董旭旸
- 作品数：5 被引量：16H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- PEG10基因siRNA真核表达载体的构建及其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响被引量：9
- 2007年
- 目的:构建针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体,体外观察其对肝癌HepG2细胞凋亡的影响.方法:设计针对PEG10基因的3个siRNA靶序列,构建真核表达载体siRNA1,siRNA2和siRNA3,脂质体分别转染HepG2细胞后实时定量PCR,检测其对HepG2细胞PEG10基因表达的影响,MTT法、流式细胞仪和激光共聚焦检测转染siRNA后的HepG2细胞的生长活性及凋亡.结果:成功构建了针对PEG10基因的3个特异性siRNA表达载体.它们不同程度地抑制了HepG2细胞PEG10基因的表达,以siRNA2抑制效率最高,可达93.99%.HepG2细胞的生长也明显受到抑制(P<0.05),大量HepG2细胞凋亡,siRNA2凋亡率最高,为66.91%.结论:靶向PEG10基因的siRNA表达载体可抑制肝癌HepG2细胞的生长,诱导细胞凋亡,该作用与降低PEG10基因的表达有关.
- 黄锦林菊生董旭旸常莹宋宇虎
- 关键词：RNA干扰
- Stathmin在肝细胞癌中的表达及其意义
- 董旭旸
- 文献传递
- siRNA抑制肝癌细胞DNA修复门控基因表达的实验
- 2007年
- 目的本实验旨在研究siRNA抑制DNA修复门控基因Rad52、Ku70和Ku80的效果并筛选出高效的siRNA作用靶位。方法依据siRNA设计原则,针对每一个门控基因的mRNA序列各选择了2个靶位点并构建了相应的siRNA表达载体(psiRNA1～6)。酶切分析及DNA测序鉴定重组质粒构建成功后,将其转染人肝癌细胞株HepG2。RT-PCR和Western Blot分别用来检测psiRNAs在转录水平和翻译水平干扰靶基因的效果。结果psiRNA1～6作用细胞后明显抑制了靶基因的表达。比较而言,psiRNA1、psiRNA4、psiRNA5干扰效果分别比psiRNA2、psiRNA3、psiRNA6更佳。结论siRNA为进一步研究DNA修复门控基因Rad52、Ku70和Ku80的功能奠定基础。
- 任精华林菊生董旭旸徐冬常莹
- 关键词：SIRNA表达载体放疗敏感性
- PEG10基因siRNA真核表达载体对HepG2细胞周期的影响被引量：9
- 2007年
- 目的观察针对遗传印记基因PEG10的siRNA真核表达载体对人肝癌HepG2细胞周期及细胞周期调控蛋白表达水平的影响。方法以脂质体法将psiRNA-PEG10真核表达载体转染HepG2细胞,RT-PCR检测PEG10 mRNA的表达,流式细胞仪观察细胞周期分布的变化;RT-PCR和Western Blotting法分别检测细胞周期调节蛋白D1(CyclinD1)和P27 mRNA和蛋白水平的表达变化。结果RT-PCR结果显示,转染psiRNA-PEG10的HepG2细胞中PEG10 mRNA的表达明显降低;流式细胞仪检测发现,与未转染组和空载体组相比,转染psiRNA-PEG10后处于G0/G1期的HepG2细胞百分比明显升高(P<0.01),而G2/M期的细胞百分比明显降低(P<0.01);在mRNA和蛋白水平上,转染psiRNA-PEG10的细胞CyclinD1表达明显降低;而P27表达明显升高(P<0.01)。结论PEG10可通过影响细胞周期调控蛋白CyclinD1和P27表达,干扰肿瘤细胞的细胞周期发挥抗瘤作用,针对PEG10的siRNA真核表达载体有望成为研究肝癌治疗的有力工具。
- 黄锦林菊生董旭旸唐滔
- 关键词：PEG10RNA干扰肝癌
- PEG10基因RNA干扰对人肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响
- 2009年
- 目的研究PEG10基因RNA干扰对肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响。方法psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞,MTT法检测细胞体外增殖速度,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞后,明显沉默了Hep3B mRNA和蛋白的表达,转染后48 h抑制效率最高。Hep3B细胞体外增殖受到抑制(P<0.05),流式细胞仪分析结果显示大量Hep3B细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察到凋亡细胞形态。结论PEG10基因RNA干扰在体外可明显沉默肝癌细胞内PEG10基因的表达,抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡。
- 黄锦林菊生董旭旸宋宇虎常莹
- 关键词：肝癌RNA干扰PEG10
