曹芳芳
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：中国疾病预防控制中心青年科研基金国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种检测空肠弯曲菌抗体的特异抗原及其应用
- 本发明提供了一种用于检测空肠弯曲菌的特异抗原，为空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶AhpC(Alkyl Hydroperoxide Reductase，AhpC)重组蛋白抗原，该抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编...
- 张茂俊张建中孟凡亮曹芳芳
- 文献传递
- 空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析
- 2013年
- 目的构建空肠弯曲菌cj0069基因原核表达系统,克隆表达cj0069蛋白,根据cj0069的氨基酸序列进行抗原性结构预测分析,并验证其抗原性特征。方法利用在线软件对cj0069蛋白进行抗原性结构预测分析;用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的基因组DNA中扩增cj0069基因,连接入pMD18-T载体,将重组质粒pMD18-T/cj0069和表达载体pGEX-4T-1双酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切产物后连接,连接产物转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),对重组质粒pGEX-4T-1/cj0069进行测序及酶切鉴定,IPTG诱导其表达,表达产物进行SDS-PAGE分析及飞行质谱鉴定;利用空肠弯曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反应性。结果 PCR扩增、DNA测序及酶切鉴定证实重组质粒pGEX-4T-1/cj0069构建成功,重组表达蛋白rGST-cj0069经飞行质谱鉴定为保守空肠弯曲菌蛋白。结构预测获得cj0069蛋白的抗原性肽段及线性表位等抗原性结构特征。Western blot检测显示该蛋白不能被空肠弯曲菌免疫兔血清识别。结论成功构建cj0069基因重组表达载体pGEX-4T-1/cj0069,并在大肠埃希菌中高效表达,获得的空肠弯曲菌cj0069蛋白具有抗原性结构特征,但针对免疫血清不具有抗原反应性。
- 刘红莹曹芳芳宫亚楠肖迪张茂俊
- 关键词：空肠弯曲菌克隆抗原性
- 一种检测空肠弯曲菌抗体的特异抗原及其应用
- 本发明提供了一种用于检测空肠弯曲菌的特异抗原，为空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶AhpC(Alkyl Hydroperoxide Reductase，AhpC)重组蛋白抗原，该抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编...
- 张茂俊张建中孟凡亮曹芳芳
- 空肠弯曲菌外膜蛋白rOMP18的克隆表达及抗原性分析被引量：2
- 2011年
- 目的构建空肠弯曲菌omp18基因的重组表达质粒、克隆表达rOMP18重组蛋白、对表达产物进行鉴定并评价其抗原性。方法 PCR扩增空肠弯曲菌的omp18基因片段,将其连接到表达载体pET32a(+)中并转化至大肠杆菌(E.co-liBL21(DE3)),诱导表达后SDS-PAGE分析其表达产物并纯化目的蛋白。应用空肠弯曲菌感染免疫血清,利用Western-blot方法分析其抗原性。结果与结论单、双酶鉴定结果显示已成功构建rOMP18的重组表达载体pET32a-omp18,IPTG诱导表达产物的相对分子质量与理论相符34kD(HIS16kD)。Western-blot检测结果表明重组蛋白rOMP18具有抗原性,为空肠弯曲菌感染的特异抗体的检测提供候选抗原。
- 乔博孟凡亮顾一心何利华张姝肖迪刘国栋曹芳芳张建中张茂俊
- 关键词：空肠弯曲菌克隆抗原性
- 空肠弯曲菌AhpC蛋白的克隆表达及抗原性分析被引量：1
- 2011年
- 目的构建空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶(ahpC)基因的原核表达系统,克隆表达AhpC蛋白,用Western blot以及ELISA方法检测表达蛋白的抗原性,为筛选空肠弯曲菌感染后特异性抗体检测试剂的制备奠定基础。方法用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的染色体DNA中扩增出ahpC基因,将目的基因插入表达载体pGEX-4T-1后转化入大肠杆菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导重组质粒pGEX-ahpC的表达。SDS-PAGE分析表达产物,采用GST标签亲和层析柱纯化表达蛋白。应用兔免疫血清、临床感染者血清以及健康无感染者血清,利用Western blot以及ELISA的方法分析AhpC蛋白的抗原性并初步评价其在ELISA检测方法中的应用。结果 PCR扩增及双酶切鉴定证实重组质粒构建成功。重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为空肠弯曲菌AhpC蛋白,Western blot及ELISA检测结果显示AhpC具有特异抗原性。结论成功构建了ahpC重组表达载体pGEX-4T-1/ahpC,并在大肠杆菌中高效表达。空肠弯曲菌AhpC蛋白具有抗原性,可以作为空肠弯曲菌感染后血清抗体检测的特异抗原。
- 曹芳芳孟凡亮乔博张茂俊张建中
- 关键词：空肠弯曲菌克隆表达AHPC抗原性
