田宇飞
- 作品数：15 被引量：21H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院军事兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学哲学宗教更多>>
- 基于Tet-On 3G的IFITM3诱导表达MDCK细胞系的建立及功能分析被引量：1
- 2017年
- 利用Tet-On 3G系统构建了含人IFITM3基因的真核表达质粒pTRE3G-IFITM3,并将其与调控质粒pLVX-Tet3G共转染犬肾细胞(MDCK),转染后48 h用G418和嘌呤霉素进行筛选,用多西环素(Dox)对获得的细胞系进行诱导表达鉴定,并进行Dox敏感性分析、IFITM3^+细胞百分数及定位分析.用含萤光素酶(Luciferase)报告基因的禽流感病毒H5/H7蛋白或VSV G蛋白包裹的假型慢病毒颗粒进行感染实验,检测萤光素酶活性.结果表明,筛选获得了携带人IFITM3的MDCK诱导表达细胞系,且IFITM3表达量与Dox剂量和诱导时间相关;确定Dox工作浓度为2.5μg/mL,诱导12 h时IFITM3^+细胞数达75%以上,且IFITM3在晚期内体/溶酶体存在分布;假型病毒感染及萤光素酶活性分析表明,IFITM3可显著抑制禽流感病毒H5,H7和VSV G蛋白介导的病毒进入,为深入探究其具体的抑制机制奠定了基础.
- 曹婷婷杜寿文许汪邢彬赵飞王茂鹏朱羿龙白杰英田宇飞刘立明赵翠青周义发李昌金宁一
- 重组H8N4亚型禽流感病毒的拯救
- 2012年
- 将H8N4亚型流感病毒的HA和NA基因插入双向转录/表达载体pHW2000中,并与本实验室保留的适应毒株A/PR/8/34(H1N1)的6个质粒pHW2000-PB2、pHW2000-PB1、pHW2000-PA、pHW2000-NP、pHW2000-M、pHW2000-NS共转染293T和MDCK混养细胞,在细胞内部完成病毒粒子的组装,然后接种SPF鸡胚,经3代扩毒后,成功拯救了H8N4亚型重组流感病毒,并对其进行鉴定及生物学特性分析。本研究结果为该亚型禽流感病毒变异机理研究及疫苗的研制等奠定了基础。
- 崔鹤馨李沂田宇飞袁森凡敏靖杰齐延新郭欢欢田明尧金宁一
- 关键词：病毒拯救禽流感病毒重组病毒
- 乙型脑炎病毒可视化分型基因芯片的制备被引量：2
- 2014年
- 目的:制备乙型脑炎病毒(JEV)可视化分型基因芯片。方法:根据JEV的基因组序列,应用生物学软件设计JEV分型引物及探针,制备其可视化分型基因芯片;用生物素标记的引物PCR扩增目的片段,并与固定于玻片上的探针杂交,加入链霉亲和素标记的纳米金,银增强实现可视化;进行特异性、灵敏性及重复性试验。结果:探针特异地与相应的标记目的基因片段杂交,并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号;2号探针能特异性检出JEV,3、4号探针可分别对Ⅰ型和Ⅲ型JEV进行分型;芯片对JEV质粒检测的灵敏度达105拷贝/mL;以蓝耳病病毒等5种病毒为对照,芯片只对JEV响应,具有特异性;制备的基因芯片具有批间、批内重复性。结论:制备的基因芯片具有高特异性、灵敏性及重复性,可以快速、准确、高通量地对JEV进行可视化分型检测。
- 薛斐辛舒田宇飞孙文超温树波阎富龙盛媛王茂鹏朱羿龙田明尧金宁一
- 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片可视化
- 乙型脑炎病毒分型基因芯片的制备被引量：7
- 2011年
- 目的制备乙型脑炎病毒分型基因芯片。方法根据乙型脑炎病毒的基因组学序列,应用生物学软件设计乙型脑炎病毒分型引物及探针,制备JEV分型基因芯片。PCR扩增荧光标记的片段与固定于玻片上的探针杂交后,进行芯片清洗、扫描及结果分析。通过特异性、灵敏性、重复性试验验证,建立分型基因芯片检测方法。结果杂交显示,设计的6条探针中有3条特异地与相应的标记样品杂交并在芯片上呈现较强的阳性杂交信号,其中1号探针能特异性检出乙型脑炎病毒,4、5号探针可对JEV-Ⅰ和JEV-Ⅲ型进行分型。制备的基因芯片具有可靠的重复性。结论建立的基因芯片具有高特异性、灵敏性及良好的重复性,可以快速、准确、高通量地对乙型脑炎病毒进行分型检测。
- 郭欢欢凡敏鲁会军刘振江齐延新秦艳青岳云强袁森崔鹤馨田宇飞刘昊田明尧金宁一
- 关键词：乙型脑炎病毒基因型基因芯片
- 高致病性禽流感HA基因DNA表达盒的构建及免疫效力研究
- 高致病性禽流感(HPAI)死亡率极高,对养禽业造成毁灭性打击,并严重威胁人类健康和生命安全。本研究构建了针对H5、H7亚型禽流感病毒HA基因的DNA重组体,并进行了小鼠免疫试验研究。通过RT-PCR的方法获得了禽流感病毒...
- 田宇飞
- 关键词：高致病性禽流感HA基因免疫效力
- 文献传递
- IFITM3基因的克隆及其在真核细胞中的表达与定位研究被引量：1
- 2012年
- 目的:干扰素rhIFN-α2B体外诱导人胚胎肾细胞系293T细胞获得IFITM3基因,观察IFITM3基因在293T细胞中的表达与定位。方法:利用干扰素rhIFN-α2B体外诱导293T细胞获得IFITM3基因,采用RT-PCR技术扩增获得干扰素诱导的跨膜蛋白IFITM3全长cDNA,扩增产物连接至pMD18-T载体上,测序正确后,将IFITM3基因亚克隆至真核表达载体pVAX1中获得重组质粒pV-IFITM3,通过转染293T细胞进行表达与定位研究。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,获得的目的基因IFITM3能够表达,且具有良好抗原活性;激光共聚焦显微镜观察显示,IFITM3基因表达后主要分布于细胞膜上。结论:成功获得IFITM3基因,并验证了其表达。该研究为基于IFITM3的抗病毒药物以及探讨其抗病毒机制研究奠定了坚实基础。
- 朱娜李昌郭焱李沂孙丹丹任静强杜寿文秦艳青王茂鹏田宇飞金宁一
- 关键词：克隆
- 禽流感疫苗的研究进展
- 来禽流感的在全球范围内流行,不但带来了巨大的经济损失并开始威胁人类的健康。由于其重要的经济和公共卫生学意义,使得禽流感的防控显得突出重要.疫苗的使用是控制禽流感流行的主要手段。目前实际应用中以禽流感全毒灭活苗为主,但由于...
- 南文龙金宁一鲁会军徐一鸣田明尧陈义锋赵翠青田宇飞
- 关键词：禽流感疫苗研制基因工程技术
- 基因芯片技术的研究进展
- 本文着重介绍了基因芯片技术的基本原理、分类、制备方法,并对该技术在病症研究、临床诊断及药物筛选中所具有的实际应用价值及问题进行综述。
- 田宇飞金宁一田明尧南文龙赵翠青
- 关键词：基因芯片实际应用
- 文献传递
- 表达新城疫病毒血凝素—神经氨酸基因溶瘤腺病毒的抑瘤作用
- 虽然近年来治疗技术有了长足的进步,但恶性肿瘤仍然是世界性难题。基于腺病毒载体的基因治疗进展迅速,并已经开展了大量的临床前和临床研究,其中CRCA受到了广泛的关注。由于CRCA具有肿瘤特异性复制的功能,此类溶瘤腺病毒还可以...
- 田宇飞
- 关键词：新城疫病毒溶瘤腺病毒抗肿瘤
- 文献传递
- 3种常见呼吸道病毒检测基因芯片的制备被引量：6
- 2013年
- 目的建立一种可同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒的基因芯片方法。方法根据GenBank已发表的鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的基因序列,应用生物学软件设计相应的引物和寡核苷酸探针,构建检测芯片;使用巢式PCR扩增标记目的片段,将其与检测基因芯片进行杂交和扫描分析;通过特异性、灵敏性和重复性试验评估基因芯片方法。结果设计的全部探针均能与相应的标记样品特异性杂交,其中探针1a和1b可特异检测鼻病毒;探针2a、2b和2c可特异检测呼吸道合胞病毒,探针3a和3b可特异检测腺病毒。基因芯片法检测3种病毒的最低拷贝数分别是2.59×102个/μl、2.21×101个/μl和2.05×102个/μl。结论构建的基因芯片可特异性检测样品中低滴度的鼻病毒、呼吸道合胞病毒以及腺病毒,有望为临床提供确诊依据。
- 崔鹤馨田明尧姜庆利袁森田宇飞李沂刘昊靖杰阎富龙金宁一朱光泽
- 关键词：鼻病毒呼吸道合胞病毒腺病毒巢式PCR基因芯片
