乔树叶
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
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- 水牛miR-302s真核表达载体的构建及生物信息学分析
- 2019年
- 试验旨在克隆并构建水牛miR-302s慢病毒真核表达载体(bbu-miR-302s),对其进行生物信息学分析,并尝试将该载体应用于水牛体细胞重编程中。以水牛基因组DNA为模板扩增得到bbu-miR-302s前体序列,测序正确后将其连入pLVX-IRES-ZsGreen1构建重组慢病毒真核表达载体。重组的慢病毒真核表达载体经过酶切鉴定正确后,采用脂质体转染方法包装慢病毒颗粒,通过感染HEK-293T细胞及猪和水牛体细胞,检测重组慢病毒载体的有效性。bbu-miR-302s有效感染水牛胎儿成纤维细胞(BFF)后,经诱导培养,检测能否产生水牛诱导多能干细胞(iPSC)。采用CoGeMiR数据库查询法和SnapGene Viewer软件进行miR-302s家族在基因组中的定位分析;利用ClustalX 1.83软件分析miR-302s序列保守性;利用TargetScan和miRWalk软件预测bbu-miR-302s主要的靶基因,并运用DAVID程序对靶基因进行信号通路富集。测序结果显示,扩增获得的序列是水牛miR-302s家族,包装的重组慢病毒滴度为7.2×10 6 TU/mL,并可以有效感染3个物种的体细胞。bbu-miR-302s病毒感染BFF后,细胞经历形态变化并发生聚集形成克隆样,碱性磷酸酶检测阳性,但多能基因及表面抗原检测结果均为阴性,说明单因子miR-302s不足以完全重编程BFF为水牛iPSC,但促进了重编程进程。CoGeMiR数据库检索发现,miR-302s家族主要位于LARP 7基因的内含子区;SnapGene Viewer软件进一步分析发现,bbu-miR-302s位于水牛7号染色体LARP 7基因的内含子区。序列同源性分析表明,miR-302s家族成员间及miR-302s簇成员在不同物种间均高度保守。水牛miR-302s主要靶基因共255个,这些靶基因主要集中在33个信号通路中,其中PGK信号通路与胰高血糖素信号转导及调控干细胞信号通路最为显著。本研究结果为后续开展miR-302s簇在体细胞重编程中的作用奠定基础。
- 乔树叶黄时海邓彦飞邓海莹罗婵石德顺李湘萍
- 关键词：生物信息学分析
- miR--302s重编程巴马香猪体细胞为诱导多能干细胞的初步研究
- miR-302家族是胚胎干细胞(ESC)特异性的miRNA家族。研究发现miR-302s作为增强子可以提高体细胞重编程(SCR)效率，其单独使用可以获得人和小鼠诱导多能干细胞(iPSC)。目前对大家畜miR-302家族的...
- 乔树叶
- 关键词：体细胞重编程诱导多能干细胞基因调控
- 文献传递
- 水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定被引量：3
- 2012年
- 研究主要是通过比较水牛卵巢颗粒细胞在不同培养基中的生长状态,并对细胞的增殖、核型及凋亡情况进行检测,以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性,建立水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系。结果发现,分离获得的水牛卵巢颗粒细胞存活率约为60%;采用DMEM培养基,颗粒细胞的生长速度和生长状态优于TCM-199和DMEM/F12培养基;细胞培养24h后开始零星增殖,3～5d增殖速度达到高峰;第1、3、5、7代颗粒细胞正常核型比率差异不显著,均在85%以上;第1代颗粒细胞的凋亡率与第5代差异显著(P<0.05),与第7代差异极显著(P<0.01)。结果表明,DMEM培养基更适宜用于水牛颗粒细胞的体外培养;水牛颗粒细胞能稳定地进行传代培养,染色体的数目不会发生明显改变,但细胞凋亡率会随着培养代数的增加而明显升高。
- 高亚可陆凤花马帆乔树叶陈施蓓石德顺
- 关键词：水牛卵巢颗粒细胞原代培养增殖凋亡
- 水牛转录因子Sox2和Lin28克隆与表达研究被引量：1
- 2015年
- 本研究克隆水牛特异性转录因子Sox2和Lin28,构建表达载体,为进一步研究2个基因在水牛干细胞多能性调控中的作用奠定基础。以胎牛生殖嵴总RNA为模版,采用RT-PCR扩增Sox2和Lin28的编码区序列(CDS),构建逆转录表达载体pMSCV-Sox2和pMSCV-Lin28,转入NIH3T3细胞,鉴定其表达情况。结果表明:水牛Sox2和Lin28的CDS全长分别为966 bp和618 bp,蛋白结构保守;Sox2、Lin28氨基酸序列与牛、猪、人和鼠相应氨基酸序列的相似性分别为96%、95%、94%、94%和98%、97%、89%和91%;pMSCV介导的Sox2和Lin28能在NIH3T3细胞中表达。
- 邹灵秀邓彦飞陈凤乔树叶杨素芳石德顺
- 关键词：水牛转录因子克隆真核表达
- 抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种抑制水牛TREM1基因表达的shRNA，该shRNA为shRNA-TREM194、或shRNA-TREM294，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止信...
- 李湘萍石德顺路新梅李美青乔树叶
- 家畜脂肪干细胞研究进展被引量：2
- 2014年
- 脂肪组织中含有大量的间充质干细胞,目前对于间充质干细胞的研究主要是关注其基本的生物学特性和临床应用方面。脂肪干细胞因具有与骨髓间充质干细胞相似的生物学特性,且有易获取、安全、可迅速扩增等特点,已成为现有干细胞生物工程研究的最理想来源。利用脂肪干细胞建立大动物模型,以研究人类疾病、异体器官移植、动物疾病治疗和组织修复等方面,已成为脂肪干细胞的一个研究趋势。本文将对家畜脂肪干细胞的分离培养、表面抗原鉴定、分化能力、应用前景及存在问题做一综述。
- 刘真真李海洋邓彦飞乔树叶朱鹏杨素芳石德顺
- 关键词：生物学特性分化能力
- 抑制水牛TREM1基因表达的shRNA、慢病毒表达载体及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种抑制水牛TREM1基因表达的shRNA，该shRNA为shRNA-TREM194、或shRNA-TREM294，它们都包含19nt的siRNA正义链，9nt的loop环，19nt的siRNA反义链和终止信...
- 李湘萍石德顺路新梅李美青乔树叶
- 文献传递
- 水牛YY1基因克隆及其shRNA片段的筛选被引量：7
- 2014年
- 本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析。采用Xho I和EcoR I双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1。设计2条靶向水牛YY1基因的shRNA序列并构建其慢病毒表达载体,命名为pSicoR-GFP-YY1 shRNA1/2。以pSicoR-GFP和pSieoR-GFP-1864分别为空白对照和阴性对照质粒,采用脂质体转染方法,将YY1真核表达载体分别与2条shRNA慢病毒表达载体共转染293T细胞,48h后观察绿色荧光蛋白EGFP表达情况;72h收集共转染细胞样品,采用qRT-PCR和western-blot方法分析YY1基因的表达水平。结果表明,克隆得到1248 bp的水牛YY1基因CDS序列,其与牛YY1基因的同源性达99%。构建的水牛YY1基因真核表达载体pYY1-EGFP-N1能在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)中瞬时表达。酶切分析及序列测定结果表明,所构建的shRNA慢病毒表达载体pSieoR-GFP-YY1 shRNA1/2为阳性克隆。质粒共转染293T细胞48h后,可观察到绿色荧光蛋白EGFP的表达。qRT-PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对水牛YY1基因的表达均有抑制效果,其中YY1 shRNA2的抑制效果(93.64%)显著高于YY1 shRNA1(50.77%)(P<0.05),Western-blot分析结果显示,2条shRNA对YY1蛋白表达均有抑制效果。以上结果说明克隆得到水牛YY1基因编码区序列,并获得2条有效抑制其表达的shRNA片段,为进一步阐明YY1基因在水牛早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。
- 龚云乔树叶林浪王梦石德顺李湘萍
- 关键词：SHRNA慢病毒表达载体基因表达
- 水牛卵巢颗粒细胞的分离培养及凋亡测定
- 本研究通过对水牛卵巢颗粒细胞进行分离培养，并对其增殖和凋亡情况进行测定，以了解水牛卵巢颗粒细胞体外生长特性，从而建立一种较为完善的水牛卵巢颗粒细胞的体外培养体系，为进一步研究水牛卵巢颗粒细胞在卵母细胞体外成熟中的作用机制...
- 高亚可陆凤花马帆陈施蓓乔树叶管晓梅石德顺
- 关键词：水牛胚胎学卵巢颗粒细胞体外培养
