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王泽鋆: 作品数：15 被引量：23H指数：3; 供职机构：武汉生物制品研究所更多>>; 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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狂犬病病毒核衣壳抗原诊断试剂盒实验室内的质控方法: 2007年; 目的探讨狂犬病病毒核衣壳抗原诊断试剂盒实验室内质控方法。方法以ELISA双抗体夹心法检测狂犬病病毒抗原为例,采用“Levey-Jennings”和“即刻法”质控法进行对比。结果“Levey-Jennings”质控图中所有测定结果均处于“在控状态”,而“即刻法”质控图中一次测定结果处于“失控状态”。结论宜采用双质控方法进行狂犬病病毒核衣壳抗原诊断试剂盒实验室内质控。; 王泽鋆胡巧玲徐葛林; 关键词：狂犬病病毒试剂盒

柯萨奇病毒A组5型VP1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备: 2020年; 目的原核表达柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)VP1蛋白,并制备抗VP1多克隆抗体(多抗),为CV-A5相关定性定量研究制备试剂。方法逆转录PCR扩增N端截短的CV-A5VP1-ΔN56后,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,获得pGEX-6P-1-VP1-ΔN56。将其转化大肠埃希菌BL21(DE3),表达重组蛋白并纯化。用纯化的谷胱甘肽巯基转移酶-VP1-ΔN56融合蛋白经背部皮下免疫日本大耳白兔,制备多抗。结果重组表达载体构建成功,融合蛋白以不可溶包涵体存在。ELISA、蛋白质印迹法检测表明,获得的兔多抗效价为107,可特异性识别重组和天然CV-A5 VP1蛋白。结论成功制备重组CV-A5 VP1蛋白及特异性多抗。为中和抗原表征研究及VP1定性定量分析奠定了基础。; 靳卫平卢佳吴杰胡岗周金戈王文辉王泽鋆孟胜利申硕; 关键词：原核细胞多克隆抗体 VP1

人博卡病毒样颗粒的研制及初步应用: 2005年，瑞典学者首次报道在呼吸道疾病患者鼻咽分泌物中发现人博卡病毒1，随后，人博卡病毒2和人博卡病毒3又分别在急性迟缓型麻痹患儿和腹泻患儿的粪便中被相继发现。人博卡病毒是一类无包膜的单链线状DNA病毒，暂时划归为细小...; 王泽鋆; 关键词：人博卡病毒病毒样颗粒酶联免疫吸附试验血清流行病学; 文献传递

柯萨奇病毒A6型VP1和VP2基因的原核表达及多克隆抗体制备被引量：4: 2018年; 目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virusA6,CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备抗CVA6VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6VP1和VP2基因片段,整合入表达载体pGEX-6p-1,转化至大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化,纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔,获得兔抗血清。Westernblot(WB)和间接免疫荧光试验(indirectimmunofluorescence assay,IFA)鉴定抗体。结果CVA6VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确,获得了高纯度的CVA6VP1和VP2融合蛋白,WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。结论成功构建了CVA6VP1和VP2原核表达载体,获得了重组的CVA6VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。; 陈静陈静李鹏飞吴杰孟胜利申硕; 关键词：VP1 VP2 原核表达多克隆抗体

柯萨奇病毒A6病毒样颗粒的制备及免疫原性初步研究: 2020年; 手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种常见传染病,以婴幼儿发病为主,柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)是引起HFMD暴发的主要病原体,其疫苗开发有待深入的研究,而病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是潜在安全的候选疫苗。为制备CV-A6 VLPs,并研究其免疫原性,本研究利用Bac-toBac昆虫细胞杆状病毒表达系统共表达P1和3CD蛋白,制备并纯化CV-A6 VLPs,应用间接免疫荧光试验(Indirect immunofluscent assay,IFA)、SDS-PAGE、Western Blot、透射电镜法等方法鉴定。以Al(OH)3为佐剂,三种不同剂量CV-A6 VLPs免疫BALB/c小鼠,采用微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体滴度。结果显示,重组有P1和3CD的杆状病毒质粒转染Sf9细胞,可形成CV-A6类病毒颗粒,直径约为26nm。SDS-PAGE和Western Blot结果说明P1前体蛋白被3CD作用切割产生了VP0、VP1和VP3,CV-A6 VLPs由这三个病毒结构蛋白构成。小鼠免疫实验结果显示,CV-A6 VLPs可以刺激产生较高水平抗CV-A6的特异性中和抗体,维持至少12周,并且抗体中和效价与免疫剂量和免疫次数呈正相关。本研究获得重组杆状病毒rBac-CV-A6-P1-3CD,并在Sf9细胞内成功表达CV-A6 VLPs,可以刺激小鼠产生较高水平和持久的体液免疫反应。; 陈静李波李鹏飞陈易吴杰王泽鋆孟胜利申硕

柯萨奇病毒A组16型实壳病毒颗粒与空壳病毒颗粒免疫原性的比较被引量：3: 2015年; 目的比较柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CVA16）实壳病毒颗粒（full particle,FP）和空壳病毒颗粒（empty particle,EP）的免疫原性。方法以CVA16病毒株CVA16-L731感染Vero细胞,采用10层细胞工厂培养工艺培养病毒,收获液经离心纯化后,用甲醛灭活,获得灭活纯化的CVA16-L731 FP和EP。采用BCA法检测CVA16-L731 FP和EP的蛋白浓度,4%~12%SDS-PAGE、Western blot及透射电镜对CVA16-L731 FP和EP进行鉴定。以氢氧化铝为佐剂,分别以EP、FP、EP/FP为抗原,于第0、14、28天经后肢肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,于0、7、21、35、49、63、77、91 d对小鼠进行眼眶采血。采用微量中和试验法检测免疫小鼠血清中和抗体滴度,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性Ig G抗体滴度,母传抗体保护试验检测CVA16-L731 FP和EP的垂直保护效果。结果纯化后的CVA16-L731 FP和EP的蛋白浓度分别达到420和150μg/ml;CVA16-L731 FP可见4条相对分子质量分别约为34 000（VP1）、26 000（VP2）、24 000（VP3）和8 000（VP4）的条带,CVA16-L731 EP可见3条相对分子质量分别约为36 000（VP0）、34 000（VP1）和24 000（VP3）的条带;CVA16-L731 FP和EP的纯度均可达95%;CVA16-L731 VP1兔多抗可与FP及EP的VP1、CVA16-L731 VP2兔多抗可与FP-VP2及EP-VP0发生特异性免疫反应;CVA16-L731FP和EP分别为内部不可被磷钨酸负染的FP致密圆形颗粒和内部可被磷钨酸负染的黑色EP圆型颗粒。小鼠免疫试验结果显示,第1次免疫后各抗原免疫组小鼠血清中和抗体阳性率均为100%;第2次免疫后血清中和抗体滴度和血清特异性Ig G水平均显著升高;第3次免疫后血清中和抗体滴度均无明显变化,但血清特异性Ig G水平均明显升高;第3次免疫后的63 d内,血清中和抗体滴度均无显著变化。各抗原免疫组乳鼠存活率均为100%。结论CVA16-L731 FP和EP均能诱导小鼠持续产生较高水平的血清中和抗体和特异性Ig G抗体,且母传抗体可保护2日�; 张夫坤卢佳吴杰王泽鋆季雅琪郑晓丽申硕; 关键词：柯萨奇病毒A组16型中和抗体

人肠道病毒71型VP4多抗的制备及其应用: 2016年; 目的制备人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)VP4多抗,并鉴定EV71空心颗粒(empty particle,EP)和实心颗粒(full particle,FP)。方法构建重组表达质粒p GEX-6p-1-VP4,诱导表达并纯化GST-VP4融合蛋白,免疫家兔制备多抗。ELISA法检测抗体效价,免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot法鉴定抗体特异性。应用制备的多抗经Western blot法区分EV71 EP与FP。结果质粒p GEX-6p-1-VP4经双酶切及测序鉴定证明构建正确,纯化后的GST-VP4融合蛋白相对分子质量约32 000,以包涵体形式存在。免疫家兔后可获得效价达10^(10)的多抗。兔抗EV71 VP4多抗可识别EV71原核表达及天然病毒颗粒中的VP0、VP4。结论抗EV71 VP4多抗可应用于EV71 EP及FP的鉴定,为EV71的基础研究及疫苗研发提供了新的工具及方法。; 任富利周辉王泽鋆孟胜利申硕; 关键词：肠道病毒71型 VP4 多克隆抗体

柯萨奇病毒A6型多克隆抗体的制备及鉴定: 2020年; 目的制备兔抗柯萨奇病毒A6型(Coxsackie virus A6,CVA6)多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法将杆状病毒-昆虫细胞表达系统中共表达的CVA6病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)纯化后免疫日本大耳白兔,制备其多克隆抗体;用CVA6-R69-XY-2016、CVA10-R97-XY-2016、CVA16-V217-XY-2016、EV71-V54-XY-2016及CVA6 Gdula毒株分别感染人恶性胚胎横纹肌瘤RD细胞,体外中和试验及ELISA法检测中和抗体和结合抗体效价,Western blot法及间接免疫荧光试验(indirect immunoinfluscent assay,IFA)检测抗体特异性。结果制备的兔抗CVA6 VLP多克隆抗体与CVA6-R69-XY-2016及CVA6 Gdula毒株的中和抗体效价均可达1024,多克隆抗体仅与这2种病毒的结构蛋白VP1、VP2及VP3产生特异性反应,仅在这2种病毒感染的RD细胞中产生明显的绿色荧光;经ELISA分析,其结合效价达1×10^7。结论成功制备了兔抗CVA6 VLP多克隆抗体,其特异性良好,可为CVA6血清型中和试验鉴别、病毒结构蛋白定性定量分析提供抗体试剂。; 魏真妮孟晓丹陈静王文辉卢佳卢佳吴杰郭靖王泽鋆吴杰申硕; 关键词：病毒样颗粒多克隆抗体

GⅡ.17型诺如病毒多克隆抗体的制备及应用被引量：3: 2017年; 目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P>0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。; 王文辉万鑫霍玉奇凌同丁力孟胜利王泽鋆申硕; 关键词：病毒样颗粒多克隆抗体 NOV

一株人源狂犬病毒的分离鉴定及N、G基因序列分析: 　　目的：对武汉市东西湖区一株人感染狂犬病毒(RABV)的N、G基因进行遗传学分析,比较其与近年来湖北省及周边地区分离的代表性街毒株、亚洲国家(或由其输出)人源街毒株,及人用和兽用狂犬病疫苗病毒株之间的差异.方法：以直接...; 王月严家新任亮吴杰郑新雄解庭波黄思佳翟珑山王泽鋆季雅琦; 关键词：狂犬病毒遗传学分析; 文献传递

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