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俞正玉

作品数：201 被引量：402H指数：11
供职机构：江苏省农业科学院更多>>
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领域

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  • 22篇腹泻
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作者

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  • 2篇2007
  • 4篇2006
  • 2篇2005
共 201 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
PEDV JS2008株全长感染性cDNA的构建方法及应用
本发明提供PEDV JS2008株全长感染性cDNA的构建方法及应用，属于分子生物学和病毒学领域。构建PEDV JS2008株全长感染性cDNA的方法，包括如下步骤：以PEDV JS2008株病毒总RNA的反转录产物为模...
范宝超李彬何孔旺焦点郭容利俞正玉朱琳
文献传递
用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用
本发明提供用于检测抗猪产肠毒素性大肠杆菌抗体的融合蛋白、制备方法及应用，属于生物技术领域。所述融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO:1所示。制备融合蛋白的方法，包括：将所述融合蛋白的编码基因插入pCold？I质粒，...
张雪寒俞正玉张强张碧成汪伟茅爱华周俊明何孔旺倪艳秀温立斌李彬周萍
文献传递
猪肠道病毒甲型3C基因的克隆和原核蛋白的表达被引量：3
2017年
猪肠道病毒甲型(PEV A)是一种无囊膜、球形的单股正链RNA病毒,属于小RNA病毒科,能引起猪脑脊髓灰质炎、肠道、呼吸道、生殖器官疾病等多系统综合征。本试验采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,设计全长拼接引物,在引物的两端各设计了保护性碱基合成基因PEV A 3C,连入表达载体pCzn1;获得的重组质粒pCzn1-PEV A 3C转入Arctic Express表达菌株。诱导表达目的蛋白PEV A 3C,通过Ni柱亲和纯化获得目的蛋白。结果表明,成功构建了原核表达菌株,其所表达的融合蛋白分子质量约为21.7 ku,为下一步PEV A特异性ELISA检测方法的建立奠定了基础。
孙杰朱琳焦点俞正玉范宝超袁万哲王建辉郭容利何孔旺李彬
关键词：蛋白表达
猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离鉴定及遗传变异分析被引量：11
2014年
从江苏某猪繁殖与呼吸综合征（ PRRS）发病猪场采集的血清样本中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（ PRRSV）毒株,对该毒株的生物学特性进行了鉴定,并对其Nsp2和ORF5序列进行测定和序列比对分析。利用细胞传代的方法对PRRSV检测阳性,PPV和PRV检测阴性的猪血清进行病毒分离。通过RT-PCR、CPE和IFA对PRRSV分离毒株进行鉴定,并测定其TCID50。测序获得Nsp2和ORF5基因,并利用DNAStar软件进行序列同源性和进化分析。成功分离获得1株PRRSV毒株,该毒株能够在Marc-145细胞上增殖并产生细胞病变,免疫荧光检测可观察到特异性荧光,TCID50为105.5。 Nsp2序列分析表明,该分离株具有HP-PRRSV 30个氨基酸缺失的基因特征,同时495-516位也存在缺失。分离株ORF5基因与其他参考毒株氨基酸同源性为57.1%-99.5%,与NJ-1106的同源性最高,为99.5%。系统进化树分析表明,该分离株属于北美型,与WUH4、NJ-1106等HP-PRRSV毒株属于同一分支。本试验分离得到一株HP-PRRSV变异毒株,为分析我国PRRSV的遗传变异和防控奠定了基础。
王小敏何孔旺周忠涛茅爱华俞正玉汪伟倪艳秀温立斌张雪寒郭容利李彬于洋
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
猪链球菌2型丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的鉴定和特性分析被引量：2
2014年
利用PCR扩增猪链球菌2型强毒株SS2-1丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(STP)的编码基因,克隆到表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21中进行原核表达,获得重组蛋白质rSsSTP。重组蛋白质经His蛋白质层析柱纯化后,利用pNPP分析rSsSTP的酶活性。结果显示rSsSTP为Mn2+依赖的磷酸酶,最适离子浓度为2 mmol/L,最佳反应温度为37℃,最佳pH值为8.0。
祝昊丹倪艳秀周俊明俞正玉茅爱华吕立新何孔旺
关键词：猪链球菌2型丝氨酸STREPTOCOCCUSSUIS
猪链球菌2型粘附相关因子荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
2014年
为了建立定量检测猪链球菌2型(SS2)粘附相关因子mRNA转录水平的荧光定量PCR方法,根据已报导的SS2粘附相关因子甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、分选酶A(SrtA)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGD)及其管家基因aroA,用GenBank登录的核苷酸序列,设计特异性引物,提取SS2总RNA,经RT-PCR扩增和克隆了各粘附相关因子的核苷酸片段,以构建含有各自引物扩增序列的重组质粒,建立检测各粘附相关因子SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法起始模板数的对数与荧光信号达到所设定荧光阈值所经历的循环数(Ct)之间线性关系好,相关系数均达到0.995以上;扩增产物形成单一的特异性熔解峰;初始模板的检出下限达到了1μl 1.0×102拷贝数;组内变异系数小于2%,说明该方法特异性强、敏感性高、重复性好。
汪伟何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒俞正玉吕立新茅爱华温立斌王小敏李彬郭容利
关键词：猪链球菌2型STREPTOCOCCUSSUIS
肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株
本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△hly），而后依次构建EHECO157:H...
何孔旺张雪寒卢维彩赵攀登叶青温立斌郭容利李彬王小敏倪艳秀吕立新周俊明俞正玉茅爱华周萍沈江萍
肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建被引量：1
2011年
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB)检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白。O157:H7(△hly△stx△toxB)生长特性与亲本株无明显差异。对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低。Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低。本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低。本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础。
张雪寒何孔旺赵攀登栾晓婷叶青温立斌倪艳秀周俊明李彬王小敏郭容利俞正玉茅爱华吕立新
关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7STX粘附
猪链球菌3型分离菌的生物学特性及致病性被引量：1
2020年
为研究猪链球菌3型(Ss3)分离菌的生物学特性及致病性,对疑似Ss进行培养、染色、生化试验、猪链球菌PCR鉴定、血清分型PCR鉴定、多位点序列分型(MLST型)PCR鉴定,并对小鼠和仔猪进行致病性试验。结果显示,3株分离菌(分别命名为JSHZ菌株、GD7菌株、H30菌株)均呈革兰氏阳性,Ss PCR鉴定显示为阳性,血清分型PCR结果表明分离到的菌株为Ss3,序列型(ST)分别属于ST27型(JSHZ菌株)、ST1004型(GD7菌株)和ST 117型(H30菌株);3株分离菌的生化特性与猪链球菌相符;3株分离菌经腹腔注射均可致死Balb/C小鼠,半致死量(LD50)分别为2.0×107CFU/ml、3.5×107CFU/ml和2.5×108CFU/ml。选择3株分离菌中毒力较强的JSHZ菌株进行仔猪致病性试验,感染仔猪会出现明显的关节红肿、跛行,体温多数升高至40.5~41.8℃,精神萎靡,食欲减少等症状;高剂量(每头仔猪注射JSHZ菌数6.0×109 CFU)处理可致仔猪出现食欲废绝、神经症状,甚至濒死,并在其脑组织中分离到Ss3。本研究结果为进一步开展Ss3的防控研究奠定了基础。
肖琦赵霞玲钱雯娴郭佳慧檀济敏俞正玉汪伟孙珂倪艳秀祝昊丹周俊明姚火春范红结牛家强索朗斯珠何孔旺
关键词：生物学特性
用于检测猪Delta冠状病毒抗体的多肽、制备方法及其应用
本发明提供用于检测猪Delta冠状病毒抗体的多肽、制备方法及其应用，涉及生物技术领域。该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，制备方法包括将含有所述多肽编码基因的重组菌在35‑40℃条件下采用IPTG诱导表达的步...
李彬逄凤娇何孔旺郭容利范宝超俞正玉茅爱华温立斌倪艳秀袁万哲王建辉
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