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方晓波
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7
被引量:9
H指数:2
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江苏省人民医院
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骆丹
江苏省人民医院
周炳荣
江苏省人民医院
胡燕燕
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尹慧彬
江苏省人民医院
郭泽
江苏省人民医院
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自噬促进剂西罗莫司对中波紫外线诱导成纤维细胞提早衰老的影响
被引量:4
2013年
目的研究自噬促进剂西罗莫司对反复亚毒性中波紫外线诱导提早衰老(UVB—SIPS)的影响。方法人皮肤成纤维细胞分为6组,对照组、10mg/L西罗莫司组、UVB组、UVB+0.1mg/L西罗莫司组、UVB+1.0mg/L西罗莫司组、UVB+10.0mg/L西罗莫司组。UVB照射剂量10mJ/cm2每日1次共5次,对照组用含1%小牛血清的DMEM培养基培养5d;西罗莫司组在每次换液后加入西罗莫司;西罗莫司+UVB组在每次照射UVB后加入西罗莫司过夜。CCK-8检测细胞活性,β半乳糖苷酶化学染色法检测衰老细胞,吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹检测衰老相关分子信号p53及自噬相关蛋白LC3-B及beclin1的表达水平。数据用SPSS16.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析,结合t检验和LSD法。结果UVB+0.1、1.0、10mg/L西罗莫司组的细胞活性(A450值)分别为0.2±0.02、0.36±0.04、0.39±0.04,呈浓度依赖性升高,与UVB组(0.26±0.01)比较,差异均有统计学意义(均P〈0.05);3个组B半乳糖苷酶染色阳性细胞分别为92.50%±0.34%、42.40%±0.53%、6.20%±0.39%,与UVB组(95.10%±0.32%)比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);3组吖啶橙染色荧光定量分别为36.43±0.24、45.25±0.33、48.69±0.37,与UVB组(33.99±0.32)比较,差异均有统计学意义(P〈0.05);3组p53、LC3-B及beclin1的表达与UVB组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论自噬促进剂西罗莫司在提高细胞自噬率的同时,可抑制UVB诱导的成纤维细胞提早衰老。
方晓波
周炳荣
骆丹
郭泽
尹慧彬
胡燕燕
关键词:
成纤维细胞
细胞衰老
紫外线
西罗莫司
自噬
黄芩苷抑制长波紫外线诱导的人成纤维细胞氧化损伤和凋亡
被引量:1
2013年
目的探讨黄芩苷对长波紫外线(UVA)诱导的人二倍体成纤维细胞(HDF)氧化损伤和凋亡的抑制作用及其可能机制。方法CCK-8法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度。将成纤维细胞分成对照组、UVA照射组、UVA+6.25mg/L黄芩苷组、UVA+12.5mg/L黄芩苷组、UVA+25m∥L黄芩苷组。利用荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞中活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞凋亡率的变化。Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase3含量。以上多组间比较均采用单因素方差分析。结果UVA照射组的活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量分别为813.1±30.29、353.3±19.13、107.1±11.44,较对照组(442.5±29.45、223.4±10.67、42.17±2.59)明显上升,均P〈0.05);同时,UVA照射组较对照组线粒体去极化增强,凋亡率上升。与UVA组比较,各浓度黄芩苷作用组氧化产物包括活性氧、超氧化物阴离子及一氧化氮含量均有明显下降,线粒体去极化减弱,细胞凋亡率也显著下降,均P〈0.01。UVA组凋亡相关蛋白caspase3相对含量为1.2680±0.0091,明显高于对照组(0.3675±0.1115),6.25、12.5和25mg/L黄芩苷组(0.5588±0.1705、0.5365±0.1718、0.5454±0.2083)较UVA组有显著下调(均P〈0.01)。结论黄芩苷可以减轻UVA诱导的人成纤维细胞氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与清除活性基团、抑制线粒体膜去极化、阻止下游凋亡蛋白caspase3的激活和表达有关。
尹慧彬
周炳荣
骆丹
吴维
方晓波
张倩
郭泽
张家安
胡燕燕
关键词:
紫外线
成纤维细胞
黄芩甙
氧化性应激
外用卡泊三醇致接触性皮炎1例
2013年
临床资料 患者女,50岁。因面部、四肢红斑瘙痒2天就诊。患者1周前因银屑病来我院门诊就诊,给予卡泊三醇(商品名达力士软膏)外用。面部及四肢外用卡泊三醇每天2~3次,5天后接触部位出现灼热疼痛.面部鲜红色斑片、水肿伴明显瘙痒。
方晓波
朱文元
骆丹
关键词:
卡泊三醇
接触性皮炎
外用
门诊就诊
面部
银屑病
西罗莫司对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响
被引量:2
2013年
目的研究西罗莫司对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法取健康青少年男子环切术后包皮进行人皮肤成纤维细胞的分离培养,西罗莫司浓度分别为0、0.1、1.0、10.0 mg/L处理24 h,并设立空白对照。吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹检测自噬相关蛋白LC3-B及beclin1的表达水平。数据采用SPSS16.0软件分析,多组间均数行单因素方差分析进行比较。结果 0、0.1、1.0、10.0 mg/L西罗莫司组吖啶橙染色荧光定量呈浓度依赖性升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);LC3-B及beclin 1的表达水平明显升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。结论西罗莫司可以提高人皮肤成纤维细胞的自噬水平。
方晓波
周炳荣
胡燕燕
张婷
张倩
骆丹
关键词:
成纤维细胞
西罗莫司
自噬
BECLIN
芒果苷抑制中波紫外线诱导人成纤维细胞提前衰老的相关研究
被引量:1
2014年
目的研究芒果苷是否对反复亚毒性剂量中波紫外线(UVB)诱导的人二倍体成纤维细胞的早衰起抑制作用及其可能的机制。方法实验分成空白对照组(不做处理),UVB-应激诱导的提前衰老(sIPS)组(单纯照光),芒果苷4.0mg/L组(单纯加药),UVB+芒果苷1.0mg/L组、UVB+芒果苷2.0mg/L组、UVB+芒果苷4.0mg/L组(UVB照射联合药物处理)。成纤维细胞经5次UVB10mJ/cm2照射后,用细胞计数法(CCK8法)检测细胞增殖活性,B半乳糖苷酶染色(SA—β—Gal)计算衰老细胞百分比,流式细胞仪测定细胞周期,蛋白印迹检测衰老相关蛋白p53、p21、p16含量,实时荧光定量PCR(RT—PCR)检测基质金属蛋白酶1(MMP1)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、I型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和衰老相关基因p53、p21、p16mRNA表达。采用单因素方差分析进行数据统计分析。结果UVB+芒果苷1.0mg/L组、UVB+芒果苷2.0mg/L组、UVB+芒果苷4.0mg/L组以及UVB—SIPS组细胞增殖活性(A450)依次为0.3229±0.0113、0.3361±0.0163、0.3426±0.0144、0.2882±0.0207(F=110.08,P〈0.05),B半乳糖苷酶染色阳性率依次为(88.83±4.54)%、(46.33±5.51)%、(32.17±6.05)%、(93.67±3.75)%(F=283.54,P〈0.05;与UVB—SIPS组比较,除UVB+芒果苷1.0mg/L组外,其他两组均P〈0.05);G1期细胞阻滞率依次为(72.19±3.42)%、(60.99±2.70)%、(49.80±2.10)%、(82.09±0.89)%(F=156.01,P〈0.05)。与UVB—SIPS组相比,UVB+各浓度芒果苷组细胞MMP1和MMP3mRNA表达降低(F=69.41、106.41。均P〈0.05),I型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达增加(F=66.41、46.81,除UVB+芒果苷1.0mg/L组P〉0.05外,其他各组均P〈0.05),衰老相关基因p53、p21、p16mRNA表达降低(F=265.60、151.82、329.85,均P〈0.05),衰
胡燕燕
赵宏伟
周炳荣
方晓波
骆丹
吴志韵
尹慧彬
吴维
张家安
关键词:
紫外线
成纤维细胞
芒果苷
细胞衰老
棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响
被引量:1
2013年
目的探讨棕榈酸对HaCaT细胞增殖及产生炎症因子的影响。方法将不同浓度棕榈酸(0、25、50、75、100、125、150、175、200μmol/L)刺激HaCaT细胞3~24h,用细胞计数试剂盒CCK8检测HaCaT细胞增殖情况。选取一定浓度棕榈酸(0、75、100、125、150μmol/L)刺激HaCaT细胞24h后,分别用免疫组化荧光染色法在共聚焦显微镜下观察核因子(NF)-κBp65细胞核转位情况。酶联免疫吸附试验检测细胞培养上清液中自介素6(IL-6)分泌量,实时PCR法检测过氧化物酶增殖体激活受体(PPARa)mRNA及IL-6mRNA的表达,免疫印迹法检测PPARa、总蛋白NF—κBp65及核蛋白NF—κBp65表达量。用GraphPadPrism5,0软件进行单因素方差分析。结果与空白对照组相比,50~175μmoVL棕榈酸均可刺激HaCaT细胞增殖(均P〈0.05)。75、100、125、150μmol/L棕榈酸可剂量依赖性增强HaCaT细胞NF—κBp65向细胞核内转位,各浓度组核蛋白的相对表达量分别为0.4536±0.0173、0.5184±0.0206、0.5333±0.0231、0.6160±0.0297,与空白对照组相比,差异有统计学意义(均P〈0.01)。PPARamRNA及其蛋白产物、IL~6mRNA及分泌量呈剂量依赖性增加,各浓度组IL-6分泌量分别为(31.5677±0.2268)、(32.3773±0.4156)、(32.9837±0.0029)、(33.6890±0.0936)ng/L,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P〈0.05或0.()1)。结论棕榈酸可促进HaCaT细胞增殖,并在一定浓度内剂量依赖性增强NF—κB核转移、IL-6及PPARa表达量,在激活和促进相关炎症因子表达中起到一定作用。
张倩
周炳荣
骆丹
方晓波
尹慧彬
郭泽
吴唯
关键词:
棕榈酸
角蛋白细胞
细胞增殖
雷帕霉素通过诱导自噬减轻中波紫外线诱导人成纤维细胞光老化的机制研究
目的探讨雷帕霉素是否能减轻由中波紫外线(UVB)诱导的人二倍体成纤维细胞细胞(HDFs)光老化作用以及其可能的机制。方法分离健康成年男子包皮培养人原代成纤维细胞,取三至十代细胞进行实验。将细胞分成空白组、UVB照射组以及...
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