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旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1的原核表达及鉴定被引量：4: 2014年; 目的原核表达旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1,并进行鉴定。方法以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增CK-1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CK-1,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG分别诱导表达3、4、5 h,表达产物进行12%SDS-PAGE分析。以纯化的旋毛虫肌幼虫免疫小鼠制备鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清,以H7402细胞免疫小鼠制备鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清,以重组CK-1蛋白免疫小鼠制备鼠抗CK-1蛋白阳性血清,分别以其作为一抗,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-28a(+)-CK-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;IPTG最佳诱导时间为4 h,表达的重组CK-1蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.5%;重组CK-1蛋白可被鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清和鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清识别,鼠抗CK-1蛋白阳性血清可识别旋毛虫肌幼虫蛋白和H7402全细胞蛋白,在相对分子质量38 500处均可见特异性条带,表明重组CK-1蛋白是一个交叉抗原,且具有良好的反应原性。结论原核表达了旋毛虫CK-1基因,为进一步研究旋毛虫的抗肿瘤效应奠定了基础。; 左绍志张桐嘉常乐杨滨僮宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣; 关键词：旋毛虫肝癌细胞原核细胞

公司僵局救济研究: 随着我国社会主义市场经济建设进程的加快，公司在市场经济中的地位举足轻重，发挥着令人瞩目的作用。其中，有限责任公司等封闭类公司以其法律管制较少、股东人数有限、人合和资合要素的统一等特点适应了市场经济和中小企业发展的现实需要...; 常乐; 文献传递

新孢子虫表面抗原P40基因的克隆及原核表达被引量：3: 2014年; 目的克隆并原核表达新孢子虫表面抗原P40基因。方法 PCR扩增新孢子虫表面抗原P40基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒pET-28a-P40,转化入大肠埃希菌Rosseta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果重组原核表达质粒pET-28a-P40经PCR及双酶切鉴定构建正确;表达的重组P40蛋白相对分子质量约为40 000,有效识别鼠抗新孢子虫阳性血清。结论成功在Rosseta(DE3)中表达了新孢子虫表面抗原P40基因,为新孢子虫病疫苗的研制及血清学检测方法的建立奠定了基础。; 杨滨僮赵权贺鹏飞常乐宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣; 关键词：新孢子虫原核细胞基因表达

新孢子虫速殖子在HCT-8、Vero和Hela细胞中培养的比较被引量：3: 2014年; 目的观察和比较新孢子虫速殖子在人结肠癌细胞(HCT-8)、人宫颈癌细胞(Hela)和非洲绿猿肾细胞(Vero)中的生长情况。方法分别用HCT-8、Hela和Vero细胞(RPMI-1640培养基)连续培养新孢子虫速殖子9d,观察并计数速殖子数量,绘制生长曲线;4d取培养物作吖啶噔染色,用激光共聚焦显微镜观察速殖子。结果新孢子虫速殖子用HCT-8、Vero和Hela细胞培养均生长,尤以在HCT-8和Vero细胞中生长较快,第6d虫体数达到高峰,且在HCT-8中高峰期可持续2d,在Vero中生长高峰可持续1d。在Hela细胞中速殖子生长较慢,虫体数量一直处于较低水平。吖啶噔染色观察,HCT-8和Vero细胞中纳虫泡较大且速殖子数量较多,Hela细胞内纳虫泡较小且速殖子数量较少。结论新孢子虫速殖子在HCT-8细胞中生长较快,纳虫泡较大且速殖子数量较多。HCT-8细胞可以替代Vero细胞用于速殖子的体外培养。; 边征征吕强宫鹏涛常乐邢沈阳张西臣李建华; 关键词：新孢子虫速殖子 HCT-8 体外培养

RNA干扰IDH2基因对HCT-8细胞增殖能力的影响: 2012年; 目的:研究RNA干扰(RNAi)对结肠癌HCT-8细胞IDH2基因表达的抑制作用及干扰后对HCT-8细胞增殖的影响,为结肠癌的基因靶向治疗提供理论依据。方法:实验分siRNA干扰质粒转染组、阴性质粒对照组和HCT-8细胞空白对照组。构建靶向基因IDH2的siRNA真核绿色荧光载体重组质粒PGPU6/GFP/Neo-IDH2,利用FuGENE HD转染剂转染HCT-8细胞,通过荧光定量PCR检测IDH2mRNA的表达情况及MTT法检测结肠癌HCT-8细胞增殖变化。结果:在荧光显微镜下进行细胞计数,细胞转染率为74%。实时荧光定量PCR检测,siRNA重组质粒PGPU6/GFP/Neo-IDH2对IDH2基因表达的抑制率为85.02%,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。MTT检测,干扰质粒转染组细胞的增殖能力明显低于空白对照组(P<0.05)。结论:抑制IDH2基因的表达可影响结肠癌细胞的增殖能力,提示IDH2基因在结肠癌的发生发展中起重要作用,抑制IDH2基因的表达可能成为一种治疗结肠癌的方法。; 徐晓芳宋晗星邢沈阳吕强高江明赵娜常乐高峰宫鹏涛李建华张国才张西臣; 关键词：RNA干扰

犬新孢子虫NCLIV<sub>0</sub>19770蛋白抗新孢子虫与弓形虫交叉保护效果的研究: 新孢子虫病（Neosporiasis）是一种主要感染牛和犬由犬新孢子虫（?）（Neospora caninum）寄生于宿主体内所引起的致死性原虫病。新孢子虫可造成母畜的频繁流产、死胎,并可在家畜及伴侣宠物中进行垂直传播。...; 常乐; 关键词：犬新孢子虫弓形虫

犬新孢子虫NCLIV019770蛋白抗新孢子虫与弓形虫交叉保护效果的研究: 新孢子虫病(Neosporiasis)是一种主要感染牛和犬由犬新孢子虫(?)(Neospora caninum)寄生于宿主体内所引起的致死性原虫病。新孢子虫可造成母畜的频繁流产、死胎,并可在家畜及伴侣宠物中进行垂直传播。...; 常乐; 关键词：犬新孢子虫弓形虫; 文献传递

Y药业股份有限公司采购与配送系统智能化研究: 医药行业是按国际标准划分的15类国际化产业之一,而且它也是增长最快产业之一。改革开放以来,随着人民生活水平的提高和对医疗保健需求的不断增长,我国的医药工业一直保持着较快的发展速度,医药工业产值年均递增17％,成为国民经济...; 常乐; 关键词：企业管理信息技术; 文献传递

顺应论视角下英语专业学生会话中的人称指示语研究: 作为指示语研究的重要组成部分,人称指示语的研究受到越来越多的重视。目前对人称指示语的研究涉及语篇的各个方面。然而,对于人称指示语在交际文本中的研究甚少,这也是本研究的意义所在。基于顺应理论的视角,本文旨在从物理世界、社交...; 常乐; 关键词：人称指示语顺应论英语专业学生会话

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常乐