惠培
- 作品数：8 被引量：19H指数：4
- 供职机构：耶鲁大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 鼠p53 172位点不同结构的minigene四环素负调控表达模式对肺癌细胞体外生长的影响被引量：5
- 2000年
- 目的 利用四环素负调控表达载体诱导表达鼠野生型p5 3、假野生突变型p5 3和突变型p5 3(172位点氨基酸分别是精氨酸、亮氨酸和组氨酸 ) ,比较一个位点不同DNA结构的p5 3minigene对细胞生长的影响。方法 通过基因重组构建四环素负调控表达的小鼠上述 3种p5 3minigene真核表达载体 ,由LipofectAMINE介导转染p5 3突变的PG细胞 ,嘌呤霉素筛选得到稳定克隆 ,利用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术、蛋白质免疫印迹等方法比较 3种p5 3对细胞体外生长的影响。结果 野生型和假野生突变型p5 3可以导致细胞生长变慢、细胞周期阻滞、p2 1表达增高 ,突变型则无以上效应。结论 野生型和假野生突变型p5 3具有抑制细胞生长引起周期阻滞的功能 ,突变型p5 3则丧失了野生型p5 3的抑瘤功能 ;p5 3基因的某些突变 (如鼠 172位点精氨酸→亮氨酸 )
- 马怡红吴秉铨谢建武由江峰柳剑英崔湘霖王洁良惠培
- 关键词：肺肿瘤四环素负调控
- 三种鼠不同结构p53minigene瞬时转染H1299细胞对其生长的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 比较一个位点不同碱基的鼠p5 3minigene对细胞生长的影响。方法 三种小鼠p5 3mini gene[野生型 (Arg)、假野生突变型 (Leu)和突变型 (His) ]真核表达载体 ,由LipofectAMINE介导转染p5 3缺失的H12 99细胞 ,在转染后不同时间点收集细胞 ,利用细胞计数、流式细胞术、蛋白免疫印迹等方法比较三种p5 3对细胞体外生长的影响。结果 在转染后不同时间点 ,野生型和假野生突变型p5 3均能诱导细胞凋亡和周期阻滞 ,并可转录激活Bax、p2 1WAF1和Mdm 2 ,突变型则无以上效应。结论 野生型和假野生突变型p5 3具有诱导肺癌细胞凋亡和引起周期阻滞的功能 ,这种作用可能是通过转录激活Bax和p2 1WAF1而实现 ,Mdm 2与野生型和假野生型p5 3可以反馈调节。 172Leu和 172His两种突变表现出截然不同的生物学效应 ,支持p5 3基因存在保留野生型抑瘤功能突变方式的观点。
- 马怡红吴秉铨柳剑英由江峰崔湘霖王洁良惠培
- 关键词：肺肿瘤P53基因细胞生长
- 3,4-苯并芘诱导肺高转移癌染色体研究被引量：1
- 1997年
- ３，４－苯并芘诱导肺高转移癌染色体研究王家锦穆莹惠培宋桂宁徐玉娟由江峰魏星赵亚妹王妍一、材料和方法１．材料：采用北京医科大学病理学系以３，４－苯并芘人工诱导致癌而建立的未分化肺高转移癌细胞系［１］。２．染色体制备：将冻存的癌细胞复温培养２４小时，其收...
- 王家锦穆莹惠培宋桂宁徐玉娟由江峰魏星赵亚妹王妍
- 关键词：肺肿瘤转移瘤染色体
- 促髓细胞分化的锌指基因单向PCR扩增直接测序的研究
- 1994年
- 锌指基因是一种造血调节基因，编码锌指结构蛋白，主要在髓细胞中表达，促进髓细胞分化，在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中，促使病情缓解。本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中，探索并建立了单向聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增特定单链ＤＮＡ，直接测序的新方法。它能产生质和量均佳的单链ＤＮＡ，无需纯化即可直接用于测序，使复杂的测序研究简便易行，可在２，３天内完成。这种单向ＰＣＲ扩增特定单链ＤＮＡ直接测序的方法，经对锌指基因的ｃＤＮＡ测序，得到验证。此法不仅适用于疾病研究中的ＤＮＡ测序，还可制各单链ＤＮＡ探针，更利于基因结构组成的研究。
- 穆莹惠培
- 关键词：髓细胞锌指基因直接测序聚合酶链反应
- 特异点突变型p53 minigene对人肺癌PG细胞的转染效应被引量：5
- 1999年
- 目的观察一种编码密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ的特异点突变型小鼠ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ对恶性肿瘤细胞的转染效应，并探讨该基因在恶性肿瘤基因治疗中的潜在价值。方法应用ＬｉｐｏｆｅｃｔａＭＩＮＥ和电穿孔法，把该特异点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ的表达载体与表达载体ＰＣＭＶｎｅｏ共转染ｐ５３错义突变的人肺癌ＰＧ细胞系，并以野生型和相应的密码子１７２Ａｒｇ→Ｈｉｓ点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ以及空载体转染为对照。应用小鼠特异性ｐ５３基因反转录聚合酶链反应和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法，检测外源性ｐ５３基因的ｍＲＮＡ转录。观察转基因后Ｇ４１８抗性克隆的克隆形成、细胞生长状态以及对抗癌药的敏感性改变，并应用脱氧核苷酰转移酶原位标记法分析该基因转染对细胞凋亡的影响。结果密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ点突变型小鼠ｐ５３基因组ｍｉｎｉｇｅｎｅ转染后能较强抑制ＰＧ细胞Ｇ４１８抗性克隆的形成，细胞难以传代；基因瞬时表达后能导致细胞凋亡，提高ＰＧ细胞对抗癌药的敏感性，具有较野生型ｐ５３基因更强的抑瘤能力。结论密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ特异点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ对肿瘤基因治疗有重要的潜在应用价值。
- 谢建武方伟岗惠培李宝林李宝林钟镐镐李红梅陈碧芬钟镐镐
- 关键词：转染PG细胞P53基因
- 人类肿瘤异种移植和癌生物学研究被引量：4
- 1989年
- 人类肿瘤异种移植已有近百年的历史,近二十年来,由于遗传突变的先天性免疫缺陷动物的发现,才有了迅猛的发展。1969年,Rygaard首次报道人体肿瘤移植于裸鼠获得成功,70年代初Giovanella等也相继将体外培养的人癌细胞系成功地移植于裸鼠,这些移植的人类肿瘤生长良好并可长期传代。
- 吴秉铨郑杰方伟岗王洁良惠培
- 关键词：肿瘤癌生物学
- 妊娠滋养细胞疾病遗传学基础和精准诊断
- 惠培
- 一种特异点突变型p53 minigene四环素负调控表达模式的抑瘤效应被引量：4
- 1998年
- 目的建立四环素负调控的真核表达调控模式，进一步证实一种特异点突变型小鼠ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ（密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ）的强抑瘤效应。方法在观察基因转染瞬时表达凋亡效应和抗性克隆的形成能力的基础上，进一步应用基因重组方法，构建四环素负调控型的特异点突变型小鼠ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ的真核表达载体，通过ＬｉｐｏｆｅｃｔａＭＩＮＥ基因转染法，导入ｐ５３杂合性缺失的人肺癌细胞ＰＧ，Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ筛选基因转染的稳定克隆，动态观察四环素调控表达及其对体外培养的人肺癌细胞ＰＧ的调控抑瘤效应。结果特异点突变型小鼠ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ具有很强的体外抑瘤效应，瞬时表达能导致ＰＧ细胞凋亡，强于野生型（Ｐ＜０．０５），并能抑制Ｇ４１８抗性克隆的形成；成功地建立了四环素负调控的特异点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ真核表达调控转基因细胞模型，去除四环素和传代能导致细胞凋亡效应。结论特异点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ具有恶性肿瘤基因治疗的应用价值，四环素负调控启动子元件能对基因进行真核表达调控，对基因治疗研究具有重要意义。
- 谢建武吴秉铨方伟岗李宝林李红梅郑杰惠培
- 关键词：P53基因
