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全人源抗白介素21单链抗体的筛选与鉴定被引量：1: 2012年; 白介素21是具有免疫调节功能的I型细胞因子,在异常状态下可介导类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和炎性肠病等多种自身免疫性疾病。为了拮抗白介素21的生物学活性,采用固相亲和筛选的方法,从Griffin1全人源噬菌体单链抗体库中筛选出抗白介素21的单链抗体。经过4轮亲和筛选,可溶性ELISA结果表明65%的噬菌体克隆可与IL-21发生特异性结合,经基因测序挑选出高亲和力的单链抗体FG8,转化至大肠杆菌HB2151中进行可溶性表达,采用镍柱亲和层析对表达的蛋白进行纯化后,SDS-PAGE和Western blot检测单链抗体相对分子质量为30 k。定量ELISA分析显示,单链抗体FG8与白介素21的结合呈浓度依赖性,可进一步研究用于炎症及自身免疫性疾病的诊断及靶向性治疗。; 吴沁航王彤张弢张娟王旻; 关键词：白介素21 噬菌体展示单链抗体酶联免疫法自身免疫性疾病

一种CD24抗体融合蛋白的设计及其应用: 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及一种CD24抗体融合蛋白的制备方法及用途。本发明利用基因工程技术将CD24单链抗体rG7S与MICA分子胞外1‑3区通过G<Sub>4</Sub>S柔性肽相连接，哺乳动物真核表达体系...; 张娟王旻王彤孙福谋; 文献传递

抗EGFR/抗KDR双特异性单链抗体的构建及表达被引量：2: 2012年; 针对EGFR或VEGFR信号通路的相互作用导致的耐药性,为增强抗EGFR或抗VEGFR2抗体单独使用疗效不佳的癌症的治疗效果,本文利用重叠PCR将抗人EGFR胞外区单链抗体基因scFv-E10和抗人VEGFR2(KDR)的单链抗体基因scFv-AK404R融合在一起,得到抗EGFR/抗KDR双特异性单链抗体(bispecific single-chain diabody,scDb)基因,scDb的连接肽序列为15个氨基酸(G4S)3,在肽链的C端引入His标签及myc标签。将scDb基因连接入载体pHEN2,转化大肠杆菌HB2151并诱导表达,经镍柱纯化获得电泳纯scDb蛋白,产量约为570μg.L 1发酵液。ELISA测定显示,scDb与EGFR胞外区的结合与亲本scFv-E10相当,与KDR胞外区的结合略低于亲本scFv-AK404R,表明抗EGFR/抗KDR scDb可与EGFR和KDR两种抗原特异性结合,可用于进一步的抗肿瘤活性研究。; 周雅琼张娟金海珍何远王彤王旻; 关键词：表皮生长因子受体血管内皮生长因子受体2 双特异性单链抗体单链抗体原核表达

重组人白介素21的原核表达与体外活性研究的优化被引量：1: 2013年; 为了构建重组人白介素21(rhIL-21)原核稳定表达和体外活性检测系统,采用Overlap-PCR法合成目的基因;经双酶切整合至pET28,化学转化法转入大肠杆菌BL21(DE3)构建pET-28a-rhIL-21 BL21(DE3)原核表达系统;胞内表达的包涵体经镍亲和层析色谱柱纯化后,尿素缓冲液梯度透析复性,最终溶于PBS缓冲液;双抗体夹心法ELISA、Western blotting检测复性蛋白的生物活性;细胞增殖抑制试验(MTT法)研究rhIL-21对Jurkat细胞株和HuT102细胞株的作用。实验成功建立了rhIL-21表达纯化与活性评价体系,为进一步研究IL-21的促免疫性疾病发展和抗肿瘤活性奠定了基础。; 王彤张娟厉道娟罗晨吴沁航高美风王旻; 关键词：原核表达复性细胞增殖抑制

全人源抗白介素21单链抗体的筛选与鉴定: 白介素21是具有免疫调节功能的Ⅰ型细胞因子,在异常状态下可介导类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和炎性肠病等多种自身免疫性疾病.为了拮抗白介素21的生物学活性,采用固相亲和筛选的方法,从Griffinl全人源噬菌体单链抗体库中...; 吴沁航王彤张弢张娟王旻; 关键词：单链抗体药物筛选生物学活性; 文献传递

全人源的抗人白介素21受体的单链抗体及其应用: 本发明属基因工程抗体技术领域，具体地公开了一种全人源抗人白介素21受体的单链抗体C2，及其制备方法和用途。本发明还公开了C2的重链可变区和轻链可变区免疫球蛋白分子的氨基酸序列，包括对应于互补决定区CDR1、CDR2和CD...; 王旻吴沁航张娟王彤罗辰; 文献传递

重组Reg3α蛋白促进胰岛β细胞增殖活性及其机制的研究被引量：3: 2014年; 构建了鼠源Reg3α蛋白基因工程表达菌E coli(T7 Expression),经IPTG诱导以包涵体形式表达。通过菌体裂解、洗涤和镍柱亲和层析等纯化步骤,SDS-PAGE和HPLC鉴定制得的重组Reg3α蛋白纯度为97.6%。细胞MTT和BrdU标记检测显示重组Reg3α蛋白能有效促进MIN6细胞和原代胰岛的增殖,Western blot方法证明其能够显著提高Erk1/2和Akt信号分子的磷酸化水平从而刺激细胞增殖。在重组Reg3α蛋白抵抗链脲霉素(Streptozotocin,Stz)诱导MIN6细胞凋亡实验中,未能检出剪切型Caspase-3水平的降低,但MTT结果显示其能维持活细胞数量。在毒胡萝卜内酯(Thapsigargin,Tg)诱导MIN6细胞内质网应激反应(Endoplasmic retieulum stress,ER stress)实验中,重组Reg3α蛋白能有效降低剪切型Caspase-3水平,同时增强关键分子伴侣GRP78的表达从而抑制细胞凋亡。重组Reg3α蛋白具有作为外源性药物促进胰岛β细胞增殖、抗凋亡的活性,具备根治糖尿病药物研究的潜力。; 庾璐婷杨孟奇王彤吴铭渊吴印婷罗晨王旻; 关键词：胰腺Β细胞链脲霉素

一种CD24抗体融合蛋白的设计及其应用: 本发明属基因工程抗体技术领域，具体涉及一种CD24抗体融合蛋白的制备方法及用途。本发明利用基因工程技术将CD24单链抗体rG7S与MICA分子胞外1?3区通过G<Sub>4</Sub>S柔性肽相连接，哺乳动物真核表达体系...; 张娟王旻王彤孙福谋

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王彤