李先茂
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LMP1与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒的制备被引量：2
- 2005年
- 目的:制备EB病毒LMP1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒.方法:采用RT-PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆到带绿色荧光蛋白慢病毒表达载体质粒FUGW中.经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体.在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-LMP1导入病毒包装细胞293FT,荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,PCR鉴定.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的LMP1 cDNA片段与Gen-Bank中的数据完全吻合;LMP1准确克隆入FUGW的多克隆位点.慢病毒的3种质粒可高效转染入293FT细胞,荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光.绿色荧光位于细胞的胞膜及胞质.结论:成功制备了LMP1与GFP融合基因慢病毒,为研究EBV瘤基因LMP1在多种疾病中的作用机制提供适合的稳定转染细胞的载体.
- 李先茂赵彤朱梅刚张三泉张进华
- 关键词：潜伏膜蛋白1聚合酶链反应慢病毒
- 颗粒酶B靶向性抗肿瘤血管生成的研究
- 目的:根据血管内皮生长因子受体(VEGFR)在肿瘤组织血管内皮表达的特异性及颗粒酶B(granzyme B,GraB)诱导细胞凋亡的作用,该课题采用基因工程技术,研制以血管内皮生长因子(VEGF)分子结构域肽段引导,Gr...
- 李先茂
- 关键词：基因克隆原核表达颗粒酶B血管生成逆转录病毒
- 文献传递
- 霍奇金淋巴瘤CD99基因表达缺失的意义被引量：15
- 2004年
- 目的 :探讨经典型霍奇金淋巴瘤 (cHL)R S细胞CD99蛋白表达情况 .方法 :将 8例cHL全部按WHO新分类标准进行确诊 ,采用免疫组织化学SABC法进行CD99染色 ,观察每一病例R S细胞阳性表达率 ;流式细胞仪检测B淋巴瘤DG75细胞株 ,T淋巴瘤Jurkat细胞株 ,霍奇金淋巴瘤L4 2 8,HDLM 2细胞株CD99蛋白表达情况 .结果 :8例cHL中R S细胞CD99阴性表达率为 10 0 % (8/8) ;DG75细胞株CD99表达阳性 (87.3± 0 .4 ) % ,Jurkat细胞株CD99表达阳性(96 .8± 0 .6 ) % ,L4 2 8细胞株CD99表达阳性 (3.8± 0 .4 ) % ,HDLM 2细胞株CD99表达 (6 6 .4± 0 .3) %阳性 .结论 :CD99基因在霍奇金淋巴瘤表达缺失可作为诊断cHL的参考依据 .
- 李先茂李燕赵彤朱梅刚张进华
- 关键词：霍奇金淋巴瘤免疫组织化学
- 偏头痛5-HT2A受体mRNA的表达与头痛新一号作用机制的研究
- 背景与目的偏头痛又被称为务小板疾病,其血小板的聚集性明显增高,而血小板活化 状态与5—HT(,2A)受体相关.血小板无细胞核结构,检测血小板中5—HT(,2A)受体的 表达,国内未见有关报道.目的在于比较5—HT(,2A...
- 李先茂
- 关键词：偏头痛逆转录聚合酶链反应血小板血瘀证
- 文献传递
- 粒-巨噬细胞集落刺激因子与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体构建被引量：1
- 2005年
- 目的:构建粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒载体。方法:采用RT-PCR方法获得GM-CSF全外显子片段,使之克隆到带GFP慢病毒表达载体质粒FUGW中,经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体。在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-GM-CSF导入病毒包装细胞293T,荧光显微镜检测基因的表达,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩,鉴定。用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测转染FUGW-GM-CSF细胞上清液GM-CSF表达水平,电子显微镜观察293T细胞中的慢病毒。结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的GM-CSF/PCR产物与GenBank中的数据完全吻合;GM-CSF准确克隆入FUGW的多克隆位点。慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞,荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光。转染FUGW-GM-CSF包装细胞上清液GM-CSF酶联反应阳性。电子显微镜下见慢病毒颗粒位于293T细胞胞浆的内质网中。结论:成功构建了GM-CSF与GFP融合基因慢病毒载体,为诱导DC提供了适合的稳定转染的载体。
- 李先茂沈丽佳朱梅刚李祖国赵彤
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子绿色荧光蛋白慢病毒属
- 小鼠A20RS样细胞模型的初步建立被引量：2
- 2005年
- 目的:研究EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)转染小鼠 B淋巴瘤细胞A20能否诱导出霍奇金淋巴瘤H/R S样细胞. 方法:采用RT PCR方法获得LMP1全外显子片段,使之克隆 到真核表达载体PLXSN中,限制性酶切、PCR扩增和测序鉴 定重组载体;运用脂质体介导转染技术,将LMP1的真核表达 重组质粒和空载体质粒导入A20细胞.结果:扩增的 LMP1cDNA长度为1.1kb,测序结果与已知序列吻合,重组真 核表达质粒经酶切鉴定表明获得正确重组子;经G418筛选获 得稳定整合了LMP1和空载体的亚克隆细胞,WesternBlot印迹 鉴定PLXSN LMP1组有LMP1蛋白的表达,出现了H/R S样细 胞形态改变.结论:建立了小鼠A20RS样细胞模型,为下一步 建立霍奇金淋巴瘤动物模型,研究其发病机制奠定了基础.
- 李先茂朱梅刚沈丽佳刘腾飞张三泉张进华张彦赵彤
- 关键词：霍奇金病
