魏永伟
- 作品数：29 被引量：58H指数：3
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学自动化与计算机技术医药卫生更多>>
- 传染性法氏囊病病毒无毒力毒株构建方法
- 本发明公开了一种传染性法氏囊病病毒无毒力毒株构建方法。方法的步骤为：1)性法氏囊病病毒基因组A、B节段RNA的抽提及其cDNA全长的克隆；2)VP5基因缺失的基因组A节段全长序列的获得及A、B节段感染性克隆的构建；3)上...
- 于涟李龙魏永伟
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- 传染性法氏囊病毒HZ2株VP5基因缺失株的构建被引量：1
- 2006年
- 通过PCR方法，删除传染性法氏囊病毒HZ2株ORF A1和ORF A2非重叠区的33bp（96—129bp）的同时，引入Nhe Ⅰ酶切位点（GcTaGc）作为分子标记，构建含有A节段突变体的真核表达载体pCI-Nhe3，与HZ2株B节段真核表达载体pCI—mB在脂质体介导下共转染鸡胚成纤维（CEF）细胞．用转染细胞的培养液上清不断地接种新鲜细胞，模拟病毒“传代”．结果表明，细胞的形态学特征发生变化，产生了类似野生IBDV感染细胞时出现的细胞病变效应（CPE）．电子显微镜观察显示，在细胞超薄切片中有IBDV病毒粒子．间接免疫荧光分析结果表明，拯救的ANhe3株病毒的结构蛋白在CEF细胞得到了表达，而非结构蛋白（VP5）则不能表达．针对A节段的RT—PCR，酶切鉴定及进一步的序列测定结果验证了相应核苷酸片段的缺失和分子标记的引入．ANhe3株病毒接种不能导致11日龄SPF鸡胚的死亡，相对HZ2株致死率（20％）明显下降．本研究利用基于cDNA转染和RNA聚合酶Ⅱ系统的IBDV反向遗传系统，构建了IBDV VP5基因大片段缺失的毒株ANhe3株，为IBDV基因组学的研究提供了新方向，为进一步探索病毒复制和致病机制以及开发基因缺失疫苗奠定基础．
- 李龙魏永伟黄耀伟于涟
- 关键词：传染性法氏囊病毒基因缺失
- 传染性法氏囊病病毒无毒力毒株构建方法
- 本发明公开了一种传染性法氏囊病病毒无毒力毒株构建方法。方法的步骤为：1)传染性法氏囊病病毒基因组A、B节段RNA的抽提及其cDNA全长的克隆；2)VP5基因缺失的基因组A节段全长序列的获得及A、B节段感染性克隆的构建；3...
- 于涟李龙魏永伟
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- 红色荧光特异性标记线粒体细胞系的建立及应用
- 本发明提供一种红色荧光特异性标记线粒体的Vero细胞系V-Mito，通过在脂质体LipofectamineTM2000介导下将超纯质粒pDsRed2-Mito转染Vero细胞，经含G418的培养基进行阳性克隆筛选，挑取阳...
- 于涟魏永伟章晓栋侯贤宏
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- 人纤维蛋白原α、β、γ基因的克隆和表达研究被引量：3
- 2011年
- 纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)是凝血因子I,在体内经凝血酶(thrombin)作用下转变为纤维蛋白,发挥其凝血和止血功能。本研究通过反转录的方法,从杭州人肝脏中成功克隆到人纤维蛋白原α、β、γ基因,并将其定向插入原核表达载体中,人纤维蛋白原α、β、γ基因经成功诱导获得表达,进一步纯化获得人纤维蛋白原α、β、γ蛋白。序列经比对,与Genbank上公布的序列同源性达97%～99%,这项研究为我国汉族人群纤维蛋白原基因核苷酸多态性和单倍型研究发挥一定作用,并且对纤维蛋白封闭剂的开发,提供了重要的产业化实验依据和技术基础。
- 黄星许健魏永伟章晓栋邓同乐孙静于涟
- 关键词：纤维蛋白原基因序列纤维蛋白封闭剂
- 重组宁乡猪生长激素真核表达质粒(pCI-GH-EGFP)的构建及其在Vero细胞中的表达被引量：2
- 2016年
- 为了构建宁乡猪生长激素(GH)真核表达系统,并转染非洲绿猴肾细胞系(Vero)观察其表达情况,试验选用宁乡猪脑垂体组织总RNA反转录获得的c DNA为模板,克隆宁乡猪生长激素(nxGH)基因序列,将其定向插入p CI载体构建重组质粒p CI-GH,并将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因酶切后连入质粒p CI-GH中,构建真核表达载体p CI-GH-EGFP。将该重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞,倒置荧光显微镜下观察到GH-EGFP融合蛋白可稳定表达。结果表明:宁乡猪生长激素基因编码区序列含有1个由651个核苷酸组成的开放阅读框(ORF),编码216个氨基酸残基。
- 王文策翟双双耿梅梅褚武英魏永伟于涟杨琳
- 关键词：宁乡猪生长激素(GH)基因
- 大黄鱼主要弧菌病的免疫预防研究
- 于涟毛芝娟张崇文钱荣华褚武英魏永伟吴雄飞
- 2008年3月29日，浙江大学在杭州组织有关专家对动物科学学院承担的浙江省科技厅重点项目《大黄鱼弧菌病的免疫预防研究》进行了鉴定。鉴定委员会听取了该项目的工作总结报告、技术总结报告、科技查新报告等，审阅了项目相关技术资料...
- 关键词：
- 关键词：大黄鱼
- 重组鸡白介素18真核表达质粒(pCI-ChIL-18)胚胎接种的研究被引量：4
- 2008年
- 通过对孵化率、平均囊指数、脾指数、外周血淋巴细胞增殖反应和白介素18(IL-18)蛋白水平表达的检测,评定了重组鸡真核表达质粒(pCI-ChIL-18)胚胎接种的不同接种剂量和接种方法的效果。结果表明,pCI-ChIL-18质粒接种18日龄鸡胚不影响孵化率,对鸡的生长发育无影响,不同的接种途径和接种剂量对鸡体内IL-18的表达有影响。与1日龄雏鸡肌肉接种比较,胚胎接种可明显促进外周血淋巴细胞的早期增殖,而且呈剂量依赖性,但相同接种途径的200μg接种组与300μg接种组间无统计学差异(P>0.05)。
- 吕冬梅章晓栋徐弘魏永伟于涟
- 关键词：鸡IL-18接种剂量
- 区间Bézier曲线曲面的性质
- 近年来有关区间Bézier曲线、曲面的研究很多,作者简要回顾了Bézier曲线曲面的发展历史、Bézier曲线曲面的升阶、离散等性质,并结合区间算术,来研究区间Bézier曲线曲面的性质.第二章把Bézier曲线、曲面的...
- 魏永伟
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- 副溶血弧菌外膜蛋白ompK亚单位疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种副溶血弧菌外膜蛋白ompK亚单位疫苗及其制备方法。疫苗为转化了重组原核表达质粒pET30a－ompK的大肠杆菌经诱导表达的重组蛋白ompK经纯化后的PBS溶液，其浓度为0.25－0.5mg/ml。方法的步...
- 于涟毛芝娟由振强张祟文魏永伟
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