杨连威
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：厦门大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：福建省卫生厅青年科研基金厦门市卫生局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肿瘤细胞特异启动子hTERT介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR的研究被引量：3
- 2015年
- 目的:探索应用肿瘤细胞特异启动子hTERT介导靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA在卵巢肿瘤细胞特异表达并逆转MDR的可行性。方法:应用携带luc报告基因的报告质粒验证了hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中的转录活性,构建由hTERT启动子引导的靶向mdr1基因的siRNA表达载体phTERTsiMDR1B,并与携带mdr1基因靶序列的报告质粒进行共转染抑制实验,进一步将phTERT-siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染A2780细胞,检测细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平。以具有耐紫杉醇表型的A2780细胞作为靶细胞进行耐药评价实验。结果:hTERT启动子在卵巢肿瘤细胞株A2780中具有良好的转录活性,而在正常人二倍体细胞株MRC-5中无转录活性;hTERT启动子介导的siMDR1B具有良好的抑制效果与特异性;hTERT启动子介导的siMDR1B可显著抑制细胞中mdr1基因的mRNA与P-gp蛋白的表达水平;转染了hTERT启动子介导的siMDR1B表达元件的细胞对紫杉醇的耐药程度显著降低。结论:hTERT启动子介导的靶向mdr1基因的RNAi用于逆转卵巢癌细胞MDR是可行的,本研究结果可为进一步开展卵巢肿瘤MDR逆转研究提供重要基础。
- 林燕真程通张雅丽李瑞银杨连威温兰玲
- 关键词：卵巢癌HTERT启动子
- 水痘-带状疱疹病毒抗原的ELISA定量检测方法的建立被引量：5
- 2013年
- 目的:建立水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于质控VZV灭活疫苗研发和生产中抗原含量。方法:以VZV中和单抗5F6C8为包被抗体、8H5D1为酶标抗体,构建定量检测VZV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对本方法的特异性、灵敏度、准确性、线性和稳定性等性能进行分析。结果:建立的双抗体夹心定量检测VZV抗原的ELISA方法,线性范围为0.4μg～13μg/ml,相关系数为R2=0.994,定量限度为0.4μg/ml;变异系数CV<15%、准确性回收率介于87.5%～111.6%之间,稳定性37℃6天的回收率>80%。与VZV以外的相关病毒样本没有交叉反应。结论:构建的VZV抗原ELISA定量检测方法的各项性能符合定量检测需要,可用于VZV灭活疫苗的研发和生产过程的抗原含量检测。
- 周钦贾继宗刘剑陈丽宏杨连威曾丽文韩金乐叶祥忠李益民夏焕章
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒抗原双抗体夹心ELISA
- 靶向肿瘤多药耐药基因mdr1的siRNA的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- mdr1基因及其表达产物P-gp是引起肿瘤细胞多药耐药(MDR)的主要原因,抑制mdr1基因的表达可用于逆转MDR.RNAi可用于特异抑制靶基因的表达,本研究的目的是构建获得可特异有效靶向mdr1基因的siRNA元件.应用siRNA设计软件与mRNA结构分析软件设计构建了3个分别靶向mdr1基因mRNA环结构和茎结构的siRNA元件,同时构建了携带mdr1基因序列的luc报告质粒,通过siRNA表达质粒与携带靶序列的报告质粒的共转染抑制实验检测不同siRNA的抑制效率,结果显示靶向环结构siMDR1B具有较好的抑制效率和特异性.进一步将siMDR1B表达载体与mdr1基因表达载体共转染细胞,应用免疫流式细胞术检测显示,相比对照细胞,siMDR1B可显著抑制其转染后mdr1基因产物P-gp蛋白的表达活性.同时采用CCK-8细胞活性检测试剂评价了siMDR1B对细胞活性的影响,结果显示siMDR1B不会影响细胞活性,具有良好的特异性.本研究获得的可有效靶向mdr1基因的siRNA元件可为进一步开展逆转MDR研究提供重要基础.
- 林燕真张雅丽李瑞银杨连威程通温兰玲
- 关键词：MDR1基因RNA干扰SIRNA
- 新型水痘带状疱疹病毒减毒辣株-ORF7敲除突变株(rOka△7)及其毒力关键因子ORF7的初步研究
- 水痘是一种急性、高传染性的儿童常见呼吸道传播疾病,由水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)引起。同时VZV也是导致带状疱疹(HZ)的病原体,具有严重的危害性。现今使用的VZV减毒活疫苗...
- 杨连威
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒基因敲除
