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银染mRNA差异显示方法的条件优化被引量：39: 1999年; ｍＲＮＡ差异显示技术是分离差异表达基因的强有力工具。本工作旨在优化无同位素的银染差异显示方法。以总ＲＮＡ为模板，用锚定引物与随机引物的组合进行ＲＴ－ＰＣＲ反应，ＰＣＲ扩增产物在变性的聚丙烯酰胺凝胶上电泳。用银染方法显示电泳ｃＤＡＮ条带，其结果是：（１）ＲＮＡ加入量为１～３μｇ，ＲＴ－ＰＣＲ反应能扩增出较多的ｃＤＮＡ条带，而低于０．５μｇ时扩增条带数目较少；（２）在３６～４２℃的范围内，随着温度的增加，扩增的条带减少；而４２℃时扩增的条带数目锐减，特别是当ＲＮＡ加入量小于１μｇ时几乎无条带显示；３６℃扩增的条带过多而趋于ｓｍｅａｒ；（３）优化了银染液程序，染色液和显色液中３７％甲醛的量分别为０．０３％～０．０５％和０．０７５％～０．１％，显色温度４～１２℃时，显示出清晰的条带；（４）用此方法获得数条电针镇痛有效与无效大鼠表达差异的ｃＤＮＡ条带。总之，通过改变参数条件，优化了快速简便的银染ｍＲＮＡ差异显示方法。; 梁德勇王晓民崔振中徐国恒朱丽霞韩济生; 关键词：MRNA 聚合酶链反应银染基因表达

用mRNA差异显示法分离大鼠吗啡依赖相关基因被引量：5: 1999年; 目的：分离并克隆大鼠吗啡依赖相关基因。方法：ＳＤ大鼠用递增剂量的吗啡作皮下注射，形成吗啡依赖的动物模型。分离鼠脑的中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团，提取总ＲＮＡ，用ｍＲＮＡ差异显示（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙＰＣＲ，ＤＤＰＣＲ）的方法，筛选吗啡依赖大鼠特异表达产物的ｃＤＮＡ片段。用３组锚定引物（Ｔ１２ＭＮ，Ｍ＝Ａ，Ｇ，Ｔ或Ｃ，Ｎ＝Ａ，Ｃ或Ｇ）和６组随机引物（ＡＰ１～ＡＰ６）作不同组合进行ＰＣＲ扩增。结果：获得了８０余个差异表达产物的ｃＤＮＡ片段，经斑点杂交初步筛选，克隆了１０个阳性片段，选取４个克隆进行序列分析，获得了４个ｃＤＮＡ片段。结论：通过ＢＬＡＳＴ数据库序列比较，现已确认获得了４个吗啡依赖表达的新基因片段。; 崔振中梁德勇金蕾罗非王晓民韩济生; 关键词：吗啡依赖基因扩增 MRNA 相关基因

抑制性消减杂交法分离吗啡依赖大鼠脑内的差异表达基因的初步报道被引量：4: 2000年; 用递增剂量的吗啡处理 SD大鼠 ,建立吗啡依赖大鼠模型 ,选取中脑导水管周围灰质、伏核、纹状体等核团 ,提取总 RNA,用抑制性消减杂交 ( SSH)方法 ,分离吗啡依赖大鼠的高表达基因 ,初步获得了 4个新基因的 c DNA片段 ,并发现了 3个已知的功能基因在吗啡依赖过程中增高。进一步的研究尚在进行中。; 崔振中梁德勇王玢金蕾罗非王晓民韩济生; 关键词：吗啡依赖抑制性消减杂交 SD大鼠

银染mRNA差异显示方法的建立和吗啡诱导基因的克隆被引量：17: 1998年; 目的：建立非同位素银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离吗啡相关基因。方法：以吗啡处理的ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，用５’ｄＴ１２ＭＧ锚定引物和两条随机引物组合进行ＤＤＲＴＰＣＲ扩增。经测序凝胶电泳分离后，用银染方法显示差异ＤＮＡ条带，在直视下从凝胶中回收差异条带并进行再扩增，扩增产物克隆入ｐＧＥＭＴ载体。结果：建立了非同位素的银染ｍＲＮＡ差异显示方法，分离和克隆了一些吗啡诱导的差异表达基因。; 徐国恒凌雁梁德勇崔巍王晓民万有韩济生; 关键词：银染色法基因扩增 MRNA

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梁德勇