朱小飞
- 作品数：8 被引量：28H指数：4
- 供职机构：新乡医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划河南省教育科学“十一五”规划课题更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 以人表皮生长因子受体2为靶点的强化融合蛋白LDP-Hr-AE的构建及抗肿瘤活性研究被引量：5
- 2012年
- 目的制备一种以人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)为靶点的由抗体重链超变区多肽与力达霉素组成的强化融合蛋白LDP-Hr-AE,并初步探讨其抗肿瘤活性。方法通过聚合酶链式反应扩增出抗人表皮生长因子受体2抗体C6.5重链CDR3区的20个氨基酸残基基因,将其与力达霉素辅基蛋白基因连接构建出融合蛋白基因ldp-Hr,转化至大肠杆菌中进行诱导表达。融合蛋白LDP-Hr采用HisTrap Ni2+亲和色谱柱进行分离纯化,高效液相色谱法检测其纯度。细胞免疫荧光法和基于流式细胞术的亲和实验分析融合蛋白与肿瘤细胞的结合活性。纯化的LDP-Hr蛋白与力达霉素发色团在体外进行组装,构建出强化融合蛋白LDP-Hr-AE。采用MTT法检测强化融合蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性,Annex-in V-FITC/PI双染结合流式细胞术的方法检测LDP-Hr-AE蛋白对细胞凋亡的影响。结果成功构建并表达了融合蛋白LDP-Hr,目的蛋白以可溶形式分泌至大肠杆菌培养液和周质腔中,产量可达每升发酵液40 mg活性蛋白,纯化后的蛋白经高效液相色谱法检测纯度为97.4%。细胞免疫荧光实验和基于流式细胞术的亲和实验检测结果均显示LDP-Hr蛋白与HER2高表达的肿瘤细胞系(如SK-BR-3和SK-OV-3细胞)都有很强的结合活性。LDP-Hr蛋白与力达霉素发色团在体外组装后经高效液相色谱法检测350 nm处出现特定吸收峰,表明强化融合蛋白LDP-Hr-AE构建成功。采用MTT法检测了强化融合蛋白的体外杀伤活性,结果显示,LDP-Hr-AE对肿瘤细胞有强烈的杀伤作用,且其杀伤活性要高于力达霉素。细胞凋亡检测结果也表明LDP-Hr-AE在极低的浓度下(如0.1 nmol.L-1)即可强烈的诱导细胞发生凋亡,且凋亡的比率随着蛋白浓度的升高而增加。结论本实验制备的强化融合蛋白LDP-Hr-AE可以特异的与人表皮生长因子受体2结合,对肿瘤细胞具有强烈的杀伤活性和诱
- 郭晓芳朱小飞钟根深甄永苏
- 关键词：人表皮生长因子受体2融合蛋白力达霉素抗肿瘤
- IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响被引量：5
- 2010年
- 目的:研究IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响,为进一步研究IL-16功能奠定基础。方法:IL-16腺病毒载体转染MT2细胞后,不同时间收获细胞,通过MTT、流式细胞术(FCM)、测定线粒体膜电位和单细胞凝胶电泳等方法,证实MT2细胞增殖抑制和凋亡。结果:用MTT法绘制生长曲线,观察到IL-16腺病毒载体转染的MT2细胞增殖受到明显抑制;DNA片段分析在转染6h后出现凋亡片段;进一步用FCM检测细胞周期停滞于G1期,并且出现细胞凋亡;单细胞凝胶电泳发现细胞12h后有明显凋亡DNA拖尾形成;IL-16对细胞线粒体膜电位的影响24h内逐渐增强,预示细胞凋亡;免疫荧光发现12h自噬相关蛋白LC3,即可在细胞膜上表达,自噬已经开始出现。结论:重组人IL-16腺病毒载体转染MT2细胞,24h内即可诱导MT2细胞发生细胞增殖抑制并且出现凋亡,为进一步研究IL-16的功能奠定了基础。
- 高志涛朱小飞朱茉莉王辉
- 关键词：IL-16重组腺病毒凋亡
- 后现代主义文化对检验医学教育教学的影响被引量：1
- 2011年
- 后现代主义作为一种文化思潮,首先形成于建筑和文化领域,自上世纪产生起就逐步向各学科门类渗透。80年代传入我国后,在诸多领域均形成了自己的体系。后现代主义教育观作为一种先进的教学理念也在冲击着传统检验医学的教学,为检验医学教学改革提供了新的视野。结合后现代主义的概念和现状,本文对检验医学教学中的师资队伍、教学手段和教学理念等现状进行综合分析,重点阐述后现代主义文化对检验医学教育教学中以上几个方面的影响。
- 孙瑞利张轶王明永马淑君朱小飞牛新清郭庆合王辉
- 关键词：后现代主义教育观
- 抗人肝癌血管内皮功能性单抗的筛选与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的：筛选、鉴定抗人肝癌血管内皮功能性单抗，为治疗肝癌提供靶向治疗剂，并为分离获得肝癌相关的分子靶标打下基础。方法：采用活细胞荧光、MTT细胞增殖实验、成管实验和动物体内治疗实验，筛选鉴定抑制肝癌内皮细胞的功能性单抗。结果：从能与肝癌内皮细胞膜反应的119株克隆中，筛选出16株单抗显著地抑制肝癌内皮增殖其抑制率达21％～46％，46株能显著抑制肝癌内皮细胞的成管，3株单抗1F9、1285和1811能显著抑制肝癌移植瘤的生长抑制率分别为50．8％、48．7％和47．0％。选择1株体内抑瘤效果最好的1811单抗，通过抗体抗原亲和层析法进行纯化，并对纯化的单抗的相关抗原蛋白进行免疫组织化学实验鉴定，结果显示1811抗原在肝癌血管组织较高的表达而在正常肝血管组织极少表达。蛋白质印迹法显示其抗原相对分子质量约46×10^3。结论：采用大容量功能性抗体库技术成功获得了多株具有抑制肝癌内皮恶性生物学行为的功能性单抗，体内外抑制肺癌的生长，具有成为肺癌靶向治疗剂的潜力。其中1株可能是一个靶向治疗肝癌的新靶位。
- 孙力超朱小飞遇珑孙立新杨治华冉宇靓
- 关键词：肝肿瘤内皮细胞抗体单克隆
- Sirtuin 1对免疫细胞调节效应及机制研究进展被引量：4
- 2017年
- 免疫细胞(巨噬细胞、树突状细胞、淋巴细胞等)是免疫应答的重要参与者,是机体免疫系统免疫防御、免疫监视及免疫自稳体现的重要实施者。当机体对免疫细胞功能的正常调节出现失常,往往易导致各种疾病(自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤及心血管疾病等)的发生和发展。Sirtuin 1是具有烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖性的第3类组蛋白去乙酰化酶家族成员,是细胞寿命与代谢等生理活动中重要的转录调控因子,广泛参与癌症、神经退行性病变和代谢性疾病等老年性疾病的病理发展过程。近年来,Sirtuin 1在免疫细胞功能调控方面的研究逐渐获得关注,本文就此方面研究进展进行述评。
- 岳浩迪朱小飞
- 关键词：SIRTUIN去乙酰化树突状细胞T细胞免疫调节
- 力达霉素-胰岛素样生长因子1融合蛋白的构建及其抗非小细胞肺癌活性研究被引量：1
- 2016年
- 目的制备一种由胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力达霉素(lidamycin,LDM)构成的融合蛋白,并对其抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性进行检测。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并将其插入到p ET30a载体中,再将获得的重组表达载体p ET30-ldp-igf转化至大肠杆菌中进行诱导表达,得到融合蛋白LDP-IGF。采用细胞免疫荧光实验和基于流式细胞术的亲和实验检测LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞的结合能力;力达霉素的发色团(AE)与LDP-IGF蛋白在体外进行分子组装,获得强化融合蛋白LDP-IGF-AE。四甲基偶氮唑蓝法实验检测LDP-IGF-AE对不同非小细胞肺癌细胞的体外杀伤活性,PI染色结合流式细胞术检测LDP-IGF-AE对细胞周期的影响以及Annexin V-FITC/PI双染法检测LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用。结果经过诱导LDP-IGF蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达。采用Ni^(2+)亲和层析技术对包涵体蛋白进行分离纯化,经过变性和分步透析复性后获得了高纯度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。亲和实验结果显示,LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞具有高度的亲和力。与AE分子进行组装后获得的强化融合蛋白LDPIGF-AE对不同的非小细胞肺癌细胞系均有非常强烈的杀伤活性,且其杀伤活性显著高于力达霉素。细胞周期阻滞和细胞凋亡实验结果显示,极低浓度的LDP-IGF-AE处理可使非小细胞肺癌细胞阻滞于G_2/M期,并可显著地诱导细胞发生凋亡。结论融合蛋白LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞有强大的体外抗肿瘤活性,具有发展成为非小细胞肺癌靶向治疗剂的潜能。
- 郭晓芳朱小飞曹海英钟根深甄永苏
- 关键词：胰岛素样生长因子1力达霉素融合蛋白非小细胞肺癌
- Sirt1去乙酰化酶抑制剂诱导成人白血病细胞系MT2生长阻滞及凋亡
- 2012年
- 目的:研究Sirtuin1(Sirt1)去乙酰化酶抑制剂对成人T细胞白血病细胞系MT2增殖及存活的影响。方法:采用RT-PCR方法,比较了成人白血病细胞系MT2与其他两种白血病细胞系(Jurkat,MOLT-4)中Sirt1 mRNA表达水平;通过Sirt1抑制剂尼克酰胺(Nicotinamide)处理MT2细胞后,观察其细胞形态学的变化,并采用MTT、流式细胞术等方法检测Nico-tinamide对MT2细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:成人白血病细胞系MT2中Sirt1表达水平明显高于Jurkat细胞系(P<0.05),而与MOLT-4细胞系无明显差异;抑制Sirt1的去乙酰化酶活性能明显抑制MT2细胞的增殖,引起细胞G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡;镜下观察到细胞膜皱缩、卷曲及破裂等凋亡样形态改变。结论:抑制Sirt1去乙酰化酶活性可能是治疗成人T细胞白血病的可行途径之一。
- 朱小飞郭晓芳孙瑞利高志涛马淑君张婧婧王辉
- 关键词：成人T细胞白血病细胞凋亡
- 基于网络虚拟实验室在医学检验实验教学中的应用探讨被引量：10
- 2012年
- 在医学检验专业课程当中，各门科目的实验课都占据着该科目近50％的比例，可见医学检验是一门实践性和操作性极强的学科。目前，许多地方性院校检验课程的实验教学形式和手段比较单一，学生参加实验课的积极性不高，兴趣不大，而且随着各地方院校招生规模的扩大，实验课时紧张、实验设备不足、实验易耗品消耗加大等一些问题逐渐突显，导致实验教学效果不佳，学生的基本技能不熟练。
- 朱小飞郭晓芳孙瑞利马淑君郭庆合张婧婧王明永王辉
- 关键词：实验教学虚拟实验室网络专业课程教学形式招生规模
