目的:探讨小干扰RNA降低组织蛋白酶B(Cat B)基因表达对HepG2细胞增殖、运动及侵袭能力的影响。方法:将肝癌HepG2细胞分为Cat B siRNA干扰组、阴性对照siRNA干扰组(阴性对照组)、空脂质体组和空白对照组。脂质体转染法将Cat B siRNA转染入HepG2细胞;半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后48hCat B的表达变化;收集转染后48h的细胞,再分别以CCK-8法、划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组细胞增殖、运动及侵袭能力的变化。结果:半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测Cat B mRNA和蛋白水平表达变化,Cat B siRNA干扰组较其余各组均明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。CCK-8法测细胞生长曲线示,将转染后48h的细胞种入96孔板后12h,Cat B siRNA干扰组增殖能力较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。划痕实验中,Cat B siRNA干扰组细胞迁移距离较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。Transwell侵袭实验中,Cat B siRNA干扰组穿膜细胞数较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。结论:特异性干扰Cat B基因表达可抑制HepG2细胞的增殖、运动及侵袭能力。
目的:探讨组织蛋白酶S(Cathepsin S,Cat S)表达降低后对肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:选择2种肝癌细胞系MHCC97-H、Bel-7402,将肝癌细胞分为对照组、Con sh RNA组、Cat S sh RNA组。慢病毒介导的Cat S sh RNA转染肝癌细胞48 h后,Western blot检测Cat S表达变化;Annexin V/PI双染流式测细胞凋亡;Western blot检测内源性凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达变化;Western blot检测外源性凋亡相关蛋白Fas、Fas-L表达变化。结果:在肝癌细胞MHCC97-H、Bel-7402中,Cat S sh RNA可显著降低肝癌细胞中Cat S表达(P<0.01);Cat S表达降低后,凋亡细胞显著增多(P<0.01);内源性促凋亡蛋白Bax表达升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01);外源性促凋亡蛋白Fas-L表达明显增强(P<0.01),Fas表达无明显变化(P>0.05)。结论:Cat S可同时通过内源性及外源性凋亡途径对肝癌细胞的凋亡进行调控。
目的:探讨缺氧环境肝癌细胞自噬的激活与H IF-1α的关系。方法:将肝癌B el-7402细胞分为常氧组、缺氧+C on sh R N A组和缺氧+H IF-1αsh R N A组,将慢病毒介导的H IF-1αsh R N A转染细胞,继续培养36 h,W estern blot检测H IF-1α蛋白表达;吖啶橙(A O)荧光染色检测自噬溶酶体的形成,丹酰尸胺(M D C)荧光染色检测自噬小体的形成,并应用流式细胞技术定量自噬溶酶体或者自噬小体的荧光强度;W estern blot检测自噬激活的标志蛋白LC 3-Ⅱ表达。结果:慢病毒介导的H IF-1αsh R N A降低了缺氧诱导的肝癌细胞中H IF-1α蛋白的生成(缺氧+H IF-1αsh R N A组vs缺氧+C on sh R N A组,P<0.01),H IF-1α降低后,细胞中自噬小体及自噬溶酶体明显减少(缺氧+H IF-1αsh R N A组vs缺氧+C on sh R N A组,P<0.01),自噬激活标志蛋白LC 3-Ⅱ明显减少(缺氧+H IF-1αsh R N A组vs C on sh R N A组,P<0.01)。结论:缺氧环境下H IF-1α介导了肝癌细胞自噬的激活。
