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高永华: 作品数：10 被引量：33H指数：3; 供职机构：广西水产研究所更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划广西壮族自治区自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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凡纳滨对虾良种培育研究进展被引量：17: 2011年; 凡纳滨对虾是世界养殖范围最广、产量最高的三大对虾之一,其良种培育对发展对虾养殖产业具有重要现实意义。文章从遗传育种、分子标记辅助育种、细胞工程育种、基因工程育种、种间杂交等方面,总结分析了凡纳滨对虾良种培育的理论和实践,并针对当前凡纳滨对虾良种培育存在基础研究落后于应用研究、多性状复合育种尚未取得关键性突破、育种工艺不足、种质资源匮乏、数量遗传学应用不够等问题,提出在改良和培育遗传性状稳定的优良品种时,灵活运用多学科知识和多种现代科学技术,即高新技术与常规选择育种相互配合的综合育种技术,是今后凡纳滨对虾新品种培育技术发展的必然趋势。; 熊建华赵永贞高永华谢达祥张彬陈晓汉; 关键词：凡纳滨对虾良种培育分子标记 QTL 标记辅助育种

凡纳滨对虾TRAP-PCR分子标记体系的建立: 2010年; 本研究首次将新型分子标记-靶位区域扩增多态性（target region amplified polymorphism,TRAP）引入到南美白对虾育种研究中,通过分析比较了模板DNA、PCRMIXbuffer、引物浓度以及循环参数等对TRAP-PCR扩增结果的影响,优化建立了南美白对虾TRAP-PCR反应体系。应用这个体系筛选得到了12个随机引物,这些引物与特异基因设计的特定引物组合后扩增能得到条带丰富的图谱。对扩增的带谱进行统计结果显示平均每个引物扩增条带数在40.43个,扩增得到的多态性条带平均在10.33个,占扩增条带的25.56%。TRAP分子标记在南美白对虾育种研究中有着广阔的应用前景。; 高永华盛晓伟李文兰熊建华; 关键词：TRAP 凡纳滨对虾分子标记

凡纳滨对虾烯醇酶基因Enolase的克隆及表达分析被引量：3: 2011年; 以生长性状分离的凡纳滨对虾家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,斑点杂交筛选获得Enolase基因,克隆获得全长编码区序列。序列分析表明,序列包含1 305 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质含434个氨基酸,预测的分子量为47.4 ku,等电点为5.67。通过荧光定量PCR法研究了Enolase基因在凡纳滨对虾的不同组织和不同生长期的肌肉组织中的表达情况,结果显示,Enolase基因在凡纳滨对虾的心脏、肝胰腺、肌肉、胃、肠、眼柄、鳃和血等组织或器官中都有表达;在肌肉组织中表达量最高,在肝胰腺中表达量最低;在日龄为125 d的对虾肌肉组织中表达量最高,在日龄为80 d的对虾肌肉组织中表达量最低。; 李文兰高永华盛小伟陈晓汉熊建华; 关键词：凡纳滨对虾烯醇酶抑制性差减杂交

凡纳滨对虾肌肉组织cDNA全长文库的构建被引量：3: 2011年; 【目的】为了在短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息,为深入了解功能基因在凡纳滨对虾肌肉组织中的表达提供分子生物学依据。【方法】通过构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,并进行EST测序分析。【结果】文库质量分析表明,初始文库库容约8.50×106CFU,重组率在95%左右,插入片断大小为0.5～4.0kb,多数在1.0kb以上。随机测序72条cDNA,可得到有功能注释的37条全长cDNA和18条编码未知蛋白的基因序列。通过Gene Ontology功能分类可将有功能注释的37个基因分为蛋白质合成、细胞骨架、细胞信号传导、代谢、转运、能量、转录、抗病及防御、生殖发育和未知功能基因等10类,其中蛋白质合成类基因最多(27.03%),与细胞骨架(13.51%)、细胞信号传导(13.51%)及代谢类基因(13.51%)共占67.56%。【结论】构建凡纳滨对虾肌肉组织的全长cDNA文库,可实现短期内获得大量凡纳滨对虾肌肉组织的功能基因表达信息。; 熊建华高永华马宁盛小伟陈晓汉; 关键词：凡纳滨对虾肌肉组织生长性状

凡纳滨对虾类泛素折叠修饰蛋白Ufm1基因克隆、序列分析及结构预测: 2011年; 【目的】了解类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)的结构特征和蛋白功能,为进一步探究Ufm1基因功能提供参考。【方法】以同一生长性状分离凡纳滨对虾家系的肌肉组织为材料,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选获得Ufm1基因,经全长cDNA文库筛选获得Ufm1基因全长序列。【结果】Ufm1基因全长cDNA序列长714bp,包含261bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为86个氨基酸,预测的分子量为9.3ku,等电点pI为6.55;其编码蛋白无信号肽,无跨膜区域,可能定位于细胞质中,属于亲水性蛋白,含有1个酪蛋白激酶II磷酸化位点、1个N-糖基化位点、2个蛋白激酶C磷酸化位点;序列同源性分析表明,不同进化地位物种的Ufm1基因存在较高的同源性。【结论】Ufm1基因在系统进化上高度保守,这为进一步探究Ufm1基因功能及原核表达等奠定了基础。; 盛小伟高永华彭金霞李咏梅陈晓汉熊建华; 关键词：凡纳滨对虾差减CDNA文库生物信息学

凡纳滨对虾内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ的克隆及表达分析被引量：1: 2011年; 以生长性状为指标分离凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,进行斑点杂交筛选获得内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ基因,克隆获得cDNA全长编码序列及部分非编码序列。序列包含270 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为89个氨基酸,预测的相对分子质量为10 300,理论等电点为10.58。通过荧光定量PCR的方法研究了Sec61γ基因在对虾不同组织和不同生长期肌肉组织中的表达情况,结果表明:Sec61γ基因在对虾的血液以及心脏、肝胰腺、肌肉、胃、肠、眼柄等器官或组织中都有表达,其中在肌肉组织中表达量最高,在肠中表达量最低;在对虾不同生长期肌肉中的表达量各不相同,在10日龄的对虾肌肉组织中表达量最高,为45日龄的对虾肌肉组织中表达量的27.6倍。; 熊建华盛小伟高永华李文兰杨彦豪陈晓汉; 关键词：凡纳滨对虾抑制性差减杂交荧光定量PCR

罗汉果遗传转化体系的建立被引量：3: 2010年; 本研究以罗汉果(Siraitia grosvenorii(Swingle)C.Jeffery)子叶为外植体,通过农杆菌介导法,探讨影响罗汉果转化的几个重要因素,建立罗汉果稳定的遗传转化再生体系。结果表明:农杆菌转化前对子叶进行预培养可以促进细胞分裂,预培养的最佳时间为1d,侵染时间以为20～30min为宜,共培养最佳时间为4d,附加100μmol/L的乙酰丁香酮(AS)可促进转化。通过潮霉素抗性不定芽分化和抗性不定根分化的两轮筛选及PCR检测,获得56株PCR阳性植株,阳性转基因植株频率为6.86%,初步证明目的基因已经整合到罗汉果基因组中。; 李文兰高永华李华英; 关键词：农杆菌介导

凡纳滨对虾肌球蛋白轻链基因MLC的克隆及表达分析被引量：5: 2011年; 以生长性状分离凡纳滨对虾家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,斑点杂交筛选获得MLC基因,克隆获得全长编码区序列。序列分析表明序列包含462 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为153氨基酸,预测的分子量为17.5ku,等电点为4.67。通过荧光定量PCR的方法研究了MLC基因在凡纳滨对虾不同组织和不同生长期的肌肉组织中表达情况,显示MLC基因在凡纳滨对虾的心脏、肝胰腺、肌肉、胃、肠、眼柄、鳃和血等组织或器官中都有表达,在肌肉组织中表达量最高,在肝胰腺中表达量最低;在日龄为45 d的对虾肌肉组织中表达量最高,在日龄为10 d的对虾肌肉组织中表达量最低。; 李文兰盛小伟高永华陈晓汉马宁熊建华; 关键词：凡纳滨对虾肌球蛋白轻链抑制性差减杂交荧光定量PCR

罗汉果子叶高效再生体系的建立被引量：1: 2010年; 以无菌萌发罗汉果子叶为外植体，进行罗汉果高效离体再生体系的研究。探讨了不同MS、琼脂含量、不同激素浓度配比、种子萌发时间和活性炭在罗汉果种子萌发、子叶诱导不定芽及试管苗生根方面的影响。结果表明：1／4 MS、0．5％-0．6％的琼脂含量比较适合罗汉果种子萌发，萌发率达89．2％；降低无机盐和蔗糖浓度有利于罗汉果试管苗的生根；最适生根培养基为1／2 MS＋IBA0．5mg／L＋1．5％蔗糖；罗汉果子叶直接诱导不定芽最适合培养基为1／2MS＋6-BA1．0mg／L＋IBA0．1mg／L，分化率达94．8％，平均每块子叶出芽10个；培养基中添加低浓度（0．2％）活性炭有利于生根，但不利于子叶不定芽的诱导；子叶不定芽的分化率还受种子萌发时间的影响，萌发时间以2—4d为宜；试管苗经过炼苗2～4d能极大提高移栽成活率，达91．7％。; 李文兰李华英郝再彬李海云高永华梁祖珍; 关键词：子叶离体培养植株再生

凡纳滨对虾生长性状相关基因的克隆及表达分析: 凡纳滨对虾是养殖对虾三大主导品种之一,随着累代养殖及养殖环境不断恶化,现存在杂合度降低、遗传力减弱、抗逆性差、性状退化严重等不少令人堪忧的问题。为了建立对虾高生长品系或品种,本实验从分子生物学角度探讨凡纳滨对虾生长性状相...; 高永华; 关键词：凡纳滨对虾生长性状基因克隆遗传力; 文献传递

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