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大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ的基因克隆与表达被引量：14: 1995年; 本文报道用一对与大肠杆菌编码Ｌ－天门冬酰胺酶Ⅱ（Ｌ－ＡｓＰｓⅡ）的基因ａｎｓＢ两侧序列互补的寡核苷酸Ｌ１、Ｌ２作引物，以Ｌ－ＡＳＰｓⅡ的野生型生产菌ｃＰＵ２１０００９染色体为模板，经ＰＣＲ扩增得到长约１．６Ｋｂ的ＤＮＡ片段。该片段通过以ＬＰ１、ＬＰ２为内引物的ＰＣＫ反应，证明包含了ａｎｓＢ基因的编码序列。将此片段经ｘｂａ１、ＨｉｎｄⅡ消化，插入质粒ＰＵＣ１８、ＰＵＣ１９上构建重组质粒ＰＵＡ１８、ＰＵＡ１９，分别转化Ａｓ１．１１８７，Ａｓ１．１１９３，ＨＢ１０１，９６３７，ＪＭ１０７，７１／１８，ＣＰＵ２１０００９等宿主菌，筛选得到Ｌ－ＡＳＰｓⅡ酶活力明显提高的８株阳性转化子。在１Ｌ生物反应器中，ＬＢ培养基３７℃下培养２４ｈ，其酶活在６．２～３１．８１Ｕ。ｍｌ之间。其中ＣＴＡ８表达Ｌ－ＡＳＰｓⅡ水平最高，达到３１．８１Ｕ／ｍｌ．各基因工程菌株较之野生型生产菌体ＣＰＵ２１０００９，其生产Ｌ－ＡＳＰｓⅡ水平提高了５～２６倍。而且ＩＰＴＧ诱导对工程菌表达Ｌ－ＡＳＰｓⅡ的水平几无影响。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得工程菌表达的Ｌ－ＡＳＰｓⅡ分子量约为１４０Ｋｄ．薄层扫描结果显示：ＣＴＡ７、ＣＴＢ８、ＣＴＡ９所产生的Ｌ－ＡＳＰｓ?; 李晶刘景晶吴梧桐胡梅清; 关键词：大肠杆菌基因克隆基因表达

穿心莲内酯酰胺类衍生物的合成及其COX-2表达抑制活性被引量：3: 2007年; 目的:合成穿心莲内酯酰胺类衍生物并研究其对环氧化酶-2(COX-2)表达的抑制活性。方法:根据穿心莲内酯类似物具有与穿心莲内酯相似的生物活性及生物电子等排原理,以穿心莲内酯的3种类似物为原料,在无水甲醇中,经氯化氢气体醇解、酰胺化生成目标化合物。按蛋白质印迹免疫分析法(Western blot)测试此类衍生物对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞中COX-2的表达抑制活性。结果与结论:合成了未见文献报道的12个穿心莲内酯酰胺类衍生物,目标化合物结构经IR,1HNMR,MS与元素分析确证。部分化合物进行了药理活性测试,其中1个目标化合物、2个中间体与穿心莲内酯的抑制活性相当。; 李晶黄文龙张惠斌周慧萍; 关键词：穿心莲内酯酰胺衍生物合成环氧合酶-2

大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达被引量：20: 1996年; 用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。; 刘景晶李晶吴梧桐胡梅清; 关键词：药物大肠杆菌基因表达

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李晶

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