张坚宣
- 作品数：11 被引量：51H指数：4
- 供职机构：复旦大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用DNA短串联重复序列多态性诊断先天愚型患者中21号额外染色体的双亲起源被引量：19
- 1998年
- 目的用短串联重复序列－Ｄ２１Ｓ２１５和Ｄ２１Ｓ１２０的多态性诊断２１三体患者中２１号额外染色体的双亲起源。方法ＰＣＲ扩增上述两个短串联重复序列，对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色检测。根据患者及其父母基因型的比较来确定２１号额外染色体的双亲起源。结果在２４例２１三体患者中，１７例的２１号额外染色体的双亲来源被检测出，其中来自母亲和父亲的分别为１２例和５例。母亲来源组母亲的平均年龄明显高于父亲来源组母亲的年龄。结论根据这两个标记能确定２１三体患者中２１号额外染色体的双亲起源。
- 史庆华张坚宣潘淑娟单祥年单祥年单祥年张锡然赵寿元
- 关键词：先天愚型21号染色体基因多态性DNA
- 一种能精确检测人间期细胞核中21号染色体拷贝数的DNA探针被引量：4
- 1999年
- 目的制备能精确检测人类间期细胞核中２１号染色体拷贝数的ＦＩＳＨ探针。方法利用万能引物ＰＣＲ法，从定位于人２１ｑ１１的ＹＡＣ克隆８８１Ｄ２分离制备ＤＮＡ探针，并用于与８例正常人和５例２１三体患者的外周血淋巴细胞中期相和间期核，及经细胞松弛素Ｂ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎＢ）诱导的双核细胞进行ＦＩＳＨ分析。结果该探针具有以下特点：（１）长度集中于３５０～７５０ｂｐ；（２）其靶序列位于２１号染色体长臂上且紧靠着丝粒；（３）特异性强；（４）杂交信号明亮，容易辨认；（５）对中期相及间期细胞核中２１号染色体的检出率分别高达９９．６０％和９８．４０％。结论制备的ＤＮＡ探针能精确检测人类间期细胞核中２１号染色体的拷贝数。
- 史庆华单祥年张坚宣张锡然张锡然邓小昭陈宜峰余龙邓小昭郑其平
- 关键词：唐氏综合征基因诊断DNA探针21号染色体
- 用万能引物PCR法从YAC中分离制备荧光原位杂交探针的研究被引量：1
- 1998年
- 报道了一种从微量且未知碱基顺序的YAC DNA中制备FISH探针的新方法——万能引物PCR(UP PCR),即把复性后的UP-Linker连接于PFGE分离后经Alu Ⅰ酶切的YAC DNA上,再用UP对其进行PCR扩增和标记。由于Alu Ⅰ的广谱性和UP与Linker长度不同等,使该法能根据PCR效率调节扩增产物的广泛性向特异性的转变,且产物能覆盖YAC嵌入DNA的全长。此法制备的人21号染色体FISH探针,特异性强,杂交信号明亮,21号染色体的检出率高。该法稳定简便。
- 史庆华张坚宣潘淑娟张锡然陈宜峰单祥年黄浩杰余龙赵寿元郑其平Adler I-D
- 关键词：PCRYACFISH
- CB-FISH法检测人体内嵌合的21号染色体非整倍体被引量：1
- 2000年
- 目的 探讨 2 1三体患者体内二倍体细胞增多的机理。方法 用松胞素 - B诱导的双核细胞荧光原位杂交技术 ,对人体内 2 1号染色体非整倍体和培养细胞中 2 1号染色体分离异常的发生率进行检测。结果 2 1三体患者体内 ,二倍体细胞率 (16 .90‰± 10 .70‰ )远高于 2 1四体细胞率 (0 .42‰± 0 .6 4‰ ) (P=0 .0 0 0 )。在培养的正常人和 2 1三体患者细胞中 ,2 1号染色体不分离率 (3.6 9‰± 2 .5 0‰和 8.2 2‰±5 .5 4‰ )显著高于丢失率 (0 .10‰± 0 .30‰和 0 .43‰± 0 .49‰ ) (P=0 .0 0 0 )。结论 2 1三体患者体内较高比例的二倍体细胞源于因三体细胞中 2
- 陈建芳史庆华张坚宣李桦张小琼罗菊珍周桂香单祥年张锡然
- 关键词：21号染色体非整倍体嵌合体荧光原位杂交
- 应用间期荧光原位杂交技术进行快速产前诊断被引量：2
- 1998年
- 选用１８、Ｘ着丝粒探针及２１号染色体特异重复序列探针分别对未培养的羊水和绒毛细胞进行了间期荧光原位杂交。结果表明，常染色体探针出现３个及１个信号点的比例约为１％和６％。Ｘ染色体探针出现３点的比例也在１％左右，可为常染色体单体或三体以及Ｘ三体或多体提供诊断依据。同传统的细胞遗传学方法比较，间期荧光原位杂交具有简便、迅速、灵敏等优点。
- 张锡然潘淑娟张坚宣陈宜峰李朝军许争峰王迅美
- 关键词：荧光原位杂交间期细胞染色体异常产前诊断
- 用三色荧光原位杂交(Three-Color FISH)检测小鼠精子中染色体数目异常的研究被引量：2
- 1999年
- 用小鼠X、Y和8号染色体特异的DNA探针，与经DTT（dithiotreitol）和LIS（lithium-3，5-diiodosalicylicacid）解聚的小鼠附单精子进行三色荧光原位杂交（fluoresceoceinsituhybridization，FISH），以检测精子中的染色体数目异常，并与MMⅡ染色体分析比较．结果表明精子三色FISH具有以下优点和特点：（1）方法敏感稳定，且简便快速；（2）在每一个体至少分析10000尾精子的基础上计算非整倍体单，因此结果更为准确；（3）能检测多倍体即减数分裂停止的发生率及停止的时期；（4）不仅能测定发生于试数分裂Ⅰ（MI）的染色体分离异常，还能检测发生于减数分裂Ⅱ（MII）的不分离和丢失．并对探针的选用、分析标准的建立以及三色FISH用于精于染色体分析的必要性等进行了讨论．
- 余龙张坚宣史庆华I.-D.Adler
- 关键词：原位杂交精子染色体数目异常
- 性别及年龄对外周血淋巴细胞中21号染色体分离的影响被引量：11
- 1999年
- 目的阐明性别与年龄对体细胞中２１号染色体分离的影响。方法用细胞松弛素Ｂ处理不同年龄及性别正常人外周血淋巴细胞获得的双核细胞，以２１号染色体近着丝粒特异性探针进行荧光原位杂交，同时检测２１号染色体丢失及不分离。结果具有４个信号点的双核细胞数与年龄的相关系数为－０．３５（Ｐ＜０．０１），２及６个信号点的双核细胞数与年龄的相关系数分别为０．１８和０．３８（Ｐ＜０．０１），２１号染色体不分离数和微核细胞数与年龄的相关系数分别为０．５６（Ｐ＜０．０１）和０．７０（Ｐ＜０．０１）。结论在不同年龄正常人外周血淋巴细胞中，微核数随年龄的增加而增加。２１号染色体不分离与年龄的关系极显著，无论在体内还是体外，２１号染色体不分离远远高于丢失。
- 张坚宣史庆华潘淑娟张锡然单祥年余龙
- 关键词：21号染色体年龄性别染色体分离DOWN综合征
- 人柠檬酸合成酶cDNA的克隆及其表达谱分析被引量：4
- 2000年
- 在动物、植物、微生物细胞中普遍存在的三羧酸循环(TCA循环)是产生ATP的主要途径,它不仅参与糖的分解代谢,也参与蛋白质和脂肪的分解代谢。柠檬酸合成酶在TCA循环中起着关键的调节作用,它通过催化乙酰辅酶A与草酰乙酸缩合成柠檬酸。本文用基因组信息学方法获得的一个长1636bp的EST重叠群序列,它与猪柠檬酸合成酶cDNA序列高度同源。从这一序列出发,又用PCR方法从人的睾丸组织和骨骼肌组织的cDNA分子库中,分别克隆到一个1492bp的cDNA片段,在其序列中含有一个长1401bp的可读框,该可读框推导的编码蛋白由466个氨基酸组成,它与猪柠檬酸合成酶、鸡柠檬酸合成酶及酵母柠檬酸合成酶的同源度分别达95.9%,92%和60.9%,故认为该cDNA序列可能就是来自人类柠檬酸合成酶基因的转录本。Northern分析表明人类柠檬酸合成酶在心脏和骨骼肌中呈高表达,在脑、肾和胰腺组织中度表达,在小肠和胸腺中未能检出表达,而在其他9种被检测的组织中仅有低表达。
- 刘擎余龙韩晓枫傅强张坚宣唐华赵寿元
- 关键词：CDNA克隆表达谱分析
- 以胞质分裂阻滞法研究女性年龄与体细胞中21号染色体分离异常的关系
- 1999年
- ２１三体是人类最常见的先天性疾病，约９５％患儿的超数２１号染色体来源于母亲，且随母龄增加患儿出生率也随之增加。本文首次运用胞质分裂阻滞法（ＣＢ法）对不同年龄女性体细胞进行荧光原位杂交，对其２１号染色体的分离情况进行分析。结果表明，随年龄的增加，女性体细胞中２１号染色体不分离也随之增加，但２１号染色体丢失无年龄效应，且２１号染色体不分离频率远高于其丢失。该结果表明。
- 张坚宣史庆华潘淑娟潘淑娟单祥年张锡然
- 关键词：细胞松弛素B染色体分离年龄女性
- 类溶菌酶2等五个新基因的克隆和功能研究
- 该研究以若干已知具有重要功能的基因的cDNA为信息探针,采用'同源筛选'的策略进行基因克隆,分离和鉴定了5个分别与代谢、免疫、转录调控、蛋白修饰及细胞生长等功能相关的新基因.它们分别是小鼠磷酸甘油酸变位酶脑型(Pgam1...
- 张坚宣
- 关键词：基因克隆肌型
- 文献传递
