刘兴汉
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- ST_1肠毒素基因的合成、克隆及其融合蛋白的高效表达被引量：1
- 1998年
- 用ＤＮＡ合成仪合成了编码ＳＴ１肠毒素第５８到７２位氨基酸残基的ＤＮＡ片段，并将其与表达融合蛋白的载体ＰＧＥＭＥＸ－１重组，转化受体菌ＪＭ１０９（ＤＥ－３）。筛选出的重组克隆经过１ＰＴＧ４小时诱导，ＳＴ１融合蛋白的产量超过超过细菌蛋白总量的４０％，最高达５９．９％。
- 刘兴汉王莉林张绍杰初晓白
- 关键词：基因重组融合蛋白
- 质粒pBR_(322)电注入E.coliHB_(101)的研究
- 1991年
- 常用的转化方法是用CaCl_2或CaCl_2/RbCl_2处理受体菌使成感受态。转化率约为10~3—10~6个转化子/μg质粒DNA。近年发展起来的电转化技术可使转化率提高到lC^(?)—10^(10)个转化子/μg质粒DNA。我们以质粒pBR322和大肠杆菌HB101为实验材料,对常用的转化方法和电转化的结果进行了比较,对电转化中获得最佳转化效果和各种参数如电压、脉冲时间、脉冲次数、循环数等进行了探讨。
- 初晓白刘兴汉
- 关键词：质粒电转化
- K_(88)、K_(99)、F_(41)三价基因工程菌的构建被引量：11
- 1991年
- 利用基因工程技术构建的带有K_(99)和F_(41)两种纤毛抗原基因的重组质粒与K_(88)抗原工程菌C_(84)的质粒转化同一受体菌,得到双质粒。同时表达K_(88)、K_(99)、F_(41)三种纤毛抗原的菌株。用小白鼠试验初步证实。该菌株生物学性质稳定,对动物安全,对K_(88)、K_(99)和F_(41)强毒菌的攻击具有较强的保护作用。
- 刘兴汉王莉林初晓白张绍杰
- 关键词：基因工程腹泻
- 用亲和层析技术鉴别布氏菌强弱毒差异抗原成分
- 1991年
- 采用CDI和CCA两种方法活化Sepharose4B,制备亲和层析柱,并对这两种方法的优劣进行了比较。分别用超声液破碎和Ribi机器压榨制备布氏菌强毒M28株和疫苗M25株的可溶性抗原,作为亲和层析柱的配基。抗M28的血清经过M28和M5柱,洗脱液中的抗体再分别和M28、M5抗原反应经电转印检查证实,M28抗原中的一条蛋白带只与M28柱洗脱液反应,不与M5柱洗脱液反应。这种只与M28柱洗脱液反应的蛋白可能即是布氏菌强毒M28株所特有的抗原成分,也就是强毒株和弱毒株的差异抗原成分。
- 刘兴汉
- 关键词：布鲁氏菌抗原
- ST_1肠毒素融合蛋白的纯化及部分特性分析被引量：3
- 1998年
- 用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１５０凝胶和ＤＥ３２离子交换层析，从重组菌ＰＧＥＭＳＴ２株内分离、纯化ＳＴ１肠毒素融合蛋白，回收的ＳＴ１肠毒素融合蛋白占细菌总蛋白量的３１５％。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳条件呈一条蛋白带。ＳＴ１肠毒素融合蛋白不溶于甲醇、乳鼠试验阴性。对小鼠皮下注射使用安全，对Ｋ９９强毒菌攻击贩保护率达６０％。
- 刘兴汉王莉林张绍杰初晓白
- 关键词：肠毒素融合蛋白纯化免疫原性
- K_(99)—F_(41)双纤毛菌的构建被引量：1
- 1991年
- 产肠毒素大肠杆菌能引起仔猪、犊牛、羔羊等新生幼畜发生急性腹泻、K_(99)和F_(41)是这类产肠毒素大肠杆菌所产生的两种在免疫性质上不同的纤毛抗原。 提取K_(99)质粒,用HindⅢ酶消化,再用低熔点琼脂糖电泳回收分子量约为11Md的K_(99)的HindⅢ片段,并将该片段与经过碱性磷酸酶处理的PBR322载体重组,转化大肠杆菌C_(600)。用ELISA筛选K_(99)抗原阳性克隆。 E.coli83919F_(41)^+是非致病的产生F_(41)纤毛抗原的野生菌株。且F_(41)抗原基因是由染色体编码的。采用转化的方法将K99人工重组质粒转化到E.coli83919F_(41)^+中构建成K_(99)—F_(41)双纤毛基因工程菌。双纤毛菌中K_(99)抗原表达达到给体菌的水平,而F_(41)抗原的表达未受到明显的干扰。
- 张绍杰刘兴汉
- 关键词：纤毛抗原基因工程菌
- 布氏杆菌M28株染色体基因库的建立
- 1991年
- 分别以PBR328和λgt11为载体建立了布氏杆菌强毒M28株染色体基因库。用超声波切割染色体 DNA,EcoRV酶切 PBR328,经平端连接重组、转化 RRI,转化率为2.5×10~1/ml,重组率为30%,得重组子1500余个.用 EccRI 人工接头将超声波切割的染色体 DNA 片段与λgt11连接重组,转染 y1090,转染率为2×10~5PEU/ml,重组率为15.9%,得重组噬菌体16000余个。布氏杆菌染色体基因库需要重组克隆为1470～2950个.
- 刘兴汉
- 关键词：布氏杆菌病染色体基因库
