吴广谋
- 作品数：96 被引量：114H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家科技攻关计划国家科技型中小企业技术创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学化学工程更多>>
- 谷胱甘肽过氧化物抗体酶ScFv的基因构建
- 1998年
- 特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株５Ｃ９所分泌的ＭｃＡｂ经化学修饰后，其抗体酶活性比兔肝谷胱甘肽过氧化物酶活性高２．６倍。在所建成的杂交瘤细胞株基础上，通过提取该细胞总ＲＮＡ，分离ｍＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ，以及ＶＨ和ＶＬ基因的ＰＣＲ扩增、组装，成功地构建了谷胱甘肽过氧化物抗体酶ＳｃＦｖ基因。电泳分析证明，ＶＨ和ＶＬ基因长度分别为３４０ｂｐ和３２５ｂｐ；所构建的ＳｃＦｖ基因长度约为７５０ｂｐ，并带有ＳｆｉⅠ和ＮｏｔⅠ切点，可用于ＳｃＦｖ的基因重组及其表达。
- 冯书章刘子郭学军张国利吴广谋罗贵民高姝娟
- 关键词：谷胱甘肽过氧化物酶抗体酶基因构建
- 主动运载外源基因的重组蛋白载体PEAⅡ－HPhA及其制备方法和应用
- 本发明公开了主动运载外源基因的重组蛋白载体核心区PEAⅡ－HphA及制备方法和应用，还公开了主动运载外源基因的重组蛋白载体核心基因片段PEAⅡ－HphA；主动运载外源基因的重组蛋白载体是由导向分子－PEA毒素跨膜转位区P...
- 张国利朱平吴广谋岳玉环
- 文献传递
- 抗人ICAM-1单链抗体表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单链抗体(ScFv)的表达载体,并在大肠肝菌中表达。方法从分泌ICAM-1单抗的杂交瘤细胞中提取RNA,用RT-PCR扩增抗体VH和VL基因,重叠延伸PCR扩增人ICAM-1-ScFv基因,将其连接到pET-22b(+)载体上,转化大肠杆菌BL2(DE3),IPTG诱导表达,表达产物纯化及复性后,检测特异性及活性。结果序列分析表明抗ICAM-1 ScFv基因全长为744bp,编码247个氨基酸,其中含357bp的VH基因片段和342bp的VL基因片段。表达蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的32%。经变性和复性后,纯度达80%以上,复性率达25%。Western blot和ELISA检测,ScFv均可与ICAM-1抗原特异性结合。细胞黏附试验表明ScFv能抑制ICAM-1与HSB2细胞间的黏附,其作用稍弱于亲本mAb。结论已成功构建了抗人ICAM-1的ScFv表达载体,其表达产物具有抗体特异性和活性。
- 孙红万忠海张国利吴广谋朱平岳玉环
- 关键词：细胞间黏附分子-1单链抗体活性
- 腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达被引量：9
- 2000年
- 用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8～ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western
- 王克坚Dhungyel Om冯书章吴广谋杨海滨Egerton JR朱平殷震
- 关键词：腐蹄病节瘤拟杆菌基因克隆
- 表达大肠杆菌肠毒素ST_1—LT_B融合蛋白工程菌株的免疫原性研究被引量：1
- 1998年
- 已构建的能表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴ－ＳＬＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原，免疫小鼠，结果免疫小鼠至少能抵抗１．５ＬＤ１００的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ，ＳＴ＋，ＬＴ＋）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后，采集的血清能够中和天然ＳＴ１的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。
- 许崇波卫广森王卓冯书章吴广谋王文成张万林
- 关键词：融合蛋白
- 表达大肠杆菌肠毒素ST<sub>1</sub>—LT<sub>B</sub>融合蛋白工程菌株的免疫原性研究
- 1998年
- 已构建的能表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴ－ＳＬＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原，免疫小鼠，结果免疫小鼠至少能抵抗１．５ＬＤ１００的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ，ＳＴ＋，ＬＴ＋）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后，采集的血清能够中和天然ＳＴ１的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。
- 许崇波卫广森王卓冯书章吴广谋王文成张万林
- 关键词：融合蛋白免疫原性
- 产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体7D
- 本发明公开了产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体7D，它是从噬菌体抗体库Source bioscience筛选出来的，是全人源抗产气荚膜梭菌α毒素抗体，既可以实现中和毒素的治疗作用，同时克服了异源性抗体的多种副作用，免除了异...
- 张国利于佳田园朱进刘雨玲岳玉环吴广谋徐艳玲史飞赵鑫
- 文献传递
- 抗A型产气荚膜梭菌α毒素全人源双价单链抗体的构建、表达及其活性的初步研究被引量：1
- 2017年
- 目的:为防治A型产气荚膜梭菌α毒素引起的肠毒血症及气性坏疽等相关疾病,构建并高效表达中和α毒素(CPA)的特异性双价单链抗体,并对其生物学活性进行初步研究。方法:以全人源噬菌体抗体库中筛选得到的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体sc Fv基因为模板,PCR的方法扩增两条单链抗体片段并通过引物设计引入中间连接肽G4S或(G4S)3,亚克隆至原核表达载体p ET-28a(+),转化E.coli BL21,IPTG诱导表达、鉴定及表达产物的层析纯化;Western blot和间接ELISA方法检测与抗原的免疫结合活性;通过体外检测抗体抑制CPA水解卵磷脂的活性和溶血活性以及体内小鼠攻毒保护试验初步研究双价单链抗体的生物学活性。结果:双酶切鉴定及基因测序结果表明构建的双价单链抗体sc(Fv)2-5和sc(Fv)2-15均正确,诱导表达后经12%SDS-PAGE分析,两者均以包涵体形式表达且蛋白分子量符合理论值大小,Western blot和间接ELISA分析结果显示,构建的双价单链抗体与抗原CPA具有特异结合活性,且sc(Fv)2-15与抗原的结合活性明显高于sc(Fv)2-5和sc Fv,体外与体内生物活性试验结果进一步证明,sc(Fv)2-15中和毒素的能力较sc(Fv)2-5和sc Fv具有明显优势。结论:成功制备了抗A型产气荚膜梭菌α毒素的全人源双价单链抗体,为进一步研究该毒素引发的各类疾病的诊断和治疗奠定了基础。
- 王冬冬张国利岳玉环吴广谋田园刘雨玲吉元刚王金鹏李建潘荣荣马洪圆
- 关键词：生物活性检测
- 大肠杆菌不耐热性肠毒素LT_B基因的克隆及其核苷酸序列分析被引量：16
- 1997年
- 用内切酶ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切大肠杆菌质粒ｐＥＷＤ２９９，回收５０５ｂｐ的ＬＴＢ基因片段，再将载体ｐＵＣ１８用ＳａｃⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，最后将ｐＵＣ１８ＤＮＡ与５０５ｂｐ的ＬＴＢＤＮＡ进行连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＳａｃⅠ／ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１。再将ｐＸＬＴ１进行ＥｃｏＲⅠ酶切、大肠杆菌聚合酶ⅠＫｌｅｎｏｗ大片段补平、ＨｉｎｄⅢ酶切处理，然后与用ＨｉｃⅡ和ＨｉｎｄⅢ酶切的ｐＵＣ１８连接，转化至受体菌ＤＨ５α中，经ＸｂａⅠ／ＨｉｎｄⅢ酶切反应鉴定重组子，得到了理想重组子质粒ｐＸＬＴ１－１。将质粒ｐＸＬＴ１－１进行核苷酸序列分析。
- 许崇波卫广森吴广谋张立国冯书章张立国
- 关键词：大肠杆菌LTB基因基因克隆核苷酸序列分析
- 带有接头序列的受体导向性嵌合毒素
- 本发明涉及通过接头序列连接的，由毒素分子和导向分子组成的嵌合蛋白质。更具体地说，本发明涉及借助一个简单的5～15肽接头序列连接的，由作为细胞毒性剂部分的白喉毒素和作为导向部分的表皮生长因子组成的嵌合毒素，其制备方法及其作...
- 张国利朱平吴广谋
- 文献传递
