胡晓文
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人XAF1基因启动子的克隆及其在人肝癌细胞株中活性的测定被引量：1
- 2009年
- 目的分析XAF1基因启动子在肝癌细胞株中的活性,为研究XAF1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法从肝癌细胞株中扩增XAF1基因的1 395 bp启动区域片段并分别克隆到报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,分别将含有XAF1基因启动子的报告基因载体pGL3-basic和pEGFP-1转染肝癌细胞株HepG2、SMMC7721,检测萤火虫荧光素酶的活性并观察绿色荧光蛋白的表达。通过转染细胞、荧光素酶活性测定及观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果重组的质粒经双酶切和测序结果证实克隆的XAF1启动子片段序列正确;转染后的HepG2、SMMC7721荧光素酶相对发光强度分别是6.97±0.74、6.12±0.59。其绿色荧光蛋白强度明显低于对照组。结论本实验构建的含XAF1启动子的报告基因质粒为研究XAF1基因的转录调控提供实验依据。
- 陈琼余琴汪志军里进胡晓文王晶常莹林菊生
- 关键词：基因XAF1启动区转录调控
- 脂筏介导的内源性大麻素对HepG2细胞的作用及其机制被引量：3
- 2010年
- 目的研究内源性大麻素（AEA）以脂质为基础的信号途径对肝癌细胞株HepG2的作用机制，探讨AEA在肝癌发生和发展中的作用。方法免疫荧光检测脂肪酸水解酶、大麻素受体（CB）1和CB2在胎肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2中的定位。以不同浓度的AEA及膜胆固醇耗竭剂甲基-β-环糊精（MCD）处理，分为AEA10μmol／L组、AEA20μmol／L组、AEA40μmol／L组、MCD10mmol／L＋AEA10μmol／L组、MCD10mmol／L＋AEA20μmol／L组和MCD10mmol／L＋AEA40μmol／L组，分别孵育L02细胞和HepG2细胞，流式细胞术碘化丙啶单染法检测细胞的坏死率。WesternBlot检测L02和HepG2细胞中脂肪酸水解酶、CBl和CB2的蛋白表达及其下游信号通路磷酸化P38促分裂原活化蛋白激酶（P—P38MAPK）和磷酸化CJun氨基端激酶（P—JNK）的表达变化。组间均数的比较采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果AEA可有效地导致肝癌细胞坏死，以浓度为AEA40μmol／L组达到最大效应，F=108．594，P〈0．05，差异有统计学意义。MCD10mmol／L预孵育后的HepG2细胞坏死率在AEA10μmol／L组、AEA20μmol／L组和AEA40μmol／L组分别为7盘3％±2．13％，16．30％±0．94％，43．09％±5．10％，MCD处理前AEA10μmol／L组、AEA20μmol／L组、AEA40μmol／L组分别为13．64％±1．69％、20．28％±0．91％、52．71％±4．29％，处理前后比较，t值分别为3．702，5．274和3．503，P值均〈0．05，差异均有统计学意义。同时，AEA能激活HepG2细胞中P38MAPK和JNK，以AEA40μmol／L组作用明显，F值分别为11．908和26．054，P值均〈0．05，差异均有统计学意义，MCD作用前P—P38MAPK和P—JNK／D-肌动蛋白灰度值分别为1．63±0．06，1．60±0．31，MCD作用后PP38MAPK／β-肌动蛋白、P-JNK灰度值分别为1．14±0．01、1．17±0．29，作用前后相比，t值分别为2．801和12．829，雅均〈0．05，差异均有统计学意义。结论AEA可以有效
- 吴文杰阳乔曹芹芳张耀文夏雨佳胡晓文唐望先
- 关键词：HEPG2细胞内源性大麻素
- 5-Aza-CdR对人肝癌细胞株SMMC7721生长及XAF1基因启动子异常甲基化的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721生长的影响以及对具有促凋亡作用的X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子1(XAF1)的基因表达和甲基化的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞后,RT-PCR法检测XAF1 mRNA的变化,MSP检测XAF1基因甲基化的变化,用MTT法检测5-Aza-CdR对SMMC7721细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测其对SMMC7721细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率的影响。结果经过5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理后,RT-PCR检测显示,SMMC7721中XAF1mRNA表达比对照组增加,差异有统计学意义(分别是P=0.034,P=0.002)。MSP检测结果XAF1的甲基化得到了逆转。用1、5、10μmol/L的5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞24、48、72 h后,MTT检测到细胞的生长受到抑制,且呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率均明显增加,5、10μmol/L组细胞凋亡率分别为(7.23±0.92)%、(12.62±1.30)%,与对照组(3.53±0.40)%相比差异有统计学意义(分别是P=0.013,P=0.001)。其细胞周期阻滞于S期。结论5-Aza-CdR抑制SMMC7721细胞的生长,使XAF1基因异常甲基化状态得到逆转,XAF1基因转录水平上调,为其应用于肝癌治疗提供了实验依据。
- 陈琼林菊生常莹余琴里进胡晓文王晶
- 关键词：甲基化
