尤芳芳
- 作品数：5 被引量：24H指数：4
- 供职机构：四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 大肠杆菌植酸酶的原核表达及酶学性质被引量：6
- 2009年
- 将大肠杆菌植酸酶appA基因重组于表达载体pET32a中,导入大肠杆菌Origami(DE3)构建工程菌Origami(DE3)-pET32a-appA.对表达的appA重组植酸酶经Ni柱亲和纯化、SDS-PAGE分析表明,纯化后条带单一,酶的纯度较高.对其酶学性质的研究表明,该酶反应的比活力为3.36×106U/mg;最适pH为4.5;最适温度为60℃;在80℃和85℃的耐干热能力超过耐湿热能力;在37℃下,Mg2+﹑Ca2+﹑Mn2+对酶活性有促进作用,Co2+﹑Cu2+﹑K+对酶活性有不同程度的抑制作用,而Fe3+和Zn2+对酶活性有强烈的抑制作用;此外,该酶还具有非常好的抗胃蛋白酶水解的能力和部分抗胰蛋白酶水解的能力.
- 黄敏徐辉曹瑜朱俊张飞伟尤芳芳乔代蓉曹毅
- 关键词：原核表达酶学性质
- 油菜根肿休眠孢子间接酶联免疫检测法的建立被引量：4
- 2008年
- 根肿病是由专性寄生菌——芸苔根肿菌感染所引起的一种严重影响十字花科植物生长的植物病害．本文针对根肿病缺乏简便、快速检测方法的问题，制备油菜根肿休眠破碎孢子抗血清，确定抗血清及酶标抗血清最佳工作浓度，优化间接酶联免疫反应条件；优化的抗血清和酶标血清的工作浓度分别为1：2000和1：1000，孢子的饱和包被浓度为10^7个／mL.确定休眠孢子稀释液的最低检测浓度为10个／mL，建立快速检测油菜根肿菌的间接酶联免疫吸附测定法，该方法稳定、可靠，板间误差和板内误差均小于10．0％．与9种土壤分离得到的真菌和7种土壤常见菌黑曲霉、粉红粘帚霉、立枯丝核菌、产黄青霉、绿色木霉、枯草杆菌、脓杆菌进行特异性实验，其中一种未知菌MI交叉反应率〉30％，其余在8．51％～24．88％之间，真菌的交叉反应率普遍高于细菌．对已知孢子浓度的土壤进行了检测，土壤样品休眠孢子浓度的最低检测限度为10^3个/g．
- 赵向丽尤芳芳徐辉苏艳秋吴鹏曹毅乔代蓉
- 关键词：休眠孢子抗血清间接ELISA
- 播娘蒿DsCOR基因的原核表达、蛋白纯化、及性质研究被引量：2
- 2007年
- 利用PCR方法扩增DsCOR基因的蛋白编码序列,经BamHⅠ、SacⅠ酶切后连接入pET32a原核表达载体,构建的pET32a-DsCOR融合重组表达质粒转化大肠杆菌BL21进行原核表达.建立了"煮沸-镍离子亲和层析"的蛋白纯化方法.对纯化的DsCOR蛋白进行高温耐受性、pH耐受范围、紫外耐受性方面的研究.
- 刘玉坤汪红杨舸王乐尤芳芳苏艳秋郭红曹毅乔代蓉
- 关键词：播娘蒿原核表达蛋白纯化
- 一株中度嗜盐菌Halomonas sp.NY-011的分离与鉴定被引量：5
- 2008年
- 从盐生杜氏藻（Dunaliella salina）培养物内筛选到一株能在广泛NaCl浓度范围（0．5％～21％，w／v）和广泛pH值范围（pH5～11）生长的嗜碱耐盐菌NY-011．细胞形态电镜观察和生理生化分析表明，NY-011呈杆状，大小为（0．51～1．53）μm×（1．02～2．55）μm，革兰氏阴性，有荚膜，无鞭毛，不运动，好氧生长，淀粉水解酶呈阴性，接触酶呈阳性．其最适培养条件为：2％NaCl，30℃，起始pH值10．16S rDNA序列比对和构建的系统发育树表明该菌属于盐单胞菌属（Halcrmonas）．Biolog分析显示，在检测的95种碳源中，该菌仅有10种的代谢指纹能与数据库类型相匹配．且代谢情况和其亲缘关系最近的Halomonas pantelleriensis亦有差异.
- 熊焰吴鹏尤芳芳阮琨曹毅乔代蓉白林含
- 关键词：盐单胞菌属中度嗜盐菌RDNA系统发育分析
- 杂合抗菌肽LPCB在毕赤酵母中的表达条件优化被引量：7
- 2012年
- 为获取能表达具有天然活性的杂合抗菌肽的重组酵母菌,确定其最佳表达条件,将构建好的重组酵母表达载体pPICZα-A-CecropinB(1～10)-Magainin2(1～12)(简称pPICZα-A-CBMA)和pPICZα-A-Lfcin-Pro-CecropinB(简称pPICZα-A-LPCB)经SacⅠ线性化处理,分别电转入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris X-33,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,PCR扩增验证,甲醇诱导表达.采用抑菌圈法初步测定产物活性,优化杂合肽LPCB诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度、培养基pH等表达条件,传代检测其质粒稳定性.结果显示,基因工程菌P.pastoris X-33/pPICZα-A-CBMA和P.pastoris X-33/pPICZα-A-LPCB成功构建.表达产物前者抑菌活性微弱,后者抑菌活性良好.杂合肽LPCB的最佳表达条件为:25℃,pH中性培养,每24 h添加0.5%(V/V,φ)甲醇,诱导表达72 h.重组酵母菌pPICZα-A-LPCB在培养超过100代后,未发生质粒丢失.
- 李增婷谢力冯顺利尤芳芳何桂桦林强曹毅乔代蓉
- 关键词：毕赤酵母表达条件优化
