崔亚利
- 作品数：10 被引量：13H指数：3
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- 肺炎链球菌假想的溶菌酶样蛋白的活性分析和鉴定
- 2010年
- 目的 探索肺炎链球菌中一种假想的溶菌酶样蛋白的活性.方法 生物信息学分析该基因的功能结构域;利用长臂同源PCR对该基因进行敲除,观察D39野生菌和缺陷菌在生物学性状的改变;利用底物PNP-（GIcNAc）和溶壁微球菌,构建过表达载体,绘制生长曲线,对截断和全长蛋白的溶菌酶活性进行鉴定.结果 生物信息学分析结果显示该基因的编码产物为β-1,4-N-乙酰胞壁酸糖苷酶,属于糖基水解酶25家族;野生菌为长链生长,缺陷菌呈短链状;溶菌酶和假想的溶菌酶样蛋白均可使底物释放出游离的对硝基苯酚,A405nm吸光度值分别为1.166和0.792;同时也可使得溶壁微球菌发生溶解;含过表达质粒的肺炎链球菌较之野生菌,溶解较快.结论 假想的溶菌酶样蛋白具有溶菌酶活性,是一种新的溶菌酶.
- 杨晓亮孟江萍崔亚利黄健刘鑫胥文春
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶
- 快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增技术的建立被引量：4
- 2010年
- 目的建立快速检测淋球菌porA和16S rRNA基因的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,探讨其用于淋球菌感染早期诊断的可行性。方法利用Primer-ExplorerV3软件分别针对淋球菌porA及16S rRNA基因设计6条引物(2条内引物FIP、BIP,2条外引物F3、B3,2条环引物LF、LB),以淋球菌标准菌株基因组DNA为模板,进行LAMP扩增,同时,以外引物F3、B3为PCR引物,进行PCR扩增,并比较2种扩增方法的灵敏度和特异性。结果LAMP法与PCR法灵敏度相同,可检测到10个拷贝的目的基因;其针对淋球菌porA和16S rRNA基因的引物对脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和大肠埃希菌的DNA均不能扩增。结论已成功建立了检测淋球菌porA和16S rRNA基因的LAMP技术,为淋球菌的快速检测提供了新的手段,有望成为淋球菌常规检测的简便方法。
- 崔亚利何於娟刘鑫胥文春刘明芳龚艺贺潇
- 关键词：淋球菌RRNA基因环介导等温扩增技术聚合酶链反应
- 环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测淋球菌porA基因和16SrRNA基因
- 目的:建立检测淋球菌porA基因和16S rRNA基因的环介导等温扩增技术,探讨其在淋球菌感染早期诊断中的应用。方法:利用Primer-Explorer V3软件分别针对淋球菌porA及16S rRNA基因设计六条引物(...
- 崔亚利刘鑫胥文春刘明芳龚艺贺潇王虹何於娟
- 关键词：淋球菌16SRRNA基因PCR
- 文献传递
- 肺炎链球菌假想蛋白SPD0414的表达纯化及保守性分析被引量：3
- 2010年
- 目的:获得纯化的肺炎链球菌(S.pn)重组假想蛋白SPD0414,并分析其在常见S.pn菌株中的保守性。方法:利用PCR方法扩增SPD0414蛋白胞外区核酸序列,将其克隆到原核表达载体ppSUMO内,转化到E.coliBL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后Ni-NTA树脂纯化重组蛋白。用SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白特异性及纯度。通过纯化蛋白免疫BALB/c小鼠制备其多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western blot方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在6种常见肺炎链球菌分离株的保守性。结果:克隆的SPD0414序列与Gene Bank中的数据相符,并实现了重组SPD0414蛋白高水平的可溶表达纯化蛋白免疫BALB/c小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western blot验证SPD0414蛋白在6株常见肺炎链球菌菌株中均有表达。结论:成功制备了高滴度、高特异性的SPD0414多克隆抗体,证实了SPD0414在肺炎链球菌不同菌株间保守性较高,为肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础。
- 龚艺崔亚利牛司强张雪梅胥文春何於娟王虹
- 关键词：肺炎链球菌表达纯化多克隆抗体保守性
- 鼻腔、腹腔免疫DnaJ蛋白对小鼠肺炎链球菌感染的保护效果及机制的研究
- 目的：
肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，S.pn）是严重侵袭性感染和上呼吸道感染最重要的病原体之一，使用有效的疫苗预防其感染是一个重要手段，WHO建议将S.pn结合疫苗纳入国家免疫计划...
- 崔亚利
- 关键词：肺炎链球菌蛋白疫苗腹腔免疫免疫保护
- 文献传递
- 肺炎链球菌假想蛋白SPD0873的表达纯化及保守性分析被引量：2
- 2010年
- 目的通过构建原核表达载体，获得纯化的肺炎链球菌S．pn重组假想蛋白SPD0873，并制备多克隆抗体，进一步分析其在常见S．pn菌株中的保守性。方法分离培养D39型肺炎链球菌，获取其基因组DNA。利用PCR方法扩增去除信号肽的spd0873序列，采用基因体外重组法将spd0873序列克隆到原核表达载体pET-32（a）内，测序鉴定。将重组质粒转化到E．coli Rossetta（DE3）中，经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的SPD0873重组蛋白，经Ni—NTA树脂纯化后，获得的重组蛋白用SDS—PAGE和Western印迹鉴定；将鉴定后纯化的蛋白免疫BALB／C小鼠制备多克隆抗体，并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价，Western印迹方法分析多克隆抗体的特异性，同时，鉴定该蛋白在5种常见肺炎链球菌分离株的保守性。结果克隆的spd0873序列与GenBank中的数据相符，并实现了SPD0873蛋白高水平的可溶表达。纯化蛋白免疫BALB／C小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体，Western印迹验证SPD0873蛋白在5株常见肺炎链球菌菌株中均有表达。结论成功制备了高滴度、高特异性的SPD0873蛋白多克隆抗体，同时，检测到SPD0873蛋白在5种常见的肺炎链球菌菌株中非常保守，为研究该蛋白的生物学功能及肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础。
- 崔亚利王虹尹楠林龚艺牛司强尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌表达纯化多克隆抗体
- 肺炎链球菌假想蛋白SPD-0873溶菌酶活性的分析和鉴定
- 目的:探索肺炎链球菌假想蛋白SPD-0873的溶菌酶活性。方法:通过生物信息学分析假想蛋白SPD-0873的结构功能域;体外表达纯化SPD-0873蛋白;按照经典溶菌酶活性试验,利用底物PNP-(GlcNAc),对SPD...
- 杨晓亮崔亚利王虹刘鑫庞丹班艳娜尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶
- 文献传递
- 一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达被引量：2
- 2010年
- 目的使用重叠PCR方法构建构建△Al46Ply突变体，原核可溶性表达△Al46Ply蛋白，并明确其毒力变化情况；分析肺炎链球菌溶血素（pneumolysin，Ply）在不同血清型肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae，SPN）中的表达情况。方法以SPND39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体pry基因所需引物；利用重叠PCR方法扩增合成△Al46ply突变体。通过溶血实验分析其溶血活性，利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力，并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况。结果突变体基因测序结果显示，Plyl46位密码子GCT3个碱基被缺失，△Al46ply突变体构建成功，并实现了△Al46Ply的可溶性表达，得到纯度〉90％的重组蛋白。△A146Ply蛋白浓度为100000ng／ml亦未表现出溶血活性。△Al46Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性。Western印迹结果显示，△Al46Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应。结论△Al46Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子，可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体。
- 吴凯峰张薇薇崔亚利张雪梅胥文春庞丹刘鑫王虹
- 关键词：肺炎链球菌溶血素重叠PCR突变体
- 肺炎链球菌溶血素ΔA146Ply黏膜免疫的保护效果被引量：3
- 2011年
- 目的探讨肺炎链球菌146位氨基酸缺失的溶血素ΔA146Ply蛋白的保护作用,评价其作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白的可行性。方法将BALB/c小鼠分为2组:试验组(15μgΔA146Ply蛋白与1 mg/ml CT佐剂的混合物30μl)和对照组(PBS与CT佐剂的混合物30μl),经鼻腔免疫小鼠,每周1次,连续4周。末次免疫1周后,ELISA检测免疫小鼠血清及唾液中特异性抗体水平;并进行ΔA146Ply对多种血清型肺炎链球菌感染的主动保护试验及其特异性抗血清的被动保护试验;West-ern blot分析Ply蛋白在肺炎链球菌中的保守性;间接ELISA检测免疫小鼠血清IgG抗体亚型和细胞因子IL-17A水平。结果试验组小鼠血清中IgG效价为5.12×105,唾液中IgG及IgA效价分别为4.0×103和4.8×103;ΔA146Ply黏膜免疫可有效延长小鼠的生存时间,并提高其生存率;其对肺炎链球菌NCTC7466、CMCC(B)31436、CMCC(B)31614和CMCC(B)31207的保护率分别为50.0%、41.7%、50.0%和41.7%;被动免疫保护试验试验组小鼠的存活率为70%;ΔA146Ply黏膜免疫诱导的抗体亚型主要为IgG1和IgG2b,IL-17A的水平高达(678.55±189)pg/ml,于刺激后48 h达峰值。Ply在4种菌株中均具有良好的保守性。结论ΔA146Ply黏膜免疫可诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫反应,能有效抵抗多株致病性肺炎链球菌的感染,提示ΔA146Ply是肺炎链球菌较好的疫苗候选蛋白。
- 姚润崔亚利袁军王虹龚艺尹一兵张雪梅
- 关键词：小鼠
- 肺炎链球菌溶血素黏膜免疫抗定植保护作用的研究
- 2011年
- 目的原核表达△A146Ply蛋白，评价△A146Ply黏膜免疫对肺炎链球菌（Streptococcuspneumon—ioe，5．Pn）在宿主鼻咽部定植的保护作用。方法IPTG诱导、Ni—NTA树脂纯化获得纯化的△A146Ply蛋白，经黏膜免疫BALB／C小鼠，制备其特异性抗血清；进行体内抗定植实验，观察小鼠鼻咽部灌洗液和肺部残存的细菌数量，检测△A146Ply黏膜免疫对19F型肺炎链球菌在鼻咽部定植的保护作用。为验证该保护作用是否具有广谱性，培养血清型14型、3型、6型和2型S．pn，经鼻腔感染免疫后小鼠，评价△A146Ply蛋白黏膜免疫对多株肺炎链球菌定植的保护作用。进行体外抗黏附实验，检测△A146Ply蛋白及其抗血清是否对无荚膜的肺炎链球菌R6黏附A549细胞具有抑制作用。结果获得了纯度〉90％的目的蛋白；体内实验结果显示，△A146Ply黏膜免疫可以显著降低肺炎链球菌19F在宿主鼻咽部和肺部残存的细菌数量（P〈0．01）；14型和3型肺炎链球菌在免疫后小鼠鼻咽部及肺部定植的数量均显著下降（P〈0．05），2型肺炎链球菌在免疫后小鼠肺部定植的数量显著下降（P〈0．05），6B型肺炎链球菌在免疫组与对照组小鼠鼻咽部及肺部均无显著差异（P〉0．05）；△A146Ply特异性抗血清△A146Ply蛋白对R6黏附A549细胞的抑制效应呈剂量依赖性。结论△A146Ply蛋白经黏膜免疫BALB／C小鼠可以对多种血清型的肺炎链球菌在宿主鼻咽部及肺部的定植提供显著保护作用，为Ply作为肺炎链球菌疫苗候选蛋白的应用提供了实验依据。
- 杨晓丹袁军王虹尹楠林龚艺崔亚利尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌黏膜免疫
