徐岚
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 胰高血糖素样多肽-1诱导吉非替尼筛选富集的胰腺癌干细胞分化
- 2014年
- 目的 :通过化疗药物筛选富集胰腺癌干细胞,观察胰高血糖素样多肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)诱导胰腺癌干细胞的分化。方法 :应用0.05 mmol/L吉非替尼连续培养胰腺癌Panc-1细胞2周,筛选出吉非替尼耐药的S-Panc-1(selected Panc-1)细胞,并用10 nmol/L GLP-1处理72 h(命名为G-S-Panc-1细胞)。分别应用FCM法检测Panc-1、S-Panc-1和G-S-Panc-1细胞中CD133+细胞所占的比例,软琼脂克隆形成实验检测Panc-1和S-Panc-1细胞的克隆形成能力,裸鼠移植瘤实验检测S-Panc-1和G-S-Panc-1细胞的体内成瘤能力。结果 :S-Panc-1细胞中CD133+细胞所占比例[(55.5±1.7)%]明显高于Panc-1细胞[(1.7±0.2)%](P<0.01),G-S-Panc-1细胞中CD133+细胞所占比例明显下降(P<0.01),S-Panc-1细胞的体外克隆形成率[(1.20±0.16)%]明显高于Panc-1细胞[(0.31±0.02)%](P<0.01),G-S-Panc-1细胞裸鼠体内的成瘤能力明显低于S-Panc-1细胞(P<0.01)。结论 :吉非替尼耐药的Panc-1细胞具有肿瘤干细胞特征,GLP-1对胰腺癌干细胞可能具有诱导分化的作用。
- 丁雯李金龙徐岚惠宏襄
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤干细胞细胞分化吉非替尼GLP-1
- 基于AlphaLISA技术检测胰岛素样生长因子1受体与其相关通路蛋白相互作用方法的建立
- 目的： 人类探索生命奥秘的脚步一直都没有停止，自胡克发现细胞后，人们开始从微观方向开始研究生命，而DNA的发现是探索生命的里程碑，有人预测，如果将人类的基因组全部测出，我们就能了解生命，解释生命。人类基因组计划(hum...
- 徐岚
- 人C-Src蛋白酪氨酸激酶真核表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2016年
- 旨在构建人C-Src蛋白酪氨酸激酶(Csk)基因真核表达系统。从He La细胞中提取总的RNA,通过RT-PCR获得Csk基因全长c DNA序列,并将其克隆至真核表达载体p ENTER中,构建重组质粒p ENTER-Csk-his。重组质粒转染293T细胞48h后通过SDS-PAGE、Western blot检测Csk蛋白表达情况,间接免疫荧光进行蛋白定位,通过镍螯合的磁珠法纯化Csk蛋白,hispulldown及CO-IP检测表达蛋白的活性。结果显示,经双酶切及测序鉴定,真核表达载体p ENTER-Csk-his正确没有突变,SDSPAGE及Western blot均可检测到大小约为51 k D的目的蛋白,说明Csk蛋白在293T细胞中表达成功,间接免疫荧光定位重组Csk蛋白在细胞质中表达,通过磁珠纯化得到Csk蛋白,最后通过his-pulldown及CO-IP发现Csk能够与IGF1R、SHC1相互作用,说明表达的Csk蛋白具有生物学活性。成功获得Csk基因全长序列,并构建重组p ENTER-Csk-his真核表达质粒,在真核细胞293T的细胞质中获得高效表达且表达的蛋白具有生物学活性。
- 徐岚肖斌陈慧芹李晓荣郝文波
- 关键词：293T细胞真核表达纯化
- 人GRB2基因真核表达及其在293T细胞中的定位研究被引量：2
- 2016年
- [目的]构建人GRB2蛋白真核表达质粒p Enter-GRB2,并观察其在293T细胞中的定位。[方法]从Hela细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得GRB2全长c DNA序列,并将其克隆到真核表达载体p Enter中,构建重组质粒p Enter-GRB2。转染293T细胞24 h、36 h和48 h后通过Western Blot检测其表达情况,通过免疫荧光观察其在细胞中的定位情况。[结果]经双酶切及测序鉴定,GRB2开放阅读框正确地构建到了真核表达质粒p Enter中,免疫印迹检测可见大小约为25 k Da的特异性条带,免疫荧光实验表明GRB2蛋白在细胞质和细胞核中均存在。[结论]成功构建了真核表达质粒p Enter-GRB2并在293T细胞中表达,证实GRB2在293T细胞中不仅存在于细胞质中,也存在于细胞核中,为更加深入地研究其生物学功能及机制奠定了理论基础。
- 熊玉锋郝文波张佳凤陈达香徐岚李明
- 关键词：GRB2真核表达
- 人酪氨酸蛋白激酶Lyn的真核表达、纯化及鉴定被引量：1
- 2016年
- [目的]构建含人酪氨酸蛋白激酶Lyn基因的载体并进行真核表达、纯化和研究其对细胞增殖的影响。[方法]提取人Hela细胞总RNA,用RT-PCR方法获得Lyn基因并克隆至pcDNA3.1(-)载体。经双酶切、PCR和测序方法鉴定后,将重组质粒瞬时转染HEK 293T细胞表达目的蛋白,应用组氨酸标签镍离子螯合磁珠纯化融合蛋白,通过Western Blot检测蛋白的表达及纯化,并用CCK-8法检测过表达Lyn后细胞增殖能力的变化。[结果]成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Lyn并进行瞬时表达和蛋白纯化,CCK-8法检测过表达Lyn的HEK 293T细胞的增殖能力显著性下降(P<0.01)。[结论]Lyn在HEK 293T细胞中成功瞬时表达及纯化,并可以使细胞的增殖能力受到明显抑制,为稳定表达和深入研究其生物学功能及作用机制奠定基础。
- 张佳凤郝文波熊玉锋徐岚庄斯慧罗树红
- 关键词：真核表达蛋白纯化细胞增殖
