刘卉芳
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院附属第三人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肠促胰岛素的功能研究进展被引量：1
- 2010年
- 研究表明，大约e／3的饮食所引起的胰岛素分泌都与肠道内分泌激素有关。其中，胃肠道分泌的肠促胰岛素是最主要的激素之一，其主要包括葡萄糖依赖性促胰岛素多肽（GIP）及胰高糖素样肽-1（GLP-1）。
- 刘卉芳陈凤玲
- 关键词：胰高血糖素
- 内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响。方法制备糖尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT)C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子(GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达。分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达。结果糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P<0.001)。经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P<0.05)。结论糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高。体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufm1的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程。
- 刘卉芳张惠洁刘晓燕胡其娴马晓文胡小磊陈凤玲
- 关键词：内质网应激巨噬细胞
- 人KIAA1199蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定
- 2012年
- 目的 KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础。方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中。经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199。其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性。此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体。结果 pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KI-AA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础。
- 刘卉芳刘晓燕张惠洁胡小磊胡其娴马晓文陈凤玲
- 关键词：GST融合蛋白多克隆抗体
- 人骨生成诱导因子基因慢病毒载体构建及在人主动脉平滑肌细胞中稳定过表达被引量：1
- 2012年
- 目的:构建人骨生成诱导因子基因(osteoinductive factor,OIF)慢病毒载体,并在人主动脉平滑肌细胞(human aorticsmooth muscle cell,HASMC)中稳定过表达OIF。方法:PCR扩增OIF-3FLAG,并克隆到慢病毒载体pMSCV PIG中,构建慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,并测序鉴定。应用脂质体将pMSCV PIG-OIF-3FLAG或pMSCV PIG与VSVG、GAG-POL共转染293T细胞,48 h后收集细胞上清,感染HASMC,48 h后加入嘌呤霉素4 d,即筛选出稳定过表达pMSCV PIG-OIF-3FLAG的HASMC细胞株,采用real-time PCR和Western blot检测OIF mRNA和蛋白表达。结果:构建OIF基因慢病毒表达载体pMSCV PIG-OIF-3FLAG,经酶切及测序后证实目的基因的插入位点和读码框正确;包装病毒感染HASMC,经real-time PCR和Western blot检测证实OIF mRNA和蛋白水平在该细胞株中高表达。结论:成功构建人OIF基因的慢病毒载体,并获得稳定过表达该基因的HASMC。
- 张惠洁刘卉芳张晓娜陈凤玲
- 关键词：慢病毒载体过表达
- 小鼠单核巨噬细胞Ufm1基因shRNA慢病毒载体构建及鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建小鼠Ufm1基因RNA干扰慢病毒载体,并实现该基因在小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)中的稳定表达抑制。方法根据小鼠Ufm1基因设计两条RNA干扰序列,合成靶序列双链DNA,与pFU-GW-RNAi载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。pFU-GW-RNAi载体、pHelper 1.0载体及pHelper 2.0载体共转染293T细胞包装产生慢病毒颗粒,并测定其滴度,随后感染RAW264.7细胞,建立稳定转染细胞株。将RAW264.7细胞分为空白组、阴性对照组及RNA干扰慢病毒感染组,用Real-time PCR检测Ufm1基因mRNA的表达量。结果 PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,shRNA片段完全正确插入慢病毒载体pFU-GW-RNAi中。在荧光显微镜下观察可见,293T细胞呈绿色荧光,并测得病毒滴度为9×105TU/μl。重组慢病毒感染RAW264.7后,用Real-time PCR检测到Ufm1基因mRNA的表达受到抑制。结论成功构建了小鼠RNA干扰慢病毒载体,并能够在RAW264.7细胞中有效沉默靶基因。
- 严士敏刘卉芳陈凤玲
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
