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鸡包涵体肝炎病毒荧光定量PCR滴度测定方法的建立及与不同滴定方法间的比较: 本研究根据GenBank中Ⅰ群禽腺病毒(FAV-Ⅰ)代表株AAU46933(CELO株)的Hexon基因序列设计一对通用引物,摸索了合适的扩增条件,建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,并对9株鸡包涵体肝炎毒...; 李昌静王作昭王静静刘永举张毅毕玉敏王冬冬陈文雅尹燕博; 关键词：鸡包涵体肝炎病毒滴度测定; 文献传递

CDV、CPV和CPIV多重PCR检测方法的建立被引量：8: 2013年; 为了建立一种快速诊断犬瘟热病毒、犬细小病毒和犬副流感病毒的多重PCR方法,参照GenBank中的犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬副流感病毒(CPIV)基因序列,设计了3对引物分别用于特异扩增犬瘟热病毒F基因、犬细小病毒VP2基因和犬副流感病毒F基因上的目的片段。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(740bp)、CPV(419bp)和CPIV(559bp)的多重PCR方法。结果表明特异性和敏感性良好,对CDV、CPV、CPIV 3种病毒的最低核酸检测量为1ng/μL。临床样品的多重PCR检测结果表明,建立的多重PCR方法能够对CDV、CPV、CPIV单个感染或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。; 康泰毕玉敏陈欣孙忠晟王祖荣尹燕博; 关键词：多重PCR 犬瘟热病毒犬细小病毒犬副流感病毒

鸡包涵体肝炎病毒荧光定量PCR滴度测定方法的建立及与不同滴定方法间的比较: 2016年; 本试验根据Gen Bank中I群禽腺病毒(FAV-Ⅰ)代表株AAU46933(CELO株)的Hexon基因序列设计一对通用引物,摸索了合适的扩增条件,建立了SYBR Green I荧光定量PCR方法,并对9株鸡包涵体肝炎毒株的病毒滴度进行了测定,并与OD260法、鸡胚病变法以及细胞病变法测定的结果进行比较。试验结果表明,本方法的检测下限为0.98×102拷贝/μL。以细胞病变法为标准测定方法,经统计学分析发现,鸡胚病变法与细胞病变法之间无统计学差异(P=0.591);荧光定量PCR法与细胞病变法测得结果之间存在线性相关性(相关系数r=0.965,P<0.05);OD260法与细胞病变法测得的结果间无相关性(P>0.05)。以上结果说明,荧光定量PCR法测定结果能够间接反映病毒感染力,与传统方法相比,该方法操作简单、耗时短、成本低,具有较高的应用价值。; 李昌静王作昭王静静刘永举张毅毕玉敏王冬冬陈文雅尹燕博; 关键词：荧光定量PCR

猪流行性腹泻病毒S蛋白部分抗原表位基因的原核表达及表达产物的免疫原性分析被引量：5: 2014年; 为获取具有免疫原性的猪流行性腹泻病毒S蛋白,并能有效研究其免疫原性,从山东省猪流行性腹泻病毒感染的某猪场病料中扩增S蛋白基因具有免疫原性的4个片段(Sa,Sb,Sc和Sd)。将得到的目的片段导入原核表达载体pGEX-6P-1中,转化到BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。将表达的蛋白免疫家兔以研究其免疫原性。结果表明,IPTG诱导融合蛋白表达条件的最佳诱导时间为8h,IPTG的最佳终浓度为1.0mmol/L。SDS-PAGE和Western-blot分析表明,四个表达产物的分子质量分别约为61ku(Sa)、46ku(Sb)、41ku(Sc)、43ku(Sd)。经琼脂扩散试验测定,它们免疫后效价分别约为24(Sa)、25(Sb)、22(Sc)、24(Sd)。该研究表明,表达的4段蛋白均具有免疫原性,这为后期亚单位疫苗的研制奠定了基础。; 毕玉敏陈欣李昌静刘永举朱丰龙时超尹燕博; 关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因免疫原性

比格犬β-防御素cBD1基因的原核表达与鉴定: 2014年; 为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank中登录的犬β-防御素基因cBD1(canis familiarisβ-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1的分子质量相一致。Westernblot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单克隆抗体发生反应,显示重组蛋白获得了表达。结果表明,成功表达的cBD1为新型抗菌制剂的研制奠定了试验基础。; 冯培祥潘福星毕玉敏郭学金陈欣杨莉徐守振王建琳郭妍妍尹燕博; 关键词：比格犬 Β-防御素原核表达

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毕玉敏