丁月霞
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- A组链球菌M蛋白重组多肽原核表达载体构建及融合蛋白的表达被引量：2
- 2013年
- 目的:设计针对A组β溶血性链球菌M1和M12蛋白的复合多肽;构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型特异性抗原决定簇基因及其保守区J14肽基因的GST标签的重组表达载体;并诱导和优化GST融合蛋白的表达。方法:在NCBI Genebank和Oligo 6引物设计软件中选择分别编码M蛋白emm基因1型和12型信号肽后35个氨基酸及其相同的保守区14肽基因序列(全长270 bp),通过重叠PCR(Overlap PCR)合成所需的核苷酸序列,经测序确定序列完全和设计的相匹配后,将该重组片段克隆到pGEX-4T-1表达载体中,阳性克隆经双酶切和测序鉴定正确后建立稳定表达该重组质粒的大肠杆菌BL21株系(pE/B);通过聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色和Western blot来检测在不同时间(0、2、6、8、18和24小时)和温度(25℃、30℃和37℃)以及不同浓度(0.01、0.1、1 mmol/L)异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导GST融合蛋白(GST/emm)表达情况,并对诱导表达的GST/emm切胶进行质谱分析鉴定。结果:成功构建含有emm1和emm12抗原决定簇及M蛋白保守区J14肽基因的原核表达载体;并诱导其稳定表达,在1 mol/L IPTG诱导6～8小时达高峰,不同温度下均有过量表达;质谱检测诱导蛋白GST/emm条带结果正确。结论:成功构建A组β溶血性链球菌的emm1型和emm12型原核表达载体,并稳定诱导GST/emm表达,为下一步研究GST/emm的纯化、酶切以及免疫原性的鉴定和疫苗研制打下夯实的基础。
- 丁月霞倪琼琼刘金来
- 关键词：M蛋白GST融合蛋白
- β溶血性链球菌htra基因的测序鉴定及表达蛋白的免疫反应性分析被引量：2
- 2012年
- 【目的】了解广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌(BHS)中htra同源基因的分布并初步探讨其表达蛋白在BHS中的免疫反应性。【方法】运用PCR扩增从患儿分离的44株BHS的htra基因并测序,测序结果与NCBI中已知基因序列进行同源性比对;将测序正确的A组链球菌(GAS)htra基因克隆至原核表达质粒pGEX4T-1,并在E.coli BL21中表达,应用Western blot,以抗GST Rabbit mAb鉴定重组融合蛋白表达,以BHS免疫小鼠抗血清检测目的蛋白的免疫反应性。【结果】44株BHS的htra基因与已知GAS htra基因的一致性均达99%;Western blot显示,HtrA融合蛋白可与抗GST Rabbit mAb以及GAS免疫小鼠血清特异性结合,而非A组链球菌及对照组免疫血清则呈阴性结果。【结论】从患儿分离的BHS均携带与GAS相同的htra基因,这与基因库中已知的B组链球菌(GBS)、C组链球菌(GCS)htra序列不符;GAS感染动物后可产生抗HtrA蛋白抗体,可以认为HtrA为GAS的显性免疫原,而尚不能认为非A组链球菌中HtrA为其显性免疫原。
- 倪琼琼丁月霞刘金来余步云
- 关键词：Β溶血性链球菌克隆表达免疫反应性
- 广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌的流行情况及其emm基因分型被引量：8
- 2011年
- 【目的】了解近期广州市儿童致咽炎β溶血性链球菌(BHS)的流行情况及其emm基因分型。【方法】对我院儿科门急诊1190例急性咽扁桃体炎的患儿进行咽拭子培养。鉴定为BHS者包括A、B、C和G组溶血性链球菌(groupA、B、C、Gstreptococcal,GAS、GBS、GCS和GGS)进行细菌组DNA的提取;通过PCR扩增emm基因并测序;其结果与NCBI和CDCHome中已知的基因序列进行同源性比对大于95%则认为是同型菌株,藉此确定其分型。【结果】在1190例符合条件的患儿咽拭子标本中[男:678例,(6.96±2.73)岁;女:512例,(6.70±2.60)岁],鉴定为BHS的共有46例(3.87%)。其中GAS、GBS、GCS和GGS分别有4例、20例、2例和20例,分别占BHS约8.7%、43.5%、4.3%和43.5%;而GAS、GBS、GCS和GGS的阳性率分别约为0.37%、1.68%、0.17%和1.68%。男患儿BHS的阳性率约为5.01%,女患儿约为2.34%,两组比较(χ2=26.431,P<0.001)有统计学意义。除了GBS外,其他BHS(GAS、GC/GS)均有emm基因表达(1000～1500bp)。经测序共有15型emm,其中4株GAS分别表达emm1和emm12(7.69%)。【结论】致咽炎GAS阳性率低于0.5%,而GBS、GGS阳性率接近2%。但GBS无emm表达,GAS表达emm1和emm12,而GCS、GGS无明确的emm优势型。
- 丁月霞倪琼琼刘金来
- 关键词：Β溶血性链球菌急性咽扁桃体炎
- A组链球菌M蛋白二价疫苗表达载体构建及其诱导表达
- 目的:设计针对A组β溶血性链球菌(GAS)M1和M12蛋白的多肽疫苗;构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型及J14肽基因GST标签的重组表达载体,并诱导和优化GST融合蛋白(GST/emm)的表达。方法:选择编码e...
- 丁月霞刘金来倪琼琼
