蒋磊
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京协和医院更多>>
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- 酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶活性的调节被引量：2
- 2007年
- 目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫化的酪氨酸突变为苯丙氨酸。针对TPST1(259～275位核苷酸)和TPST2(73～94位核苷酸)基因,分别构建小干扰RNA(shRNA)1和shRNA2重组质粒。测定所有构建质粒开放读框序列。证实序列正确后,将上述质粒分别转染人肾胚胎上皮细胞(HEK)293T。24h后将细胞分成3份:1份用于35S-蛋氨酸/半胱氨酸或35S-亚硫酸钠标记,48h后再进行免疫沉淀反应;1份用于125I标记配基结合;1份用于流式细胞仪检测受体的表达水平。结果TPST1326位和TPST2325位酪氨酸在翻译后被硫化修饰,这一翻译后修饰被特异性的硫化抑制剂shRNA1和shRNA2及非特异性的硫化抑制剂NaClO3显著抑制。shRNA1和shRNA2可显著抑制补体3a和5a受体的硫化,并进一步降低这两种受体与特异性配基的结合效率。结论TPST1和TPST2翻译后受酪氨酸硫化修饰的调节,硫化抑制剂shRNA可以显著抑制TPST的活性,并进一步抑制补体3a和5a受体结合其特异性配基的作用。
- 高金明冯起平左瑾方福德蒋磊郭子健
- 关键词：硫化酪氨酸
- 粉尘螨蛋白致敏小鼠肺部变应性炎症模型的建立被引量：4
- 2009年
- 目的研究以粉尘螨蛋白建立小鼠肺部变应性炎症模型的方法。方法将C57BL/6小鼠分为对照组和实验组。实验组在第1、3、5、7、9和11天采取腹腔注射进行致敏,再用粉尘螨提取液多次雾化激发(第13、16、19、20和21天),最后1次雾化24 h后对小鼠作肺泡灌洗。对照组用生理盐水替代。观察肺组织病理变化与支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数和分类,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BALF和脾细胞培养上清中IL-4与IFN-γ含量,用BCA法测定BALF中蛋白的含量。结果实验组C57BL/6小鼠肺组织呈明显炎症病理改变;BALF中细胞总数、淋巴细胞数和嗜酸性粒细胞计数明显升高(P<0.01);BALF中IL-4明显升高(P<0.01),IFN-γ显著降低(P<0.01);脾细胞培养上清中IL-4也明显升高(P<0.01),IFN-γ显著降低(P<0.01)。结论用腹腔注射粉尘螨蛋白致敏后再雾化激发的方式能够在C57BL/6小鼠体内成功构建肺部变应性炎症模型。
- 陈华夏高金明蒋磊聂莉郭子建
- 关键词：变应原哮喘动物模型粉尘螨
