王志杰
- 作品数：16 被引量：15H指数：2
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 戊型肝炎病毒(HEV)合成肽及基因重组抗原免疫反应性研究被引量：1
- 1998年
- 用ＯＲＦ２、ＯＲＦ３合成肽抗原（１～１０号）及基因工程重组的ＯＲＦ２抗原（１和２号）分别建立了酶联免疫方法（ＥＩＡ），检测６０份戊型肝炎病人血清中ＨＥＶＩｇＧ及ＩｇＭ１０个合成肽抗原（Ｓｐ１－Ｓｐ１０）及２个重组抗原（Ｒｅ１、Ｒｅ２），均和ＨＥＶ阳性血清发生特异反应，但阳性率和反应强度差别很大。以Ｒｅ１（ＯＲＦ２，４０２～６６０）检测的抗体阳性率最高，为９６．７％（５８／６０）；Ｓｐ６（ＯＲＦ３，８８～１２３）次之，为９３．３％（５６／６０）；以上两种抗原混合使用阳性率为１００％（６０／６０）。Ｓｐ６、Ｒｅ１及这两种抗原混合使用检测抗ＨＥＶＩｇＭ，阳性率分别为１８．３％（１１／６０）、６６．７％（４０／６０）和６６．７％（４０／６０）。研究结果表明：合成肽６号（Ｓｐ６）及重组抗原１号（Ｒｅ１）是制备戊肝抗体诊断试剂的理想抗原。
- 戎广亚孙杰周继文任继明赵桂兰雷祖才张芳王志杰王雪飞杨守纯
- 关键词：戊型肝炎病毒合成肽重组抗原免疫反应
- 用RACE技术对一株肠道病毒3′端进行扩增和序列分析被引量：3
- 2006年
- 目的应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增,并对其核苷酸序列进行比较分析。方法提取病毒总RNA,以锚定oligdT(17)引物进行逆转录,用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增,将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果获得了该病毒的3′端核苷酸序列,同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90%左右,而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80%;推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90%以上。结论用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析,证明该病毒属新型肠道病毒类,为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。
- 侯俊沈宏辉胡燕朱雷王志杰雷厉貌盼勇
- 关键词：肠道病毒属DNA
- 乙型、丙型和非甲～戊型肝炎患者血清TTV抗体的研究被引量：1
- 2000年
- TTV是近年发现的一种新的DNA病毒,它在肝脏疾病中的致病作用尚未确定。国内外资料均表明,TTV在全世界有广泛的分布,而且在各种人群中有较高的感染率。为了解TTV在本地区各类肝炎患者及正常人群中的感染率,本室用ELISA方法对264份血清样品进行了TTV抗体的检测。其中乙型肝炎109份,丙型肝炎67份,正常人115份,非甲-戊型肝炎47份,阳性率分别为6.4％,6.0％,5.2％和19.1％。统计学分析结果表明,前三组TTV感染率相互之间没有显著性差异(P>0.05),而非甲-戊型肝炎组TTV感染率与前三组差异均非常显著(P<0.01),说明在既往病因不明的肝炎中,可能有一部分患者是由于TTV感染所致。但因所测定的病例数有限,TTV在肝脏疾病中的致病作用仍有待于进一步研究。
- 赵桂兰戎广亚周继文王雪飞雷厉张晖王志杰戴久增
- 关键词：TTV非甲-戊型肝炎ELISA
- 三种不同转染方法拯救病毒的比较研究
- 2013年
- 目的比较3种不同转染方法，探索最佳的拯救病毒策略。方法3种转染方法包括：①含T7RNA聚合酶启动子的全长肠道病毒71（EV71）感染性质粒（P—EV71）和T7RNA聚合酶真核表达质粒（VR-1a）共转染Vero细胞；②含T7RNA聚合酶启动子的EV71全长基因片段（PCR产物）与VR-1a共转染Vero细胞；③利用体外转录技术得到EV71病毒全长RNA，直接转染Vero细胞。分别观察3种方法转染后产生细胞病变效应（CPE）时间及病变情况，用RT—PCR扩增拯救病毒核酸，测序验证其正确性，用蛋白印迹方法检测拯救病毒抗原。结果3种方法均可成功转染Vero细胞得到拯救病毒，三种转染方法转染效果比较：方法③优于②、②优于①。结论三种转染方法均可成功拯救EV71病毒，以病毒RNA直接转染效果最好。
- 侯俊罗生栋胡燕沈宏辉白冰珂柴燕涛王志杰貌盼勇
- 关键词：RNA肠道病毒属转染
- 新型呼肠病毒S1基因真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建新型呼肠病毒主要抗原蛋白盯1蛋白的真核表达质粒，研究其在真核细胞内的表达。方法将s1基因克隆人真核表达载体pCAGGS／MCS，构建真核表达质粒pc—s并转染~ero细胞。通过SDS—PAGE和Western—Blot试验，对转染后24，48及72h的细胞内蛋白表达进行研究。结果酶切分析表明重组质粒构建成功。SDS—PAGE和Western—Blot的检测结果一致表明，转染后s1基因可在Vero细胞内表达且72h的细胞内蛋白表达量最高。结论通过构建重组真核表达质粒，可使s1基因在真核细胞内高效表达，为进一步研究新型呼肠病毒与宿主受体的相互作用打下基础。
- 白冰珂黄维芝罗声栋胡燕高蓉王志杰黄琼柳昊东貌盼勇
- 关键词：基因表达调控病毒病毒蛋白质类
- 表达HBV preS2S基因重组MVA假病毒颗粒的构建及抗原性鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带HBVpreS2S基因的重组MVA假病毒颗粒,评价其抗原性。方法将HBVpreS2S基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-preS2S,将此质粒转染MVA病毒通过同源重组得到MVA-preS2S,通过免疫印迹法鉴定其抗原性。结果利用基因测序,PCR鉴定证实所得假病毒颗粒可以表达HBVpreS2S基因,并且具有良好的抗原性,经过9次传代得到单克隆重组病毒。结论本试验成功地构建了表达HBVpreS2S基因的重组MVA假病毒颗粒MVA-preS2S,为基因治疗HBV慢性感染做了一项实验性奠基工作。
- 栾翔凌刘素君胡燕侯俊沈宏辉王志杰辛绍杰貌盼勇
- 关键词：痘苗病毒HBV基因治疗
- 肠道病毒71型（EV71）AH3株感染性克隆的构建与鉴定
- 2014年
- 目的 构建肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71） AH3株的全基因序列感染性克隆.方法 通过分段扩增和酶切连接将EV71全基因组cDNA片段逐步克隆入PWSK29载体,构建含全病毒基因组序列的重组质粒.转染Vero细胞后,获得拯救病毒.经RT-PCR、酶切、测序、间接免疫荧光（IFA）等方法进行鉴定.结果 酶切鉴定结果与预期一致,序列分析显示为EV71基因；其转染Vero细胞后,可观察到典型的细胞病变；所获得的拯救子代病毒滴度（TCID50）为107.5；IFA检测可见感染细胞出现绿色荧光.结论 成功构建EV71全基因序列感染性克隆,为病毒致病机理及减毒疫苗的研究奠定基础.
- 侯俊李瑞生胡燕罗声栋白冰珂沈宏辉王志杰柴燕涛杨瑞创貌盼勇
- 关键词：肠道病毒属
- 戊型肝炎病毒结构区基因的克隆表达及其在诊断中的初步应用被引量：2
- 1998年
- 目的研制戊型肝炎病毒诊断试剂。方法利用融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ表达了戊型肝炎病毒第二读码框区（ＯＲＦ２４０２～６６０）优势抗原表位。表达抗原溶于水，可利用商品化的谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ亲合层析柱得到纯化的抗原。结果经应用发现，此基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原，用于检测血清中抗戊型肝炎病毒抗体，与新加坡进口试剂盒有高度的一致性，和血清中抗体反应性更强。结论预示该基因抗原可能具有较好的反应谱。
- 戎广亚孙杰周继文赵桂兰任继明王雪飞张芳王志杰杨守纯
- 关键词：戊型肝炎病毒基因表达
- 3种EV71VP1包涵体蛋白纯化方法的比较研究
- 目的：比较分析3 种纯化方法对基因工程表达EV71 VP1 包涵体蛋白的纯化效果,为相应诊断方法的建立提供原料。方法：分别采用差速离心、IMAC 柱及硫酸氨沉淀等3 种方法对原核表达EV71 VP1 包涵体蛋白进行纯化,...
- 柴燕涛谢国明胡燕姜棋予杨锐创邬顺全王志杰侯俊貌盼勇
- 关键词：包涵体蛋白纯化SDS-PAGE电泳
- 突变型HBV前C-C基因疫苗的构建及真核细胞表达被引量：2
- 2008年
- 目的采用点突变技术对HBV前C-C基因中的蛋白酶切位点进行4处点突变,构建突变型HBV前C-C/ENHⅡ重组基因疫苗,转染HepG2细胞,研究其在真核细胞内的表达情况。方法采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞,通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹等方法检测其在HepG2细胞内的表达情况及表达产物的分子量。结果VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞均胞浆表达目的蛋白,产物分子量分别为18、20、22 kD,细胞裂解液的HBeAg含量VE4、VE2高于VEC,上清中则反之。结论突变型HBV前C-C基因疫苗VE2、VE4构建成功并表达预期病毒前C蛋白前体。
- 张敏辛绍杰胡燕侯俊沈宏辉王志杰貌盼勇
- 关键词：点突变
