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刘立颖: 作品数：40 被引量：100H指数：7; 供职机构：首都儿科研究所更多>>; 发文基金：北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养项目北京市科委项目北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学自动化与计算机技术更多>>

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2009～2010年北京儿童腹泻中轮状病毒新VP4基因亚型的研究被引量：5: 2011年; P[8]b基因亚型是国内外新近发现的A组人轮状病毒(HRV)VP4基因的一种新亚型,本研究旨在建立有效鉴别HRV P[8]a和P[8]b基因亚型及P[4]和P[6]基因型的VP4基因打点杂交分型方法,并运用此方法对2009～2010年首都儿科研究所附属儿童医院门诊及住院腹泻患儿中P[8]b基因亚型HRV的流行情况及其G/P基因组合情况进行研究。通过对GenBank序列数据库可检索到的国内外HRV各种P基因型及亚型的VP4基因序列应用相关软件进行基因分析,在不同基因型别间核苷酸变异密集而相同P基因型内核苷酸高度保守的的位置设计各型别探针,并分别以本实验室上传GenBank的北京HRV地方株P[4]和P[6]基因型及P[8]a和P[8]b亚型的VP4基因作为相应型别探针的合成引物的设计模板及探针经PCR合成的合成模板,合成地高辛素标记的DNA探针。经测序验证所建立的VP4基因杂交分型方法结果可靠。对门诊88例(55%,88/160)及住院79例(70.5%,79/112)HRV腹泻患儿的P分型结果显示P[8]a亚型仍为主要型别,前者为96.6%(85/88),而后者为62.0%(49/79);P[8]b亚型在住院HRV感染腹泻患儿中占较高比例(27.9%,22/79),虽然其在门诊HRV感染患儿中也存在,但仅占2.3%(2/88);另外单纯P[4]基因型HRV感染仅在住院腹泻患儿中检测到1例(1.3%,1/79),而P[6]基因型在门诊及住院HRV感染腹泻患儿中均未检测到;本组标本中HRV P[8]b亚型主要与G9基因型组合。本研究表明G9P[8]b型HRV在北京腹泻儿童中有流行。; 董慧瑾钱渊张又邓莉赵林清朱汝南陈冬梅刘立颖贾立平; 关键词：A组轮状病毒 VP4基因 b基因亚型

2014—2019年北京市急性腹泻儿童中诺如病毒感染特征分析: 2022年; 目的了解2014—2019年北京市急性腹泻儿童中诺如病毒(Norovirus,NoV)的感染特征。方法收集2014年4月至2019年12月于首都儿科研究所附属儿童医院以急性腹泻为主要症状的患儿粪便标本,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)筛查NoV;阳性标本进行NoV VP1基因及RdRp基因扩增及序列测定,所测得的序列应用在线分型工具Norovirus Genotyping Tool 2.0进行基因分型。结果本研究共收集2577例急性腹泻儿童粪便标本,NoV核酸检测阳性的484例(18.78%,484/2577);NoV感染全年均可发生,具有明显的季节分布,流行高峰在秋冬季节。NoV的检出无性别差异(χ^(2)=1.77,P=0.183)。其中有399例得到了VP1区分型,结果显示有11个基因型,主要为GII基因群(98.25%,392/399),GII.4 Sydney型为主(52.13%,208/399),其次为GII.3型(19.8%,79/399)、GII.2型(18.5%,74/399)。267例完成了RdRp区分型,结果显示有10个基因型,以GII.P31型为主(57.3%,153/267),其次为GII.P12型(15.36%,41/267)及GII.P16型(14.98%,40/267)。双基因分型结果显示存在16种组合方式,主要为GII.4 Sydney[P31](53.18%,142/267),GII.3[P12]检出率呈下降趋势,而GII.4 Sydney[P16]检出率逐渐增高。结论NoV是北京市2014—2019年儿童急性腹泻的重要病原,流行的基因型别多样。; 贾立平赵林清邓莉刘立颖董慧瑾黄辉金凤华钱渊; 关键词：儿童诺如病毒急性腹泻基因分型

人偏肺病毒结构蛋白N、F在三种不同系统中的表达: 人偏肺病毒human metapneumovirus,简称hMPV,是荷兰学者Van den Hoogen等于2001年从患急性呼吸道感染的婴幼儿临床标本中首次分离鉴定出的一种新病毒,它与禽类肺病毒/(APV/)的C型有...; 刘立颖; 关键词：急性呼吸道感染人偏肺病毒结构蛋白发病机制; 文献传递

2020年北京地区儿童中急性胃肠炎相关诺如病毒的分子流行病学特征被引量：8: 2021年; 目的探讨北京地区2020年疫情防控措施下急性胃肠炎患儿诺如病毒的分子流行病学特点。方法采用回顾性重复横断面研究方法,2020年收集首都儿科研究所附属儿童医院就诊急性胃肠炎患儿的粪便标本或呕吐物标本1213份。首先用实时荧光反转录PCR进行标本中诺如病毒筛查,然后用反转录PCR对诺如病毒阳性标本进行病毒VP1基因和RdRp基因扩增,据核苷酸序列进行基因分型。采用χ^(2)检验对不同标本类型、患儿不同性别及不同年龄组间诺如病毒的检出阳性率进行比较。结果在1213份急性胃肠炎患儿标本中,共筛查到诺如病毒阳性标本215份,全年的检出阳性率为17.7%,阳性病例集中在秋冬季节[1、10、11及12月阳性率分别为28.6%(18/63)、26.2%(16/61)、22.8%(77/338)以及17.1%(89/520)]。粪便标本的阳性率明显高于呕吐物标本(χ^(2)=9.692,P<0.01),而男女性别差异无统计学意义(χ^(2)=0.041,P>0.05),各年龄组间诺如病毒检出率差异有统计学意义(χ^(2)=103.112,P<0.01),以6~48月龄诺如病毒的检出率较高。对G基因型分析显示共有3个基因群(GⅠ、GⅡ和GⅨ)诺如病毒流行,以GⅡ基因群为主,占总数的98.5%(196/199)。而GⅡ基因群中以GⅡ.4 Sydney为主要流行株,占GⅡ基因群的55.1%(108/196);其次为GⅡ.2型(29.6%,58/196),以往流行的GⅡ.3型(10.2%,20/196)诺如病毒在本次监测周期中较少。诺如病毒P基因型分析结果显示以GⅡ.P16为主,占61.5%(96/156);其次为GⅡ.P31(19.9%,31/156)。双基因测定结果显示以GⅡ.4 Sydney[P16]为主,占36.4%(56/154),其次为GⅡ.2[P16]占24.7%(38/154)。结论2020年诺如病毒的总阳性率与以往没有大的区别,但流行的基因型别构成有了明显的改变,且呈现多种基因型别诺如病毒的同时流行。; 贾立平赵林清周林刘立颖董慧瑾朱汝南钱渊; 关键词：诺罗病毒胃肠炎基因型

病毒样颗粒在昆虫杆状病毒表达体系中的表达、组装及其应用研究被引量：1: 2008年; 抗生素的普遍应用,使得细菌性疾病的危害大为降低,但病毒性疾病仍严重危害着人类.对病毒样颗粒的制备及应用研究是了解、诊断、治疗和预防病毒性疾病的一条非常有效的途径.病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)是由一个或多个病毒外壳蛋白构成,其结构类似于真正的病毒颗粒且不含有病毒核酸,已经被广泛应用于疫苗制备和病毒血清学诊断中,近来又成为基因治疗和药物运送的新型运载系统.同时作为一种有效的研究手段,为研究病毒单个蛋白的精细功能及各蛋白之间的相互作用[1],了解病毒的致病机制,尤其是对那些缺乏小动物模型,且在细胞中不能有效增殖的病毒,提供了一条研究途径.目前多数病毒的VLPs在真核表达系统以及少数病毒的VLPs在原核表达系统中都能够有效地实现自我组装,而从八十年代发展起来的昆虫杆状病毒表达系统已被证明是一种非常有效的能正确表达和重组病毒样颗粒的系统.应用昆虫杆状病毒体系表达、组装出病毒样颗粒,为VLPs后续的研究和开发应用提供了便利条件.本文综述了用该系统进行VLPs的生产和对其应用开发的研究.; 刘立颖钱渊

北京市6岁以下门诊和住院腹泻患儿腺病毒检出率及流行特征被引量：12: 2014年; 目的了解北京单中心门诊和住院腹泻患儿腺病毒(Ad)检出情况及流行特征。方法收集2010年1月至2013年12月首都儿科研究所6岁以下门诊腹泻、因腹泻住院和在住院期间出现腹泻症状患儿的粪便标本,采用PCR法检测Ad基因组DNA,分析流行特征。结果进入本文分析腹泻患儿3 357例,门诊和住院腹泻患儿分别为862和2 495例。13 357例腹泻患儿粪便标本中Ad检测阳性341例(10.2%),门诊和住院腹泻患儿Ad检出率分别为8.1%(70/862)和10.9%(271/2 495);门诊腹泻患儿肠道Ad(EAd)40例,包括Ad41和40型别,非肠道Ad(NEAd)30例(42.9%),包括Ad31和Ad2等5种型别;住院腹泻患儿EAd 271例,包括Ad41和Ad40型别,NEAd 157例(57.9%),包括Ad31和Ad7等11种型别;门诊和住院腹泻患儿Ad和NEAd检出率差异均有统计学意义(P分别为0.022和0.002)。2Ad在门诊腹泻男女患儿中的检出率分别为9.0%和6.5%,在住院腹泻男女患儿中的检出率分别为11.7%和9.5%,差异均无统计学意义(P分别为0.206和0.086)。男女患儿Ad检出率在住院和门诊腹泻患儿间差异均无统计学意义(P分别为0.080和0.112)。3门诊腹泻患儿~6月龄、~1岁、~2岁和~6岁的Ad检出率分别为4.4%、7.7%、11.6%和12.3%,各年龄段Ad检出率差异有统计学意义(P=0.017)。住院腹泻患儿<28 d、~6月龄、~1岁、~2岁和~6岁的Ad检出率分别为4.4%、9.4%、13.2%、12.3%和13.4%,各年龄段Ad检出率差异有统计学意义(P=0.001)。4无论是门诊亦或住院腹泻患儿,全年各月均可见Ad检出。5Ad合并轮状病毒感染门诊腹泻患儿8/70例(11.4%),住院腹泻患儿29/271例(10.7%),差异无统计学意义(P=0.862)。结论北京单中心门诊和住院腹泻患儿中Ad检出率为10.2%,以EAd41型占优势,NEAd31型在儿童腹泻中的作用也不容忽视。; 刘立颖张又贾立平董慧瑾钱渊; 关键词：腹泻腺病毒聚合酶链式反应

不同基因型别人博卡病毒病原学意义探讨: 背景人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)于2005年发现,至2010年已发现四个基因型别(HBoV 1-4)。本研究通过大样本的回顾性研究辅以系统的前瞻性研究,以了解不同基因型别的HBoV在北京地区儿童...; 赵敏朱汝南钱渊邓洁王芳孙宇董慧瑾刘立颖贾立平赵林清; 关键词：人博卡病毒流行病基因进化; 文献传递

2010⁃2019年北京地区腹泻患儿中人腺病毒41型Fiber基因分子特征和进化分析被引量：1: 2021年; 人腺病毒41型(Human adenovirus 41,HAdV-41)是引起儿童腹泻的重要病原之一。为了解北京地区腹泻儿童中HAdV-41 Fiber基因的分子变异和遗传进化特征,选取2010-2019年首都儿科研究所附属儿童医院门诊腹泻患儿HAdV-41阳性的粪便标本,扩增Fiber全基因,使用多种生物信息学软件进行系统发生、遗传进化、种群演变和选择压力等分析。结果显示HAdV-41本地毒株存在1644碱基(547氨基酸)和1689碱基(562氨基酸)两种长度的Fiber基因,截短的15个氨基酸位于Fiber蛋白纤维轴区。Mann-Whitney U秩和检验提示检测到感染短Fiber基因的HAdV-41的患儿年龄更小(P=0.036)。同源性分析结果显示Fiber基因的核苷酸和氨基酸序列同源性均大于97%,主要分为四个进化分支(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),其中Ⅰ和Ⅲ是主要的流行分支,分支Ⅰ主要在国内流行,而分支Ⅲ全球均有流行。HAdV-41共祖起源可追溯到1856年,平均进化速率每年为6.81×10^(-5)碱基替换/位点,10年间理论有效种群一直比较平稳呈缓慢下降趋势。压力选择分析表明,一个正向和三个负向选择位点均位于Fiber蛋白的纤维轴区。上述结果表明2010-2019年间不同进化分支的HAdV-41在北京地区流行,进化速率稳定。Fiber蛋白轴区存在两种不同类型的氨基酸缺失。; 刘立颖钱渊贾立平董慧谨朱汝南; 关键词：纤维蛋白腹泻分子进化

改进探针标记法斑点杂交在轮状病毒VP7分型中的应用被引量：6: 2009年; 目的建立一种更加简便的A组人轮状病毒(HRV)核酸斑点杂交VP7分型方法,以便用于对HRV流行情况进行调查。方法在HRVVP7编码基因各G基因型间高度变异而型内高度保守区域设计分型探针,在该区域的两侧相对保守区域设计一对通用引物,利用PCR分别将地高辛标记HRV5种常见型别(G1～4,G9型)的DNA探针,建立基于VP7的斑点杂交方法;选取经抗原检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测均为HRV阳性的2006至2008年住院腹泻患儿粪便标本200份,RT-PCR扩增VP7全基因,并对扩增阳性产物应用斑点杂交方法进行G型别分析。结果建立的斑点杂交方法在5种型别探针间无交叉反应,各型探针的检测灵敏度可达到10pg。200份PAGE阳性标本中162份RT-RCR扩增VP7基因阳性,斑点杂交显示G1型41例(25.3%),G2型2例(1.2%),G3型63例(38.9%),G9型35例(21.6%),混合感染19例(11.7%),杂交未分出型2例(1.2%),未检测到G4型HRV。结论本研究所建立的斑点杂交方法敏感度和特异度强,适合在HRV大规模分子流行病学调查时应用。通过该方法的初步应用,发现北京地区婴幼儿HRV除了常见的G1、G2和G3型外,还有G9型感染。; 董慧瑾钱渊张又陈冬梅赵林清刘立颖; 关键词：地高辛斑点杂交

2010-2014年北京地区5岁以下住院患儿腹泻标本中轮状病毒和腺病毒检的出情况和流行特征: 刘立颖张又钱渊贾立平董慧瑾赵林清

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