毕爱笑
- 作品数：12 被引量：40H指数：4
- 供职机构：上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：上海市卫生局科研基金上海市科学技术委员会科研基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 东南亚人免疫缺陷病毒感染者合并非结核分枝杆菌病的流行情况
- 2012年
- 背景和目的：非结核分枝杆菌（NTM）病在发达国家中是人免疫缺陷病毒（HIV）感染人群的主要易患疾病。该研究旨在评价东南亚地区HIV感染者中NTM病的流行情况。方法：采用2007年ATS和美国传染病学会制定的NTM病诊治指南，将纳入的东南亚3个国家HIV感染者分为NTM肺病、疑似NTM肺病、播散性NTM病和无NTM病4组，收集患者肺部及肺外标本进行检测。结果：由于柬埔寨的实验室结果仅使用固体培养基进行分枝杆菌培养，缺乏NTM分类的可靠依据，仅用于评价不同国家之间NTM的流行情况。泰国和越南的实验室采用液体培养基检测，1060例HIV感染者中有124例（12％）确诊为结核病；218例（21％）NTM阳性1次以上，其中66例（30％）被归类为疑似NTM肺病，9例（4％）为NTM肺病，10例（5％）为播散性NTM病，
- 毕爱笑胡忠义唐神结
- 关键词：非结核分枝杆菌病人免疫缺陷病毒病毒感染者HIV感染者NTM病
- 分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究被引量：9
- 2009年
- 目的构建重组MTB分泌蛋白MPT64，制备多克隆抗体，评价其在鉴定MTB复合群中的应用价值。方法通过PCR扩增mpt64基因，构建pET21a—mpt64重组质粒；纯化重组蛋白并免疫兔制备多克隆抗体；纯化和标记抗体，建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）方法；检测分枝杆菌标准菌株和临床分离株培养液中MPT64蛋白，抽提样本基因组扩增mpt64基因。结果成功构建重组质粒，纯化重组蛋白并制备多克隆抗体，检测抗体浓度为0．85g／L，ELISA法检测敏感度为0．01mg／L，MTB复合群中H37Rv、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性，24株非MTB均为阴性；rapt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符。ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97．3％（110／113），57株非MTB均未检出MPT64蛋白，检测特异度为100．0％。基因扩增MTB中2株为阴性，非MTB均为阴性。结论采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群，是一种准确、快速和简便的方法，值得临床推广应用。
- 刘忠华秦莲花冯永红毕爱笑杨华丁元生崔振玲金瑞良郑瑞娟胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核分泌蛋白
- 结核分枝杆菌Rv3872基因的克隆、表达和纯化被引量：4
- 2008年
- 目的原核表达并纯化结核分枝杆菌Rv3872蛋白。方法聚合酶链反应(PCR)技术从结核分枝杆菌标准株H37Rv全基因组中扩增出的表达Rv3872基因序列,将其克隆到pMD18-T载体后,测序分析。亚克隆该目的基因到pET28a表达载体,最终转化至大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后大量表达重组Rv3872蛋白,再经纯化、定量后,通过Westernblot分析其抗原性。结果扩增Rv3872基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致,表达蛋白经SDS-PAGE分析,在约15000kD处有表达条带,纯化后的重组蛋白占总蛋白的90%以上。免疫印迹分析显示重组的Rv3872蛋白具有抗原性。结论成功表达结核分枝杆菌的Rv3872蛋白,为结核病血清学诊断候选抗原筛选和开发应用打下基础。
- 毕爱笑丁元生刘忠华胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核克隆分子纯化
- 巢式PCR技术尿液中筛查肺结核患者的初探
- 目的 初步探讨巢式PCR技术(nested PCR)在尿液标本中快速检测结核分枝杆菌代谢后可随尿液排出DNA片段的应用价值.方法 选取上海市肺科医院确诊初治活动性肺结核住院患者172例,其他肺部疾病住院患者30例,门诊正...
- 毕爱笑秦莲花王鹏尹洪云胡忠义
- 关键词：巢式PCR结核分枝杆菌基因诊断
- 文献传递
- 结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及血清学诊断应用
- 目的：
构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32(culture filtrate protein 32，CFP32)的重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化重组CFP32，探讨其在结核病血清学诊断中的应用价值。
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- 毕爱笑
- 关键词：分枝杆菌结核血清学试验
- 文献传递
- 结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的克隆表达和纯化被引量：1
- 2007年
- 目的构建结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64原核表达载体并进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板扩增出MPT64基因,产物经纯化回收后与载体pMD-T连接转化,酶切鉴定,克隆到pET21a原核表达载体,测序鉴定插入序列完全正确者转化大肠杆菌BL21,诱导表达MPT64融合蛋白,利用亲和层析纯化表达产物,SDS-PAGE电泳进行鉴定。结果成功构建MPT64表达载体,SDS-PAGE电泳鉴定成功表达MPT64蛋白。并以此蛋白进行结核抗体的检测,其特异性和敏感性分别为96%和43%。结论成功表达结核分枝杆菌MPT64蛋白,并进行特异性和敏感性的检测,证明重组的MPT64蛋白有希望成为结核病血清学诊断的组合抗原的候选者之一。
- 唐宇龙丁元生杨华毕爱笑秦莲花郑瑞娟胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌MPT64克隆
- 结核分枝杆菌38kD-16kD融合蛋白克隆表达及血清学诊断价值被引量：11
- 2009年
- 目的构建重组结核分枝杆菌38 kD-16 kD融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值。方法通过聚合酶链反应扩增获得16 kD和38 kD基因片段,分别连接到表达载体pET21a中,同时将2片段2次连接到表达载体pET21a中,形成38 kD-16 kD(3 816),16 kD,38 kD重组载体;经表达、纯化和复性后,通过Western blot分析,以酶联免疫吸附试验检测184例血清抗体,肺结核患者96例、非结核肺部疾病患者50例,正常对照38例。结果成功构建重组质粒pET21a-3816,表达蛋白经SDS-PAGE后显示相对分子质量约为65 kD,重组蛋白经镍柱纯化后,纯度均达90%以上;经Western blotting证实重组蛋白能与结核病患者血清反应;重组蛋白3816血清检测,其敏感性为80.2%(77/96),特异性为90.9%(80/88)。结论成功表达和纯化了3816融合蛋白,其对血清学检测证明重组融合蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一。
- 刘忠华丁元生毕爱笑冯永红金瑞良杨华秦莲花胡忠义
- 关键词：重组融合蛋白质类血清学试验
- 结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及血清学检测被引量：2
- 2008年
- 目的构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32（culture filtrate protein32，CFP32）的重组质粒，在大肠杆菌中表达并纯化重组蛋白CFP32，探讨其对结核病的诊断价值。方法通过聚合酶链反应技术从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中扩增出Rv0577基因，将其克隆到pMDl8一T载体后，再亚克隆到表达载体pET21a，在大肠杆菌BL21（DE3）进行表达，经纯化及复性后，通过Western blot分析，并以酶联免疫吸附试验检测160例血清抗体，其中肺结核患者97例、非结核肺部疾病患者25例，正常对照38名。结果构建了CFP32重组质粒，并在大肠杆菌中进行了高效表达，表达蛋白经SDS—PAGE分析，在约相对分子质量30000处有表达条带，镍柱纯化后的重组蛋白占总蛋白的90％以上。Western blot证实重组蛋白可以与结核患者血清特异结合。并以此蛋白进行160份血清结核抗体检测，结果敏感度为63．9％（62／97），特异度为96．8％（2／63）。结论成功构建pET21a—CFP32表达载体，并在大肠杆菌中高效表达CFP32蛋白，对其血清抗体检测证明重组的CFP32蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一。
- 毕爱笑丁元生刘忠华胡忠义
- 关键词：分枝杆菌结核血清学试验
- 一种利用恒等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌方法
- 目的建立一种利用环介导恒等温(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测临床标本结核分枝杆菌复合群的方法。方法针对结核分枝杆菌hspX基因设计4对特异引物,优化反应体...
- 毕爱笑中岛千绘铃木定彦胡忠义
- 关键词：结核分枝杆菌基因诊断
- 文献传递
- 结核分枝杆菌显微镜观察药敏检测技术研究及应用
- 显微镜观察药敏技术(microscopic observation drugsusceptibility,MODS)是2000年Caviedes等建立的一种结核病实验室快速诊断和耐药性测定技术.该技术1周即可获结核分枝杆...
- 胡忠义金文国符佑辉王洁郑瑞娟崔振玲陆俊梅毕爱笑
- 关键词：结核分枝杆菌显微镜药敏试验耐药性测定
- 文献传递
