杨林
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：四川大学华西口腔医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠窖蛋白-1基因重组腺病毒载体的构建
- 2008年
- 目的应用AdEasy重组腺病毒载体系统,构建携带小鼠窖蛋白-1(caveolin-1)编码区基因的复制缺陷型重组腺病毒载体Ad-caveolin-1。方法将质粒pTRE2-caveolin-1中的小鼠caveolin-1编码序列亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV中构建重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-caveolin-1,酶切线性化后转入已含有病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌中进行同源重组。筛得的病毒质粒pAd-caveolin-1经酶切鉴定后,在293细胞中包装成重组腺病毒。荧光显微镜观察绿色荧光表达。扩增并纯化病毒,测定病毒滴度和重组病毒插入片段的序列。结果重组腺病毒质粒经酶切鉴定证实成功构建了携带caveolin-1基因的重组腺病毒载体,转染293细胞后可出现明显的细胞病变效应,并观察到绿色荧光的表达,caveolin-1基因测序鉴定与GenBank中公布序列一致。重组腺病毒的滴度为:2×109pfu/mL。结论应用AdEasy系统成功地构建了重组腺病毒载体Ad-caveolin-1,通过该系统携带的绿色荧光蛋白(GFP)标记基因可直观检测靶细胞转染和外源基因表达的情况,为进一步研究caveolin-1在牙齿发育中的作用奠定了基础。
- 杨林何永红沈永岱刘磊汤炜郑晓辉田卫东
- 关键词：窖蛋白-1绿色荧光蛋白同源重组
- 转导素β-TrCP在小鼠毛囊发育中的表达与意义
- 2008年
- 目的观察转导素β-TrCP在出生后乳鼠须毛囊的表达情况,并探讨β-TrCP在毛囊发生中的作用。方法分别取胚胎18d、出生后第1d、6d小鼠头部标本,40g/L多聚甲醛固定,石蜡包埋,用LsAB法观察β-TrCP在须毛囊中的表达分布情况,并进行图像分析。结果在出生后不同发育时期的须毛囊中,β-TrCP在毛囊发育时期的毛干细胞与毛小皮细胞胞浆阳性表达;鞘小皮细胞胞浆、内根鞘Huxley层、外根鞘、间充质细胞胞浆阳性表达。内根鞘亨勒层细胞胞浆与结缔组织鞘细胞胞浆阴性表达。图像分析显示出生第6d表达量与胚胎18d表达量的差异有统计学意义(P<0.01)。结论β-TrCP在小鼠毛囊发育中呈现特征性表达。提示β-TrCP对于毛囊发育的分子信号通路正常传递具有重要作用。
- 沈永岱何永红杨林汤炜刘磊田卫东
- 关键词：免疫组化毛囊发育
