麻丽霞
- 作品数：13 被引量：4H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC多抗的制备及初步应用被引量：1
- 2012年
- 【目的】制备大眼鰤鲈鱼真皮肿瘤病毒(WDSV)辅助基因orfA和orfC的多克隆抗体,并用其检测酵母和肿瘤细胞中目的蛋白的表达。【方法】以WDSV基因组序列为模板,PCR扩增WDSVorfA和orfC基因,分别构建其原核表达载体,转化Rosseta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达并纯化重组蛋白后,采用皮下多点注射结合耳静脉加强免疫的方法免疫新西兰白兔,制备抗orfA和抗orfC的多克隆抗体,用Western blot法检测抗体的特异性。用制备的多克隆抗体检测orfA和orfC融合蛋白在酵母和HeLa299、SPC-A-1肿瘤细胞中的表达。【结果】PCR扩增获得了WDSVorfA和orfC基因。成功构建了orfA和orfC基因的原核表达载体并进行了诱导表达,orfA和orfC重组融合蛋白以包涵体形式存在;采用皮下注射结合耳静脉加强免疫有效地提高了抗体效价,成功制备得到了兔抗orfA和兔抗orfC血清,抗体效价达1∶8 000～1∶10 000;通过Western blot法,利用上述抗血清分别检测到了原核表达的目的蛋白及酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白。【结论】制备得到的抗orfA和抗orfC多克隆抗体具有很好的特异性,能够用于原核表达、酵母和肿瘤细胞中表达的目的蛋白的Western blot检测。
- 李铎徐坤王亮亮周罡麻丽霞张智英
- TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用
- 本发明TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述四聚体库的构建包括构建TALE单个重复单元、构建TALE单体质粒以及在T4DNA连接酶缓冲液中加入TALE单体质粒...
- 张智英张志强李铎辛颖麻丽霞王昕张涛徐华荣
- 文献传递
- 口服重组酵母(ApoB100肽段)对小鼠产生特异性抗体的诱导作用
- 2014年
- 【目的】开发一种针对低密度脂蛋白成分ApoB100的新型重组酵母疫苗,为动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的防治提供一种思路。【方法】利用PCR得到包含编码ApoB100的3 136-3 155位氨基酸残基的目的片段,将其克隆到酵母表达载体JMB88-HA-OVA-MCS上,构建JMB88-HA-OVA-hApoB载体,用硫酸铜诱导表达后获得HA-OVA-hApoB融合蛋白。采用口服的方法对昆明小白鼠免疫成功表达HA-OVA-hApoB蛋白的酵母细胞12周,每周1次,每次1×108个酵母细胞,免疫结束后4周采血,用Western blot检测小鼠是否产生特异性抗体。【结果】PCR扩增获得了859bp的人ApoB100基因。成功构建了JMB88-HA-OVA-hApoB载体。口服免疫12周后,HA-OVA-hApoB免疫组小鼠的血清中含有特异性ApoB100抗体。【结论】灌服表达人ApoB100肽段融合蛋白的重组酿酒酵母能诱导小鼠的免疫反应,使其产生特异性抗体。
- 麻丽霞张婷婷张优优周罡张智英
- 关键词：载脂蛋白B口服免疫
- 原核Argonaute蛋白的基因编辑应用
- 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现...
- 张智英邢佳妮麻丽霞闫强李鹏程徐坤程心珍闫娜娜孙永森李倩
- 一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用，该酵母重组疫苗以酵母作为宿主细胞，转染包含ApoB100基因片段的真核表达载体；所述的ApoB100基因片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，所述的真...
- 张智英麻丽霞李欣憶张婷婷张优优刘中天
- 文献传递
- 一种自制的RNA分离试剂及其在鱼组织总RNA提取中的应用被引量：1
- 2012年
- 【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizolReagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成草鱼皮肤cDNA。同时使用自制RNA分离试剂提取斑马鱼总RNA,通过RT-PCR进行E2F5基因全长(1 092bp)的克隆,构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA的品质与用TRizol Reagent提取的总RNA品质相当,用之成功地合成了草鱼皮肤cDNA。使用自制RNA分离试剂提取得到了更高品质的斑马鱼总RNA,用之成功地克隆了斑马鱼E2F5基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-flag-Zf E2F5和酵母表达载体pGAD GH-Zf E2F5。【结论】自制RNA分离试剂能够用于鱼类组织总RNA的提取,提取的总RNA能满足后续cDNA合成及RT-PCR克隆特定基因的需要。
- 徐坤李铎张优优李陇平麻丽霞张智英
- 关键词：总RNA
- 一种由口服基因工程发酵酵母介导的小鼠肠道DC细胞表达外源和内源基因的方法及应用
- 本发明涉及一种由口服基因工程发酵酵母介导的小鼠肠道DC细胞表达外源基因和内源基因的方法及应用，属于免疫学和基因工程技术领域。所述基因工程发酵酵母含有真核基因表达载体JMB84-CMV-β-catenin-HA-T2A-G...
- 张智英赵蕊张婷婷麻丽霞张优优李欣憶张龙李铎
- 文献传递
- 鸡PLA2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。
- 杨涵江辛颖麻丽霞张智英
- 关键词：原核表达卵黄抗体
- 一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用，该酵母重组疫苗以酵母作为宿主细胞，转染包含ApoB100基因片段的真核表达载体；所述的ApoB100基因片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，所述的真...
- 张智英麻丽霞李欣憶张婷婷张优优刘中天
- 文献传递
- 人工锌指蛋白文库的构建
- 2014年
- 【目的】以猪基因组为模板,扩增天然锌指,以此建立人工锌指蛋白文库,为猪基因组的定点操作及基因表达研究奠定基础。【方法】利用质粒JMB378和JMB440构建锌指文库骨架载体JMB378-ZF1-MCS,然后根据天然锌指蛋白接头序列的保守性,设计5条简并引物扩增猪基因组中的天然单锌指结构域,将其与JMB378-ZF1-MCS载体上的人工锌指ZF1中识别GGC的锌指蛋白连接,构建二锌指蛋白文库,通过酶切方式再将天然单锌指结构域插入到二锌指蛋白文库中,构建三锌指蛋白文库。测定锌指库容量及阳性率,并通过酶切和测序检测锌指库的多样性。【结果】构建了基于猪天然锌指模块的包含ZF1的三锌指蛋白文库,库容量达到1.5×106 CFU。该文库中含有一个人工锌指蛋白ZF1和2个天然型锌指蛋白,能够对基因组中所有以GGC起始的9bp靶序列进行筛选。【结论】构建了基于天然单锌指模块的三锌指蛋白文库,为构建新型锌指蛋白提供了一种可行的方法。
- 周罡张龙刘中天任充华麻丽霞张智英
- 关键词：锌指文库构建
