颜超
- 作品数：23 被引量：46H指数：4
- 供职机构：徐州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学农业科学更多>>
- 刚地弓形虫Peroxiredoxin基因的克隆及其融合蛋白的高效表达和纯化
- 2012年
- 目的克隆刚地弓形虫Prx基因,用IPTG诱导表达Prx融合蛋白并进行纯化。方法用PCR扩增目的基因片段并克隆至pGEX-6P-1载体,构建pGEX-6p-1/TgPrx原核表达载体;IPTG诱导表达Prx融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,GST亲和层析纯化融合蛋白。结果从弓形虫RH株DNA中扩增Prx基因,成功构建了弓形虫重组质粒pGEX-6p-1/TgPrx,并在大肠埃希菌(E.coli)中得到高效表达,表达的融合蛋白分子质量为51ku,该蛋白可被鼠抗弓形虫血清特异性识别。结论原核表达具有生物学活性的弓形虫重组Prx蛋白(rTgPrx),该蛋白有望用于弓形虫病免疫学检测。
- 李雪艳刘转转付琳琳颜超杜文平汤仁仙郑葵阳刘宜升
- 关键词：刚地弓形虫原核表达蛋白纯化
- 库普弗细胞在小鼠日本血吸虫肝病发展过程中的表型变化被引量：4
- 2017年
- 目的研究库普弗细胞(Kupffer cell)在小鼠日本血吸虫(Schistosoma japonicum)肝病发展过程中的表型变化。方法将20只6周龄的BALB/c雄性小鼠经腹部皮肤感染16条日本血吸虫尾蚴,在感染后0、21、32、42、52 d分别处死小鼠,取肝脏组织,HE染色和Masson三色染色观察肝脏病理变化,实时定量PCR(q PCR)检测肝脏Th1型细胞因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、α肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Th2型细胞因子白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-13、IL-10)以及库普弗细胞的M1型巨噬细胞分化标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthetase,i NOS)、白细胞分化抗原16(cluster of differentiation 16,CD16)、IL-6和M2型巨噬细胞分化标志物精氨酸酶-1(arginase 1,Arg-1)、CD206、IL-10的表达。体外培养库普弗细胞系,分别给予0、5、25、50 ng/ml IFN-γ或IL-4刺激12 h,或者给予25 ng/ml IFN-γ或IL-4分别刺激0、12、24、36 h后,q PCR检测库普弗细胞M1型、M2型巨噬细胞分化标志物。结果HE染色和Masson三色染色结果显示,小鼠感染后32 d肝组织中开始有虫卵沉积,42 d有明显的肉芽肿和纤维化病变。q PCR结果显示,与感染后0 d相比,IFN-γ在32 d表达水平最高,相对表达量为29.243±3.245,52 d时迅速下降,为8.923±3.002。IL-4在42 d最高,为25.521±4.957。IL-13在52 d最高,为50.793±9.631(均P<0.05)。i NOS在42 d表达水平上升,相对表达量为2.950±0.321,在52 d下降,为1.783±0.319。Arg-1在52 d最高,为2.003±0.152(均P<0.05)。0、5、25、50 ng/ml IFN-γ刺激库普弗细胞12 h后,i NOS、IL-6和CD16的相对表达量分别为54.690~68.577、1.887~2.427、2.417~2.787(均P<0.05)。25 ng/ml IFN-γ刺激0、12、24、36 h后,i NOS、IL-6和CD16的相对表达量分别为34.810~109.210、10.327~15.143、1.887~3.317(均P<0.05),而Arg-1与对照组相比无明显变化。0、5、25、50 ng/ml IL-4刺激库普弗细胞12 h后,Arg-1、IL-10和CD206的相对表达量分别为9.153~24.2
- 孙悦郑葵阳何兴雷南行颜超汤仁仙
- 关键词：血吸虫病肉芽肿纤维化库普弗细胞
- 徐州地区猫源弓形虫虫株的分离与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的获得徐州地区猫源弓形虫虫株,了解徐州地区流浪猫弓形虫感染情况。方法捕捉徐州地区流浪猫,收集血清后,用ELISA试剂盒检测弓形虫特异性Ig G抗体;同时将猫的心、脑、舌用盐酸-胃蛋白酶溶液消化处理后接种小鼠,经连续传代分离弓形虫虫株,采用特异PCR法对所分离的虫株进行鉴定。结果共捕捉41只流浪猫。从猫体内共分离到弓形虫虫株11株,PCR均扩增出弓形虫特异性条带;ELISA结果表明41.5%的流浪猫均能检测到弓形虫抗体。结论徐州地区流浪猫弓形虫感染较为严重,有可能成为人和其它动物弓形虫病的重要传染源,应引起相关部门的重视。
- 付琳琳颜超刘转转孔德龙吕梁师娜
- 关键词：弓形虫流浪猫
- 甘西鼠尾草总酚酸提取物抗嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞氧化应激损伤被引量：2
- 2016年
- 目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)在体内和体外对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病大鼠足细胞以及PAN诱导小鼠足细胞氧化应激损伤的作用。方法 (1)建立PAN肾病大鼠动物模型,给予SPE和他克莫司干预,分别在第5、10、15、21天留取肾组织标本,WT1染色计数足细胞数目,免疫荧光观察8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)荧光强度。(2)体外采用PAN致足细胞损伤模型,PAN作用小鼠足细胞24h,分别加入含SPE、丹酚酸B(SalB)、迷迭香酸(RA)及他克莫司的培养基培养6、12、24、48h,观察足细胞骨架相关蛋白F-actin的表达,流式细胞仪分析细胞内活性氧(ROS)荧光强度。结果 (1)肾小球WT1细胞计数结果显示,PAN组第5天时足细胞数已开始下降,第15天达(14.4±0.7)个/肾小球切面,较正常组(37.2±1.5)个/肾小球切面减少(P<0.05),SPE组与阳性对照组(他克莫司组)各时间点足细胞数量高于PAN组;第15天时,阳性对照组肾小球WT1细胞计数与SPE高剂量组较为接近(P>0.05)。第5天时PAN组大鼠肾组织8-OHdG荧光强度较正常组增强,第10天上升至高峰,而后开始减弱,第15天时仍高于正常组;给予药物干预后,大鼠肾组织的8-OHdG荧光强度降低,其中阳性对照组与SPE高剂量组8-OHdG荧光强度较为接近。(2)体外研究发现,PAN作用24h后,F-actin几乎完全解聚,少数细胞尚有残存的被切断的丝状结构,给予SPE、SalB、RA及他克莫司治疗后,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,细胞内重新出现极性分布的微丝。与正常组相比,PAN作用小鼠足细胞24h后ROS荧光强度增加(P<0.05)。给予药物干预后足细胞内ROS荧光强度降低,24hSPE低剂量组、SalB高剂量组和RA高剂量组与阳性对照组足细胞内ROS的荧光强度降低程度相近(P>0.05),24hSalB降低足细胞内ROS荧光强度效果优于RA,且与药物剂量呈正相关。结论本研究从体内及体外证实,SPE对PAN所致足细胞氧化应激损伤具有保护作用。
- 刘翔任红旗杨阳戴德淑柳云李向阳颜超华慧刘瀛戴春尹忠诚汤仁仙
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷足细胞甘西鼠尾草8-羟基脱氧鸟苷
- 华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆、表达及免疫原性分析被引量：3
- 2015年
- 目的：克隆表达华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白（ Clonorchis sinensisfatty acid binding protein，CsFABP），并对其免疫原性进行分析。方法根据编码CsFABP的已知基因序列设计合成一对引物，应用RT－PCR技术扩增编码CsFABP的基因片段。将扩增的CsFABP的基因片段克隆到原核质粒pET30a（＋）中，转化入大肠埃希菌（ E． coli） DH5α中，经含卡那霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒，经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。将阳性重组质粒转化入E．coli BL21中，经异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导表达，表达产物经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ SDS－PAGE）、考马斯亮蓝染色、Western blot分析鉴定。结果经酶切、菌液PCR以及测序确认，成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，并在E．coli BL21中高效表达。 Western blot试验证实表达的Cs-FABP能被特异的兔抗华支睾吸虫免疫血清识别。结论本研究成功构建重组质粒pET30a（＋）－CsFABP，获得的CsFABP表达蛋白质具有一定的反应原性。
- 张波张蓓蓓李波华慧李向阳刘转转颜超付琳琳汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫脂肪酸结合蛋白原核表达免疫原性
- 华支睾吸虫感染FVB小鼠的试验研究被引量：4
- 2016年
- 为了观察华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏组织病理变化,将12只健康雌性FVB小鼠随机分成2组,分别为正常组与感染组,每组6只。感染组小鼠经口灌饲45个华支睾吸虫囊蚴。于感染后25d用NaOH消化法检测粪便虫卵阳性率,感染后第112天收集肝脏组织,进行HE染色及Masson染色观察肝脏病理变化情况;收集外周血,ELISA检测血清中华支睾吸虫特异性IgG抗体。虫卵检查结果显示,感染组小鼠在感染后25d检查到虫卵,肉眼观察小鼠肝小叶边缘有白色结节样病变,肝脏表面有白色透明水泡。感染组小鼠血清中华支睾吸虫特异性IgG水平显著高于正常组(P<0.01)。HE染色观察小鼠肝脏组织,见到虫体,炎症细胞浸润严重,纤维化明显并伴有点状坏死。肝细胞肿胀,肝窦狭窄,胆管扩张增生显著,胆管上皮细胞水肿、坏死,部分胆管上皮细胞胞浆均质红染。Masson染色显示肝脏组织尤其是虫体周围出现大面积纤维化。试验结果表明,华支睾吸虫感染FVB小鼠肝脏病变严重,因此可利用该品系小鼠建立华支睾吸虫感染模型,为深入研究华支睾吸虫的致病机制奠定基础。
- 张蓓蓓张波沈莉萍李波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫肝脏病理变化
- 细粒棘球蚴慢性感染阶段小鼠血清中炎症因子的变化及意义被引量：5
- 2016年
- 目的研究细粒棘球蚴慢性感染阶段小鼠血清中细胞因子水平的变化,探索机体对抗寄生虫感染的免疫应答机制。方法从病羊内脏分离细粒棘球绦虫原头节,注射入BALB/c小鼠腹腔（2 000个原头节/只）,建立细粒棘球蚴感染小鼠模型,对照组小鼠腹腔注射等体积PBS。于感染5个月后,采集对照及感染组小鼠血清,采用流式液相多重蛋白定量技术检测血清中多种细胞因子水平并分析。结果感染组小鼠腹腔、肝脏、肺脏等部位均出现多个单一性包囊;其血清中IL-17A、IL-6、IFN-γ、MCP-1、IL-12P70、TNF-α等炎症因子水平均显著高于对照组（t=2.713～9.255,P均〈0.05）;而抑炎因子IL-10水平亦显著升高（t=3.936,P〈0.001）。结论细粒棘球蚴慢性感染阶段小鼠体内炎症因子水平较高,有助于抑制虫体生长。
- 潘伟李向阳孙芬芬郝文婷秦苏萍颜超汤仁仙沈玉娟郑葵阳
- 关键词：细粒棘球绦虫原头节炎症因子
- CBL模式在留学生医学微生物学教学中的思考被引量：10
- 2016年
- 结合留学生群体的特点分析我国医学留学生教学现状,借鉴本教研室CBL教学经验,提出在留学生医学微生物课程中实践CBL教学的设想,为今后CBL教学模式在留学生教育中的推广提供参考。
- 于倩尤红娟颜超汤仁仙
- 关键词：留学生医学微生物学CBL
- PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝纤维化模型中的表达及意义被引量：5
- 2016年
- 目的探讨脂酰肌3激酶-蛋白激酶B-雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)在华支睾吸虫感染小鼠致肝纤维化作用。方法 6周龄雌性C3H/HeN小鼠随机分为正常对照组和华支睾吸虫感染组,感染组每只小鼠经口灌胃45个华支睾吸虫囊蚴,对照组每只小鼠经口灌入等量的生理盐水,感染28d后取出小鼠肝脏组织,Masson染色,观察病理变化;免疫组织化学染色检测肝脏组织中α-SMA和p-mTOR蛋白的定位与表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肝脏组织中α-SMA、COL1和TGF-βmRNA表达水平;Western blot法检测小鼠肝脏组织中TGF-β、α-SMA、pPI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平。结果成功建立小鼠肝纤维化模型。与对照组相比,感染组小鼠肝脏的胶原沉积显著增加,α-SMA及p-mTOR阳性细胞数量显著增多(t=-8.374,P<0.01;t=-9.545,P<0.01),α-SMA、COL1、TGF-βmRNA(t=-3.553,P<0.01;t=-3.448,P<0.01;t=-3.052,P<0.01)以及α-SMA、TGF-β、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达水平显著升高(t=-7.076,P<0.01;t=-5.054,P<0.01;t=-6.941,P<0.01;t=-8.123,P<0.01;t=-7.445,P<0.01)。结论 PI3K/AKT/mTOR在华支睾吸虫感染小鼠肝脏高度表达,因此推测该信号通路在华支睾吸虫感染致肝纤维化中发挥重要作用。
- 李波王海玉沈莉萍方凡程晓丹张蓓蓓张波颜超汤仁仙郑葵阳
- 关键词：华支睾吸虫小鼠肝纤维化
- 甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷大鼠足细胞损伤的保护作用
- 2015年
- 目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:建立PAN肾病大鼠动物模型,给予他克莫司和SPE干预治疗,分别在第5、10、15、21天留取血尿标本,同时采用肾组织病理观察大鼠肾小球组织形态学改变,透射电镜观察肾小球足细胞超微结构改变,并分别从mRNA和蛋白水平分析足细胞裂孔膜蛋白的表达水平。结果:(1)除正常组外,各组大鼠尿蛋白定量第5天时已明显升高,第10天上升至高峰,而后开始下降,第15天时仍明显高于正常。给予药物干预后,可降低大鼠的尿蛋白排泄量,且阳性对照组与SPE高剂量组降低尿蛋白的程度较为接近。(2)光镜下未见肾小球形态异常。电镜结果显示第5天时已出现肾小球足细胞足突融合,第10天时足突融合最明显,随后开始恢复,第21天基本恢复正常;SPE高剂量组和阳性对照组的足突融合程度较轻。(3)阳性对照组和SPE组大鼠的nephrin、podocin蛋白表达水平高于模型对照组。第5天时各组大鼠蛋白表达低于正常,第10天时下降更为明显,第15天蛋白表达已开始回升,至第21天时恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组大鼠蛋白表达均明显高于其余三组。(4)大鼠nephrin、podocin的mRNA表达量在第5天时已下降,至第10天明显下降至最低水平,而后开始上升,直至第21天恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组的表达水平明显高于其他各组(P<0.05)。结论:SPE对PAN大鼠肾小球足细胞损伤有一定的保护作用,可降低PAN大鼠蛋白尿。
- 戴德淑刘翔杨阳周璇骆晓梅袁飞蔡青赵勇王增慧李向阳颜超汤仁仙任红旗
- 关键词：嘌呤霉素氨基核苷足细胞
