李跃辉
- 作品数：58 被引量：94H指数：6
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- 全人源抗鼻咽癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定
- 2009年
- 目的从全人源抗鼻咽癌噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体（ScFv），并对其特异性进行鉴定。方法通过噬菌体表面展示技术把ScFv表达在噬菌体表面，以鼻咽癌细胞作为抗原，用抗原递减法，通过“吸附-洗脱-扩增”过程筛选并富集特异性抗体，及ELISA筛选，获得特异阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果通过对抗体库进行三轮正负淘洗和富集后，随机挑选4212个克隆进行ELISA，发现3个克隆对CNE2呈强阳性反应，而与人正常细胞系HUVEC等呈弱阳性反应或不反应。对克隆HNSA033进一步进行免疫细胞化学验证，结果与ELISA反应一致；免疫组织化学鉴定表明克隆HNSA033与鼻咽癌组织和鼻咽组织阳性率的差别有统计学意义。结论通过淘选富集、ELISA和免疫化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆，为鼻咽癌发病机制的研究和临床诊断以及治疗奠定了基础。
- 李艳东谢平丽王甲甲李跃辉胡锦跃李官成
- 关键词：抗体
- 人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定
- 目的:构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体,并对其表达产物作初步鉴定。方法:利用分子克隆技术依次将人源鼻咽癌抗独特型抗体G22、I50基因插入到原核表达载体pET25b(+)中,经菌落PCR,双酶切验证并测序。阳...
- 王甲甲郭锋杰李跃辉李官成
- 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体疫苗原核表达
- 文献传递
- GOLPH2的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用被引量：1
- 2011年
- 目前发现GOLPH2蛋白与肝癌密切相关,将golph2基因进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.应用RT-PCR技术,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增得到golph2 cDNA,将其克隆到原核表达载体pET21a(+)-TRX内、转化大肠杆菌DH5a,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白GOLPH2,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中GOLPH2蛋白水平.成功地构建了表达TRX-GOLPH2融合蛋白的原核表达质粒pET21a(+)-TRX-GOLPH2.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以可溶性的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组GOLPH2蛋白质与预期结果一致.抗血清能够特异地识别52 kD重组蛋白、73 kD细胞裂解液和血清蛋白质.成功制备了GOLPH2蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
- 李峰刘艳红谢平丽李跃辉李官成
- 关键词：肝细胞癌蛋白质表达多克隆抗体
- 人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白的融合表达及其体内靶向性研究(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性。方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定;EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用;然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用。结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-XhoI和NcoI-EcoRI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功;重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量为58 kD,主要以包涵体的形式存在;纯化、复性后,免疫荧光检测结果显示SA3与HepG2细胞能特异性地靶向结合;注射了EGFP-SA3的荷肝癌小鼠的肿瘤部位有绿色荧光发出,显示EGFP-SA3具有良好的肿瘤特异性。结论:融合蛋白EGFP-SA3与HepG2细胞有较强的结合能力,单链抗体SA3有望用于肝癌的分子诊断和靶向治疗。
- 黄建李跃辉郭锋杰童永清王甲甲胡锦跃李官成
- 关键词：肝癌SCFVEGFP
- HOXA7促进宫颈癌细胞体外增殖的实验研究
- 2018年
- 该研究敲低同源盒基因A7(homeobox genes A7,HOXA7)后,研究宫颈癌细胞Siha、Caski体外增殖的影响。将HOXA7基因的si-RNA稳定转染至Siha、Caski细胞;RNA干扰的效果采用RTPCR、Western blot进行鉴定;细胞生长速度采用MTT法、细胞倍增时间实验来进行检测;平板克隆形成实验检测细胞接种的存活率;流式细胞术检测细胞周期。RNA干扰结果显示,敲低HOXA7基因后,Siha、Caski细胞中HOXA7表达下调。MTT结果显示,实验组Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7细胞生长速度明显下降。研究发现,对照组细胞Siha/NC、Caski/NC与实验组细胞Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7的平均倍增时间为分别为5.652±0.352 h、4.650±0.340 h、7.342±0.331 h和6.987±0.330 h;对照组细胞Siha/NC、Caski/NC与实验组细胞Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7的克隆形成率分别为35.400%±1.429%、31.700%±1.943%、24.200%±1.098%和21.200%±1.838%。分别与对照组细胞Siha/NC、Caski/NC比较,实验组细胞Siha/si-HOXA7、Caski/si-HOXA7增殖、倍增时间和克隆形成能力差异极显著(P<0.01)。实验组细胞周期也发生改变:G_1期细胞增多、S期细胞减少。这说明,HOXA7基因可以促进宫颈癌细胞Caski、Siha的增殖,这为进一步探索HOXA7基因的功能及研究宫颈癌的发病机制打下了坚实的基础。
- 陈军李跃辉刘朝阳李跃辉杨小会李官成
- 关键词：RNA干扰宫颈癌
- 用体外致敏的鼻咽癌患者B细胞构建噬菌体抗独特型抗体库被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建噬菌体人源抗独特型抗体库。方法 :体外致敏并用EBV转化鼻咽癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH 和VL 基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,转化大肠杆菌MC10 6 1,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果 :经EBV转化的 10例鼻咽癌患者的PBMC中 ,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经多次PCR ,扩增出 5种VH(γ、μ)和 7种VL(κ、λ)基因 ,经连接组成 14种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,导入大肠杆菌MC10 6 1。经四环素抗性筛选 ,得到库容为 1.1× 10 7的初级噬菌体抗独特型抗体库 ,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为 70 %。结论 :用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术 ,制备人源抗独特型单链抗体(Ab2 βScFv)
- 何小鹃李官成朱建高李跃辉
- 关键词：鼻咽癌噬菌体呈现技术抗独特型抗体
- 人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的：构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体，并对其产物作初步鉴定。方法：利用分子克隆技术依次将G22，150插入到原核表达载体pET25b（＋）中，经菌落PCR，双酶切验证并测序。阳性重组子转化入表达菌株E．coliBL21（DE3），经IPTG诱导表达后，表达的重组蛋白经Histag纯化试剂盒纯化后复性。用Western blot方法鉴定G22-150双价蛋白的表达，ELISA方法分析其蛋白活性，并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况。结果：构建的原核表达载体pET25b—G22—150经测序验证，序列正确。双价蛋白G22—150以包涵体形式高效表达，经纯化后纯度达90％以上。Westernblot鉴定表达的蛋白相对分子质量（Ms）约42000，与预期相符。ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性，并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖。结论：成功获得了有活性的双价抗独特型抗体，为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础。
- 王甲甲郭锋杰李跃辉李官成
- 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体疫苗原核表达
- 转染异种CXCR4基因下调黑色素瘤的致瘤性被引量：3
- 2007年
- 【目的】利用基因转染技术将人源趋化因子受体CXCR4基因转染小鼠黑色素瘤细胞B16,研究异源CXCR4基因转染对肿瘤致瘤性的影响。【方法】脂质体转染法将人CXCR4基因导入小鼠黑色素瘤B16细胞中,RT-PCR、流式细胞术(FACS)分析人CXCR4在B16细胞中的表达,体内成瘤实验验证B16细胞的致瘤性。【结果】人CXCR4基因转染B16细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆,RT-PCR检测到人CXCR4 mRNA的表达,流式细胞分析检测到人CXCR4蛋白的表达,体内成瘤实验证实异源CXCR4转染降低了B16的生长速度。【结论】异源CXCR4基因转染下调黑色素瘤的致瘤性,其机制可能与异源CXCR4诱导的免疫交叉反应有关。
- 汪砥刘蓓李跃辉周国华谢平丽李官成胡锦跃
- 关键词：黑色素瘤
- 肝癌相关基因HTA的分子克隆和功能研究
- 背景:本实验室前期通过生物信息学方法从EST数据库中筛选得到了一个新的肝癌相关基因HTA(hepatoma associated gene,HTA),表达谱研究显示该基因特异性表达于肿瘤组织且在肝癌组织中表达上调。目的:...
- 刘艳红李跃辉赵艳洁鞠强陈琳李峰李官成
- 关键词：全长克隆
- 文献传递
- 人源抗肝癌哺乳动物细胞表面展示全长抗体库的构建及初步应用
- 研究背景:工程抗体作为肿瘤防治的新型手段,为肝癌等恶性肿瘤的治疗带来了希望,为了克服目前鼠源性单克隆抗体和人源化单克隆抗体的局限性,全人源全长抗体是治疗性工程抗体的发展方向。目的:构建全人源抗肝癌哺乳动物细胞表面展示全长...
- 李峰刘艳红李艳雯李跃辉谢平丽周国华鞠强陈琳李官成
- 关键词：抗体库肝癌EGFL7抗体工程
- 文献传递
