李大琪
- 作品数：30 被引量：77H指数：6
- 供职机构：山西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 中华稻蝗羧酸酯酶家族基因生物信息学及组织表达特异性分析被引量：2
- 2015年
- [目的]对重要农业害虫中华稻蝗(Oxya chinensis)羧酸酯酶(carboxylesterases,Ces)家族基因进行生物信息学分析,并对部分基因的组织表达特性进行研究,为揭示中华稻蝗Ces基因功能及研发新的分子靶标提供依据。[方法]基于中华稻蝗转录组数据库,通过关键词搜索获得Ces基因序列,采用生物信息学方法进行比对拼接、氨基酸序列推导和开放阅读框分析,选择全长序列构建系统发育树,采用在线软件分析中华稻蝗Ces氨基酸序列结构、理化性质、信号肽和N糖基化位点等特征。采用实时定量PCR技术,通过ge Norm与Normfinder软件分析4个候选内参基因β-肌动蛋白(β-actin)、延长因子(EF1α)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和核糖体蛋白49(RP49)表达稳定性,筛选中华稻蝗5龄若虫不同组织部位最适内参基因并检测10个羧酸酯酶基因在不同组织部位相对表达量。[结果]从中华稻蝗转录组数据库搜索获得Ces基因c DNA片段180个,经筛选获得28个Ces基因全长序列进行生物信息学分析。推导的氨基酸序列与其他昆虫物种的聚类分析结果显示,中华稻蝗28个Ces分布于4个功能簇中,其中A簇直翅目和部分双翅目昆虫α酯酶(20个)、D簇表皮特异酯酶(2个)、E簇β酯酶(4个)和F簇非鳞翅目保幼激素酯酶(2个)。氨基酸序列分析结果显示,中华稻蝗大部分Ces的等电点(p I)均为偏酸性或弱酸性,p I为4.38—6.84,只有3个Ces的p I值偏碱性。中华稻蝗所有的Ces基因都具有N糖基化位点、N端保守的半胱氨酸残基及氧离子洞,信号肽预测结果表明19个Ces具有完整的信号肽;21个Ces具有典型的催化三联体S-E-H,其余7个Ces催化三联体发生了不同的替换。Ge Norm与Normfinder分析结果显示,4个候选内参基因稳定性EF1α=RP49>β-actin>GAPDH。选择EF1α作为内参基因,RT-q PCR结果显示10个羧酸酯酶基因在7个不同组织部位均有表达,其中OcCesA1、OcCesA6、OcCesA12、OcCesA1
- 刘娇张建珍李大琪张婷婷马恩波张建琴
- 关键词：中华稻蝗生物信息学组织特异表达
- 昆虫几丁质去乙酰基酶基因1及其在害虫防治中的应用
- 本发明提供一种昆虫几丁质去乙酰基酶基因1(CDA1)全长序列及其在农业害虫防治中的应用。具体为通过生物信息学方法，从飞蝗转录组中获取几丁质去乙酰基酶基因1片段，进一步调取获得序列为SEQ ID NO：1基因全长。依据SE...
- 张建珍于荣荣张敏李大琪马恩波
- 文献传递
- 昆虫几丁质酶基因及其dsRNA的应用
- 本发明提供几丁质酶基因序列及其dsRNA的应用，可沉默特定的几丁质酶基因使昆虫发育受阻死亡。通过对多个东亚飞蝗几丁质酶基因克隆、测序及表达分析，得到序列为SEQ IDNO：1的几丁质酶基因，从中选出序列为SEQ ID N...
- 张建珍李大琪张建琴马恩波郭亚平杨美玲
- 文献传递
- 一种高效致死昆虫的siRNA及其应用
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高效致死昆虫的siRNA及其应用。所述siRNA为RNA干扰核心序列，长度为21bp，正义链的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，反义链的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，所述昆虫为...
- 柴林张建琴李大琪史学凯高璐范云鹤
- 文献传递
- 一种昆虫几丁质合成酶1A基因片段及其dsRNA和应用
- 本发明提供一种昆虫几丁质合成酶1A dsRNA的应用，根据NCBI数据库中登录号为GU067730的东亚飞蝗几丁质合成酶1A基因序列获得序列为SEQ ID NO：1的几丁质合成酶基因1A片段，由该片段合成dsRNA。将上...
- 郭亚平张建珍刘晓健马恩波李大琪
- 文献传递
- 昆虫β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因及其应用
- 本发明提供一种昆虫β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因（NAG）的序列及其双链RNA（dsRNA）的应用方法，它可沉默特定的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因，使害虫死亡。对飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因进行克隆和测序后，得到...
- 李大琪容烁李涛张建珍马恩波
- 中华稻蝗几丁质酶基因10(OcCht10)的分子特性及功能被引量：9
- 2014年
- 【目的】获得中华稻蝗(Oxya chinensis)几丁质酶基因1 0(OcCht10)的cDNA序列,预测其功能域,并做聚类分析明确该基因的系统发育关系。绘制OcCht10在5龄若虫不同组织部位和发育时间的表达图谱,研究其在中华稻蝗蜕皮过程中的生物学功能,为害虫防治提供高效安全的候选基因。【方法】从中华稻蝗转录组数据库搜索OcCht10cDNA片段,经过blast分析、比对、拼接后,翻译为氨基酸序列,预测其功能域,并与其他昆虫几丁质酶家族基因进行聚类分析,进一步确认该基因的系统发育关系并进行准确命名;选取中华稻蝗5龄第6天不同组织部位及5龄若虫不同天数表皮样本,总RNA提取后反转录为cDNA模板,采用Real-time quantitative PCR(qPCR)方法获得OcCht10在5龄稻蝗若虫不同组织部位和不同发育阶段的表达谱;设计OcCht10 dsRNA引物,用试剂盒体外合成dsOcCht10,采用注射法进行RNA干扰;取注射24 h稻蝗表皮样本,用qPCR方法检测OcCht10基因沉默效率;并仔细观察dsRNA注射后稻蝗表型,统计其死亡率。【结果】经对中华稻蝗转录组数据库的搜索,获得OcCht10cDNA片段长度为9 318 bp,开放阅读框为8 61 3 bp,编码2 870个氨基酸;其3'非编码区为705 bp,推测OcCht105'端有500多碱基尚未获得;预测其氨基酸序列具有多个结构域,包含有5个几丁质酶催化域和6个几丁质结合域;与其他昆虫几丁质酶基因聚类分析结果显示OcCht10属于昆虫几丁质酶家族基因Ⅱ组,该组基因与昆虫蜕皮相关;5龄若虫组织特异性分析表明该基因主要在表皮、前肠和后肠等外胚层发育而成的组织器官中表达,提示OcCht10可能参与表皮几丁质代谢;发育时间表达图谱表明该基因在5龄第6—7天,即蜕皮前的表皮中高表达,表明OcCht10可能负责蜕皮时表皮几丁质降解;5龄若虫第2天注射该基因的dsRNA,24 h后取表皮检测其干扰效率,结果显示该基因被沉默7 0%;与注射dsGFP的对照组�
- 李大琪王燕张建琴李涛孙毅张建珍
- 关键词：中华稻蝗几丁质酶基因实时定量PCRRNA干扰
- 飞蝗几丁质合成酶2基因的表达特性、功能及调控被引量：17
- 2014年
- 【目的】几丁质合成酶(chitin synthase,CHS)是昆虫几丁质合成过程中的关键酶之一,由于高等动物不存在该酶,而被认为是设计安全高效杀虫剂的潜在靶标。论文在已克隆得到飞蝗几丁质合成酶2基因cDNA序列(LmCHS2,GenBank登录号:GU067731)的基础上,进一步深入探讨该基因在不同发育时期的表达特性、功能及调控,为基于RNA干扰技术的飞蝗有效控制提供科学依据。【方法】根据已知LmCHS2基因核苷酸序列,设计特异性表达引物,运用RT—qPCR技术研究该基因在卵、若虫及成虫期的表达特性;体外合成LmCHS2的dsRNA后,分别注射至成虫期第1天的雌虫和雄虫,收集第5天的中肠样本提取RNA,反转录成cDNA后,采用RT—qPCR方法检测LmCHS2沉默效果。解剖飞蝗整个肠道后,观察中肠的形态变化及围食膜的完整性,探讨该基因在成虫期的生物学功能;饥饿处理飞蝗不同时间后,再重新进食,观察试虫肠道的变化,进一步运用RT—qPCR技术检测LmCHS2的表达。【结果】LmCHS2在飞蝗卵发育的前期和中期几乎没有可检测到的表达,卵发育后期表达量急剧上升,在4龄、5龄若虫和成虫期稳定表达;分别对羽化后第1天的雌、雄成虫注射dsCHS2,与对照组相比,处理组试虫LmCHS2表达量均显著下降,且取食量明显减少,雌虫和雄虫死亡率分别达78%和85%;解剖消化道后发现,注射dsCHS2后飞蝗中肠几乎不含有食物,中肠和胃盲囊长度显著缩短;对中肠的组织学观察结果表明对照组飞蝗围食膜发育完整,而注射dsCHS2后围食膜被严重破坏甚至缺失;饥饿处理飞蝗48 h后,与对照组相比,饥饿组中肠几乎不合有食物,长度亦显著缩短。H&E染色结果表明,饥饿组围食膜被严重破坏,对照组围食膜结构完整,与RNAi的结果非常相似;重新进食后围食膜发育良好;饥饿处理24 h和48 h后LmCHS2的表达被显著抑制,重新进食0.5 h后,其表达量快速上调,表明进食影响LmCH
- 刘晓健崔淼李大琪张欢欢杨美玲张建珍
- 关键词：飞蝗RNA干扰
- 昆虫β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因及其应用
- 本发明提供一种昆虫β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因（NAG）的序列及其双链RNA（dsRNA）的应用方法，它可沉默特定的β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因，使害虫死亡。对飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因进行克隆和测序后，得到...
- 李大琪容烁李涛张建珍马恩波
- 文献传递
- 稻蝗属特异性SCAR分子标记的鉴定被引量：2
- 2010年
- 【目的】研究稻蝗属特异性DNA分子标记,为稻蝗属物种的分类鉴定提供快速有效的分子检测方法。【方法】基于稻蝗属物种及其近缘属种的大量RAPD-PCR结果,筛选出稻蝗属物种特异性的RAPD条带,对该特异RAPD条带进行克隆、测序。基于所测序列设计特异引物,以稻蝗属不同物种和蝗总科其它物种基因组DNA为模板进行PCR扩增。【结果】随机引物S823可在稻蝗属不同物种扩增出约650bp的RAPD条带,经对该条带的克隆、测序,发现在3个受试的稻蝗属物种中序列同源度达92.3%—96.6%,序列G+C含量大于15%,并富含大量的A、T重复区;基于已知序列设计的特异引物对稻蝗属7个物种可以扩增出目的条带(550bp),而对赤胫伪稻蝗及蝗总科其它物种均无扩增条带。【结论】鉴定了稻蝗属特异的RAPD条带,基于该条带序列设计的特异引物可用于稻蝗属物种的快速分子鉴定。
- 张建珍李大琪李涛马恩波郭亚平
- 关键词：稻蝗属RAPD-PCRSCAR分子标记
