李红丽
- 作品数：13 被引量：15H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 稳定表达HBX蛋白的肝干细胞株的构建和鉴定
- 目的:构建稳定表达HBX的肝干细胞株,为进一步研究HBX蛋白对肝干细胞增殖、分化的影响奠定了基础。方法:将重组质粒pSEB-Flag-HBX转染至HEK 293细胞,包装产生逆转录病毒;病毒感染肝干细胞,稻瘟菌素(Bla...
- 芦永良申利红李红丽黄佳祎冯涛
- 关键词：HBX肝干细胞
- 文献传递
- 骨形成蛋白BMP4在乳腺癌转移中的作用和机制探讨
- 目的:研究骨形成蛋白BMP4对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其机制。方法:收集10种人乳腺癌细胞株,以RT-PCR广泛筛选14种BMPs亚型的表达,结果发现BMP4的表达水平和频率均较高,且与乳腺癌细胞的转移潜能...
- 黄佳祎李红丽冯涛
- 文献传递
- 全反式维甲酸诱导肝前体细胞向肝细胞分化的研究
- 2012年
- 目的:探讨全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对肝前体细胞分化的影响。方法:取孕14.5 d胎鼠制备肝前体细胞,瞬时转染带白蛋白启动子(Albumin promoter)的荧光素酶报告质粒pALB-Luc,以便实时检测细胞的分化状态。优化ATRA诱导条件,分别于诱导后3、6、9 d收集细胞总RNA,半定量RT-PCR检测分化相关指标的变化。并于诱导后11 d用苏木精-伊红染色法观察细胞形态的改变,PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果:ATRA浓度为1μmol/L时对肝前体细胞分化诱导作用最强。与对照组相比,随培养时间的延长,ATRA组分化早期指标膜蛋白(Delta like,DLK)、细胞角蛋白(Cytokeratin19,CK19)表达降低更为明显,而甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)、白蛋白(Albumin,ALB)表达更为升高。形态学观察细胞体积增大,呈多边形,核浆比率降低,相嵌紧密排列,可见双核细胞。PAS染色阳性率上升。结论:浓度1μmol/L的ATRA对肝前体细胞分化诱导作用最强,ATRA能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞。
- 白光文李红丽申利红芦永良冯涛
- 关键词：肝前体细胞全反式维甲酸诱导分化
- 乳腺癌骨转移微环境中Noggin蛋白对成骨细胞OPG和RANKL表达影响
- 目的:探讨乳腺癌骨转移微环境中Noggin蛋白对成骨细胞护骨素(osteoprotegerin,OPG)及细胞核因子kB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kapp...
- 李红丽黄佳祎冯涛
- 关键词：NOGGIN乳腺癌骨转移护骨素
- 文献传递
- Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨Wnt3a对小鼠破骨细胞分化调控的影响。方法将细胞分为4组:阴性对照组(即空白组)、实验对照组(感染Ad-GFP组)、阳性对照组(50 ng/ml RANKL诱导组)、实验组(感染Ad-Wnt3a组)。分别给予处理因素后常规细胞培养6 d,通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞的分化成熟情况;Western blot检测TRAP、Cathep-sin K蛋白的表达;分别于处理因素后3、6、9 d提取细胞总RNA,荧光定量Real time(RT-PCR)检测核因子κB受体(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、组织蛋白酶K(Cathepsin K)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因的表达。结果TRAP染色显示50 ng/mL RANKL诱导组能成功诱导RAW 264.7成多核(核≥10),空白组和Ad-GFP组有少量多核细胞(3≤核≤5),Ad-Wnt3a组为单核有个别双核;Western blot检测显示Ad-Wnt3a组TRAP、Cathepsin K蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测Ad-Wnt3a组能下调RANK、TRAP、Cathepsin K、MMP-9基因的表达。结论Wnt3a能抑制RAW264.7分化成成熟的破骨细胞。
- 李红丽申利红芦永良冯涛黄佳祎
- 关键词：WNT3ARANKLTRAP
- 乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞分化的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:检测乙肝病毒X(Hepatitis B virus X,HBx)蛋白对肝前体细胞分化的影响,以探讨HBx蛋白能否促进肝干细胞的恶性转化。方法:以腺病毒Ad-HBx和Ad-GFP感染肝前体细胞株Hp14-19,RT-PCR和Western blot证实HBx蛋白在肝前体细胞内的表达。RT-qPCR和免疫荧光检测早期和晚期分化指标的变化,并于诱导后11 d用PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果:Ad-HBx能有效感染肝前体细胞株Hp14-19并表达。与对照组(感染Ad-GFP)相比,实验组(感染Ad-HBx)细胞分化早期指标穿膜蛋白(Delta like homolog,DLK)、肌酸激酶19(Creatine kinase19,CK19)和甲胎蛋白(Alpha fetal protein,AFP)表达降低减慢,而晚期指标CK18和白蛋白(Albumin,ALB)表达升高不明显。PAS染色阳性率降低。差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HBx可抑制肝前体细胞的分化,这可能是最终导致肝前体细胞恶性转化的原因之一。
- 白光文申利红卢永良李红丽冯涛黄佳祎
- 关键词：乙肝病毒X蛋白肝前体细胞分化肿瘤干细胞
- HBx诱导小鼠肝前体细胞上皮-间质转化被引量：3
- 2013年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)能否诱导肝前体细胞(HPCs)发生上皮-间质转化(EMT)。方法将重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,经稻瘟菌素(blasticidin)筛选,获得稳定表达HBx的HP14.5细胞。观察其形态变化,通过实时定量PCR(real time-PCR)及Western blot法检测其间质细胞标志物和上皮标志物在mRNA和蛋白水平的表达量,并采用划痕实验检测其细胞迁移能力的变化。结果 HP14.5细胞稳定表达HBx蛋白后细胞由多角形变为长梭形;与对照组相比,神经钙黏素(N-cadherin)、Snail、vimentin的mRNA和蛋白水平表达均升高,具有统计学差异(P<0.05)而上皮性钙黏素(E-cadherin)、细胞角蛋白18(CK18)的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05;同时其迁移能力显著升高(P<0.05)。结论 HBx能诱导肝前体细胞发生EMT,并增强其迁移能力。
- 芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰冯涛黄佳祎
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞上皮-间质转化
- 乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞中β-连环素表达及定位的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B Virus X,protein,HBx)对肝前体(Hepatic progenitor,HP)14-19细胞中β-连环素(β-catenin)表达及定位的影响,为研究HBV相关性肝癌的发生机制提供实验依据。方法分别用重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP感染HP 14-19细胞,RT-RCR法检测HBx基因mRNA的转录;Real-time PCR法检测β-catenin基因mRNA的水平;Western blot法检测HBx、总糖原合成酶激酶3β(total-glycogen synthase kinase 3β,t-GSK3β)、磷酸化GSK3β(Phospho-GSK3β,p-GSK3β)及β-catenin蛋白的表达;免疫细胞化学法检测β-catenin的分布情况。结果重组腺病毒Ad-GFP-HBx和Ad-GFP均能高效感染HP 14-19细胞,感染效率均可达到90%;在重组腺病毒Ad-GFP-HBx感染的HP 14-19细胞中可检测到HBx基因mRNA的转录和蛋白的表达;与Ad-GFP感染组相比,Ad-GFP-HBx感染组t-GSK3β蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05),但p-GSK3β蛋白相对表达量增加(P<0.05);β-catenin在基因和蛋白水平上表达明显增高(P<0.05),并在胞质中大量积聚,且有向胞核转位的趋势。结论 HBx可通过促进HP 14-19细胞中GSK3β磷酸化,抑制β-catenin的降解,从而导致β-catenin在胞质中大量积聚并向核内转移。HBx对肝前体细胞中经典Wnt信号通路的激活,可能是导致肝前体细胞恶性转化的分子基础。
- 申利红芦永良李红丽吴迪冯涛黄佳祎
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白Β-连环素肝前体细胞肝癌WNT信号通路
- 稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响被引量：4
- 2013年
- 目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达。结果 RT-PCR和Westernblot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P<0.05);G1细胞比例明显减少(P<0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P<0.05);cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P<0.05);GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P>0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P<0.05)。结论成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。
- 芦永良申利红李红丽胡代曦张锡峰胡斌冯涛黄佳祎
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝前体细胞WNT
- NOGGIN基因过表达对MDA-MB-231乳腺癌细胞系增殖和侵袭的影响及机制
- 2011年
- 目的基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力的影响,并初步探讨其机制。方法表达NOGGIN方法以NOGGIN重组腺病毒感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,MTT法检测细胞增殖能力,划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验检测其运动和侵袭能力,定量RT-PCR和总蛋白Western blot检测CXCR4和MMP1的表达。结果过表达NOGGIN基因的MDA-MB-231细胞增殖能力增强(P<0.05);细胞划痕愈合延迟;NOGGIN组穿膜细胞数为79±4,显著低于空病毒组的135±7(P<0.05)。过表达NOGGIN后,细胞中CXCR4和MMP1的表达下调(P<0.05)。结论 NOGGIN蛋白可抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的运动和迁移。其机制可能与下调CXCR4和MMP1的表达相关。
- 黄佳祎吴迪李红丽
- 关键词：NOGGIN乳腺癌骨转移肿瘤MDA-MB-231
