杨凯
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠硫酸软骨素蛋白多糖基因shRNA慢病毒载体的构建及干扰效率鉴定
- 2011年
- 背景:最近研究发现硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)在中枢神经系统中参与多种生理病理功能,慢病毒载体可感染分裂期细胞或非分裂期的细胞,并能在细胞内高效稳定的表达。目的:构建大鼠源性NG2基因shRNA慢病毒载体并检测其干扰效率。方法:选择大鼠NG2基因RNA干扰的靶序列,合成OligoDNA,退火形成双链DNA,与HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生pLV-NG2-RNAi,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。将重组载体与pHelper1.0载体、pHelper2.0载体通过lipofectamineTM2000共转染293T细胞包装产生慢病毒LV-NG2-RNAi,收集病毒上清并浓缩。采用孔稀释滴度测定法计算病毒滴度。将LV-NG2-RNAi慢病毒感染C6细胞,于感染后96h提取细胞总蛋白,采用Westernblot检测NG2的表达。结果与结论:经PCR和测序证实构建片段大小及DNA序列与目的序列一致,实验成功构建大鼠NG2基因shRNA慢病毒载体LV-NG2-RNAi。包装浓缩慢病毒的滴度为8×1011TU/L。Westernblot检测显示在感染复数为50时,感染LV-NG2-RNAi慢病毒的C6细胞较感染对照慢病毒及未感染细胞NG2的表达明显降低,干扰效率可达100%(P<0.05)。结果证实了实验成功构建大鼠NG2基因shRNA慢病毒载体,且该载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。
- 王萍刘成方岩杨凯田学愎田玉科
- 关键词：硫酸软骨素蛋白多糖RNA干扰慢病毒细胞
- NNRG/ErbB信号通路在神经系统中的研究进展被引量：1
- 2012年
- 神经调节蛋白(NRG)是一类细胞间信号转导蛋白,其功能性受体是由ErbB酪氨酸激酶受体组成,属于跨膜酪氨酸激酶的表皮生长因子受体家族成员,包括表皮生长因子受体(也称ErbB1)、ErbB2/人源的ErbB2/neu、ErbB3/HER3和ErbB4/HER4。NRG通过诱导ErbB受体构象变化,使ErbB蛋白形成二聚体,继而激活酪氨酸激酶,引起C-末端的自身酪氨酸磷酸化和反式酪氨酸磷酸化,引起下游信号通路转导从而发挥其生物学作用。
- 杨凯田玉科
- 关键词：神经调节蛋白神经系统磷脂酰肌醇3激酶
- 蛛网膜下腔移植骨髓间充质干细胞对大鼠慢性神经病理性痛的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨蛛网膜下腔移植骨髓间充质干细胞（MSCs）对大鼠慢性神经病理性痛的影响。方法雌性SD大鼠140只，体重180～200g，采用坐骨神经分支选择损伤（SNI）法制备慢性神经病理性痛模型，术后2周，随机分为4组（n=35）：模型组（NP组）、MSCs组、PBS组和骨髓未贴壁单核细胞组（BNMCs组）。MSCs组、PBS组、BNMCs组蛛网膜下腔分别注射1×10 5／m的第3代MSCs悬液10ul、PBS10ul、1×10 5／ul的BNMCs悬液10ul。于术前、术后2周、移植后1、2、3、4、5周（T0-6）时测定机械痛阈。同时于T1～6时测定痛阈后随机选择5只大鼠取脊髓腰膨大组织，使用RT-PCR法测定脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA表达。结果与T0时比较，T1时各组机械痛阈降低，T2-6时NP组、PBS组、BNMCs组机械痛阈降低（P〈0．05）。与，T1时比较，MSCs组T2-6时机械痛阈升高，T2～4时BDNFmRNA表达上调（P〈0．05），PBS组和BNMCs组其余时点各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。与NP组比较，MSCs组机械痛阈升高，BDNFmRNA表达上调（P〈0．05），PBS组和BNMCs组各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论蛛网膜下腔移植MSCs可减轻大鼠慢性神经病理性痛，其机制可能与上调脊髓BDNFmRNA表达有关。
- 王萍田学愎罗婷刘成方岩杨凯田玉科
- 关键词：间质干细胞移植骨髓蛛网膜下腔神经痛
