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舟山黄海葵杀虫活性多肽的初步研究被引量：9: 2010年; 通过多维高效液相色谱结合动物实验,从舟山黄海葵粗毒中筛选了多种具有强杀虫活性以及低哺乳动物活性的杀虫肽,其分子量约在2~5 kDa之间,在100μg/kg体重浓度下对脊尾白虾以及黄粉虫幼虫具有强且快速的麻痹、致死活性,对小鼠毒性较弱。上述研究结果表明舟山黄海葵是一个研究和开发杀虫肽的宝库,同时也为从舟山黄海葵毒素中进一步筛选杀虫肽并深入研究其杀虫机理奠定了基础。; 刘少华杨林章晨王日昕廖智; 关键词：高效液相色谱

两种合成抗菌肽的结构及抗菌作用机理被引量：5: 2011年; 为深入了解两种新型人工抗菌肽mytilin-derived-peptide-1(MDP-1)和mytilin-derived-peptide-2(MDP-2)的溶液结构和抗菌机理并探讨两种抗菌肽之间活性差异的结构基础,采用二维核磁共振技术(2-D NMR)研究MDP分子的溶液结构;采用透射电镜技术(Transmitted electron microscopy,TEM)研究MDP分子对于大肠杆菌和藤黄叠球菌的作用机理。研究结果表明,MDP-1和MDP-2均采取了典型的β-发夹结构,其分子表面具有明显的疏水斑片,其分子中碱性氨基酸突出于分子表面;经MDP分子处理后的大肠杆菌以及藤黄叠球菌均出现细胞壁或细胞膜结构被破坏,并出现膜壁分离以及细胞质内缩现象。我们认为,MDP-1和MDP-2分子中的碱性氨基酸有助于MDP结合细菌表面的带负电荷的基团,同时其分子表面的疏水斑片有助于其插入到细菌细胞膜内;其疏水斑片面积以及碱性氨基酸在分子表面的拓扑结构差异是MDP-1和MDP-2活性差异的主要原因;电镜实验结果表明MDP-1和MDP-2的主要靶标是细菌细胞壁以及细胞膜;上述研究为深入了解MDP分子的结构与功能的关系以及将来基于MDP分子的药物研发奠定了基础。; 杨林范美华刘雪珠武梅石戈廖智; 关键词：核磁共振电镜分析

舟山黄海葵兴奋性毒素AX-1的分离纯化及鉴定被引量：4: 2012年; 目的从舟山黄海葵(AnthopLeura xanthogrammica)的刺细胞中分离纯化多肽类毒素分子并进行功能鉴定。方法通过反复冻融法以及多步高效液相色谱分离技术从舟山黄海葵毒素中分离到一种新型多肽类毒素,进行质谱鉴定和三维结构模拟,并运用膜片钳技术检测海葵毒素多肽对大鼠背根神经节(DRG)细胞的河豚毒素-敏感型(TTX-S)和河豚毒素-不敏感型(TTX-R)钠离子通道的影响。结果获得由48个氨基酸组成,相对分子质量为5018.2的多肽毒素分子,命名为AX-1,含3对二硫键;三维结构模拟表明该毒素多肽的结构以反平行β-折叠片以及loop结构为主,该毒素能抑制大鼠背根神经节细胞的钠离子通道的失活并显著增加钠离子通道的电流。结论AX-1是一种兴奋性多肽毒素,可作为潜在的强心肽药物。; 杨林荣明强刘少华章晨石戈王日昕赵盛龙廖智; 关键词：海葵钠离子通道

从兔外周血直接克隆IgG重链可变区被引量：1: 2012年; 目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因。结果获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。; 周世权廖智杨林周吉航刘晓光; 关键词：外周血重链可变区反转录-聚合酶链反应

厚壳贻贝血细胞及血清抗菌肽的分析被引量：5: 2011年; 厚壳贻贝(Mytilus coruscus)是中国东部海域广泛分布的具有重大经济价值的水产养殖贝类,其血淋巴中含有多种抗菌肽分子。为了解厚壳贻贝血细胞和血清抗菌肽分子的组成特点,采用多维高效液相色谱对厚壳贻贝血清及血细胞的抗菌肽进行分离纯化,从中鉴定了多种具有抗菌活性的抗菌肽分子,质谱鉴定结合cDNA文库数据分析表明厚壳贻贝血细胞和血清的抗菌肽主要属于Mytilin和Myticin抗菌肽家族,分子量在3000～7000Da之间,血细胞和血清抗菌肽在分子组成、抗菌谱方面均存在差异,此外还发现有分子量在10000Da左右的新型抗菌肽分子。以上工作为深入了解厚壳贻贝Mytilin抗菌肽的分子多样性、了解厚壳贻贝的免疫机制以及从中筛选具有开发价值的抗菌肽分子奠定了基础。; 杨丽佳武梅王信超李楠楠杨林陈铭杰廖智; 关键词：厚壳贻贝抗菌肽血细胞血清质谱

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杨林