孙嗣梅
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析被引量：2
- 2005年
- 用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后, 亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coli BL21(DE3) plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／L IPTG诱导4h后获 得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与 RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达 97.53％,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋 白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异 性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。
- 孙嗣梅王利春康琳王景林
- 关键词：可溶性表达纯化WESTERN印迹A链原核表达质粒亲和层析法
- 蓖麻毒素A链及其突变体的表达、纯化和分析
- 蓖麻毒素(ricintoxin，RT)为一种植物来源的、毒性强的蛋白质毒素，其全毒素是由A、B两条多肽链(RTA、RTB)和连接两链的二硫键组成的异二聚体，分子量在62000～66000Da之间。由于毒性强、易于获得和可...
- 孙嗣梅
- 关键词：蓖麻毒素突变体克隆表达抗体制备
- 文献传递
- 重组肉毒毒素E(BoNT/E)重链C端的表达、纯化及其抗原性分析被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆、表达并纯化肉毒毒素E重链C端 (BoNT/EHC2 )保护性抗原片段 ,为BoNT/E的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法 :采用PCR扩增BoNT/EHC2基因 ,插入表达载体 pET2 8a ,转化E .coliBL2 1(DE3) pLysS获得表达工程菌株 ,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化。利用Western印迹和间接ELISA方法鉴定rBoNT/EHC2的抗原性。结果 :表达工程菌 pET2 8a EHC2 /BL2 1(DE3) pLysS于 37℃用 0 .2mmol/LIPTG诱导 6h ,表达的目的蛋白可以达到全菌蛋白的 37.9%。经过固定化金属螯合亲和层析一步纯化 ,rBoNT/EHC2的纯度可达 95 %以上。Western印迹和间接ELISA显示其具有良好的抗原性。结论 :首次克隆、表达并纯化了BoNT/EHC2片段 ,并可被抗天然BoNT/E马血清所识别 ,为制备相应的抗体及建立快速检测方法做好了准备。
- 贾宏丽杨利敏王景林康琳王利春孙嗣梅
- 关键词：抗原性
