罗文娟
- 作品数：23 被引量：44H指数：4
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 牛磺酸抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究被引量：10
- 2003年
- 目的 探讨牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法取兔晶状体离体培养,分为对照组、H_2O_2氧化损伤组、氧化损伤同时加牛磺酸共3组,每组64只晶状体,分别以不同时限观察各组晶状体混浊情况,DNA缺口末端原位检测法(TUNEL法)及DNA片段分析检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 牛磺酸组的晶状体混浊情况和晶状体上皮细胞凋亡率均明显低于H_2O_2氧化损伤组,与对照组差别无统计学意义。DNA片段琼脂糖凝胶电泳:H_2O_2组培养24、36、48及72h各时限均呈现凋亡细胞的典型梯状条带;而培养24h的对照组、牛磺酸组均未出现此变化而仅呈现正常细胞电泳条带。结论 牛磺酸可抑制H_2O_2氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡,从而延缓或减轻白内障形成。
- 罗文娟阎洪禄王传富
- 关键词：牛磺酸晶状体上皮细胞凋亡白内障
- 血小板源性生长因子和bFGF促进猫角膜内皮细胞增生的协同作用研究被引量：3
- 2006年
- 目的观察血小板源性生长因子(PDGF-BB)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对猫角膜内皮细胞(CECs)增生的影响及其联合应用对细胞增生是否有协同作用。方法猫CECs原代培养,传1代后,分别在培养液中加不同浓度的PDGF-BB和bFGF,加药后第1、3、5d分别利用MTT法测定在490nm处的吸光值来判断CECs的增生情况;同时应用倒置相差显微镜观察细胞形态,扫描电镜检测细胞超微结构。结果与对照组比较,加药后第1、3、5d,PDGF-BB和bFGF均能增加培养的猫CECs的数量,最有效质量浓度分别为100ng/ml和10ng/ml,二者联合培养组猫CECs的增生能力更强。结论PDGF-BB和bFGF可促进猫CECs的增生,二者具有协同作用。
- 罗文娟王传富王丽梅
- 关键词：血小板源性生长因子碱性成纤维细胞生长因子角膜内皮细胞MTT法
- 人血小板源性生长因子B链基因的克隆表达及其对猫角膜内皮细胞体外增殖的影响被引量：9
- 2006年
- 目的构建血小板源性生长因子B(PDGF B)原核表达载体,表达足量的PDGF BB蛋白,作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,观察角膜内皮细胞增殖情况。方法从健康剖宫产妇胎盘组织中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT PCR),扩增出PDGF BcDNA,将其克隆至含T7启动子的质粒pET28a(+)中,构建表达质粒pET PDGF B,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL PDGF B,进行PDGF BB蛋白的表达,以Ni2+NTA树脂对表达蛋白纯化、复性;将得到的PDGF BB蛋白作用于体外培养的猫角膜内皮细胞,用MTT法分析其对细胞增殖的影响;通过倒置相差显微镜、透射电镜观察细胞形态变化以及细胞内部超微结构。结果经基因测序证明,成功构建出pET PDGF B质粒;凝胶自动扫描分析表明,PDGF BB在BL21(DE3)大肠杆菌中得到了高效表达,表达的PDGF B单体蛋白经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE),显示了1条特异蛋白带,相对分子质量约为27000;MTT法证明所表达的PDGF BB蛋白可促进体外培养的猫角膜内皮细胞增殖。结论pET PDGF B原核表达载体的成功构建和PDGF BB蛋白制备纯化为生产活性PDGF BB蛋白及其进一步功能研究奠定了基础。PDGF BB蛋白具有促进猫角膜内皮细胞增殖的作用。
- 罗文娟刘美光王传富王丽梅
- 关键词：血小板源性生长因子内皮细胞细胞分裂
- 人血小板源性生长因子B链基因的克隆表达及其对猫角膜内皮细胞体外增殖的生物学效应
- 罗文娟王传富赵桂秋刘美光刘相萍隋爱华杨堃
- 主要目的与方法：本实验合成了PDGF-B真核表达载体PcDNA4-PDGF-B，在脂质体介导下转染体外培养的猫角膜内皮细胞；合成了原核表达载体pET-PDGF-B，制备出PDGF-BB蛋白，并将其纯化后作用于体外培养的猫...
- 关键词：
- 关键词：克隆
- 克隆人血小板源性生长因子B基因构建腺相关病毒载体及其病毒滴度测定被引量：1
- 2007年
- 目的:克隆人血小板源性生长因子B基因于腺相关病毒载体中,以获得高感染滴度的重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒。方法:实验于2005-10/2006-11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。①健康足月产妇胎盘组织由青岛大学医学院附属医院妇产科提供,产妇及其家属均知情同意。DH5α宿主菌由青岛大学医学院附属医院中心实验室制备保存。②Trizol试剂提取健康足月产妇胎盘组织总RNA,反转录-聚合酶链反应一步法克隆人血小板源性生长因子B基因全长开放读框。聚合酶链反应产物定向克隆于腺相关病毒载体,重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体进行双酶切和测序鉴定。③采用磷酸钙转染法将重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体、腺相关病毒包装载体,腺相关病毒辅助载体共转染腺相关病毒293细胞,包装得到重组腺相关病毒并回收病毒原液,显微镜下观察细胞及培养基的变化。④以携带β-半乳糖苷酶基因的腺相关病毒作为报告基因同重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体一样共转染相关病毒293细胞,对报告基因行X-Gal染色,通过蓝染的细胞计算病毒滴度。结果:①重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体酶切鉴定及序列分析:聚合酶链反应产物经电泳证明大小正确,重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒载体酶经双酶切和测序鉴定证实将血小板源性生长因子B基因正确插入。②腺相关病毒293细胞转染过程中病毒颗粒的产生:腺相关病毒293细胞转染6h后培养基底部出现无数小黑色颗粒,为加入的转染复合物颗粒。24h后腺相关病毒293细胞部分变圆,随着病毒增殖,细胞成串浮起,出现细胞病理效应。48h后细胞变形,逐渐从壁上脱落。72h后培养基的颜色从红色变化为橙色或黄色。③病毒滴度检测:通过携带β-半�
- 刘相萍罗文娟隋爱华杨堃吕振华王传富
- 关键词：重组腺相关病毒病毒滴度血小板源性生长因子
- 一种便携手持式视网膜内视仪
- 本发明公开了一种便携手持式视网膜内视仪，包括视网膜内视仪本体，所述视网膜内视仪本体底部的两侧均固定连接有支撑腿，所述视网膜内视仪本体顶部的两侧均固定连接有固定块，两个固定块之间设置有把手，所述固定块靠近把手的一侧开设有滑...
- 罗文娟高云霞
- 文献传递
- 碱性成纤维细胞生长因子促进猫角膜内皮细胞的增殖作用
- 本文观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对猫角膜内皮细胞增殖的影响。在青岛大学医学院附属医院中心实验室2005年-2006年完成细胞分子生物学水平的实验。
- 刘美光罗文娟王传富
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子MTT法角膜内皮细胞增殖机制
- 人血小板源性生长因子B基因转染对猫角膜内皮细胞增殖的影响
- 2008年
- 背景：许多研究显示外源性的人血小板源性生长B基因的转染可促进创伤的愈合。目的：用重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体及重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒转染和感染猫角膜内皮细胞，观察其对猫角膜内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点：分组对照观察细胞基因工程研究，于2007—01／11在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料：健康足月幼猫，体质量250-300g，雌雄不限。重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体及重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒由青岛大学医学院附属医院中心实验室自行构建。方法：常规显微镜下撕取内皮培养法，培养出原代猫角膜内皮细胞，传2代的细胞用于实验。脂质体法将重组人血小板源性生长因子B基因真核表达载体转染到猫角膜内皮细胞中，重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒采用直接感染法。实验分正常对照组、质粒对照组、重组质粒组、腺相关病毒对照组和重组腺相关病毒组。转基因24h和48h后收集细胞，Trizol试剂提取其总RNA。主要观察指标：通过荧光定量聚合酶链反应检测目的基因在细胞中的表达。四甲基偶氮唑盐法检测转基因48h后细胞的增殖活性。结果：①撕取内皮法可方便获取到原代猫角膜内皮细胞。②自行设计的针对目的基因及内参基因的探针引物经扩增后电泳验证及序列测定证明特异性高。③转基因24h和48h后荧光定量聚合酶链反应检测人血小板源性生长因子B基因mRNA发现：正常对照组、真核表达质粒对照组和腺相关病毒对照组间差异无显著性意义（P〉0．05）；重组人血小板源性生长因子B基因真核表达质粒转染组和重组人血小板源性生长因子B基因腺相关病毒实验组与正常对照组相比差异显著（P〈0．05）。④四甲基偶氮唑盐�
- 刘相萍罗文娟隋爱华杨堃胡丽婷王传富
- 关键词：血小板源性生长因子转染内皮细胞角膜
- 人血小板源性生长因子基因B转染体外培养猫角膜内皮细胞的生物学效应
- 本文通过EffecteneTM脂质体介导将自行构建的人血小板源性生长因子基因B(PDGF-B)真核表达载体(pcDNA4-PDGF-B)转染到体外培养的猫角膜内皮细胞中，证明人PDGF-B基因不仅能在体外培养的猫角膜内皮...
- 罗文娟
- 关键词：角膜内皮细胞体外培养增殖内皮细胞生物学效应
- 维生素C抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究被引量：9
- 2004年
- 目的 探讨抗氧化剂维生素C对氧化损伤所诱发的的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法 分别以不同时限观察对照组、H2 O2 氧化损伤组、氧化损伤同时加VitC共 3组的晶状体混浊情况 ,并用TUNEL法及DNA片段分析检测各组各时晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 晶状体混浊情况显示随培养时间延长VitC组晶状体混浊度明显轻于氧化损伤组 (P <0 0 1) ;TUNEL检测发现 ,VitC组各时限凋亡率均明显低于H2 O2 组 (P <0 0 1) ;DNA片段分析显示H2 O2 组2 4、3 6、48及 72h各时限均呈现凋亡细胞典型梯状条带 ,而培养 2 4h的对照组和VitC组均未出现此变化而仅呈现正常电泳条带。结论 抗氧化剂VitC可抑制H2 O2 氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡并减轻或延缓白内障形成。
- 罗文娟阎洪禄王传富
- 关键词：维生素C晶状体上皮细胞细胞凋亡白内障
