSCs。结论:慢病毒载体可介导gas6基因在小鼠MSCs中过表达,且不会干扰MSCs的生物特性,为进一步研究gas6基因修饰的MSCs的治疗作用奠定了实验基础。
- 边培育叶传涛韩佩君董阳超叶伟马宏炜陈何嵩张芳琳雷迎峰贾战生
- 关键词：慢病毒载体骨髓间充质干细胞
- HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶活性测定方法研究进展
- HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在病毒蛋白前体加工、成熟和复制过程中起着关键作用,抑制其酶活性,病毒即失去了复制增值的能力,是抗HCV治疗公认的理想靶点。由于NS3/4A丝氨酸蛋白酶具有特异酶切位点,所以可依据此特点来设...
- 韩佩君尹文
- 丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建
- 2015年
- 目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。
- 赵海卫韩佩君姚敏吕欣雷迎峰杨敬乔卿华翁代慧党品香尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒转基因小鼠模型
- HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建
- 目的 构建表达HCV NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法 显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠；通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6...
- 赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒动物模型
- 萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用被引量：1
- 2015年
- 萤光素酶是一类在氧气存在下能催化其底物特异性发光的酶,检出灵敏度高、特异性强。萤光素酶催化底物发光因无须外源光的激发,避免了非特异性干扰,具有其他报告基因不可替代的优势。萤光素酶基因作为报告基因已成为医学科学研究领域的重要标记工具,具有良好的应用前景。我们简要综述了萤光素酶报告基因在病毒学研究中的应用进展。
- 赵海卫韩佩君吕欣尹文
- 关键词：萤光素酶报告基因病毒
- HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建
- 目的：构建表达HCV NS3-5B 蛋白的转基因小鼠模型。方法：显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B 载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B 转基因小鼠;通过血清ALT、AST 检测和肝脏HE...
- 赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文
- 关键词：丙型肝炎病毒动物模型
- DDX50抑制2型登革病毒复制的作用机制研究
- 韩佩君雷迎峰吕欣叶伟马宏炜徐志凯张芳琳
- 用于病毒研究的人源化小鼠研究进展被引量：1
- 2014年
- 人源化小鼠从起初的人-鼠嵌合体到目前具有人体免疫活性的模型不断演进,已用于人免疫缺陷病毒、EB病毒、丙型肝炎病毒和登革病毒等病原体的感染、发病机制和防治的研究,取得了很大进展。我们简要介绍几种有代表性的人源化小鼠模型及其在病毒研究中的应用。
- 乔卿华韩佩君汪爱勤尹文
- 关键词：病毒免疫反应
