邬玉兰
- 作品数：48 被引量：103H指数：6
- 供职机构：深圳大学更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 粉尘螨重组变应原Der f8的表达、纯化和免疫学鉴定
- 2014年
- 目的获得大量粉尘螨重组变应原Der f8蛋白,检测其免疫原性。方法合成粉尘螨第8组变应原(Der f8)基因,将其连接至pET-32a载体,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组Der f8蛋白,圆二色谱初步检测该蛋白二级结构,以粉尘螨过敏患者血清作为一抗,经免疫印迹法(Western-blotting)方法分析Der f8的免疫学特性。结果重组工程菌经IPTG诱导后,高效表达出Der f8蛋白,为可溶性蛋白。SDS-PAGE结果显示,表达产物分子质量约为45ku。Der f8重组蛋白二级结构中,α螺旋34.5%,β折叠12.6%,无规则卷曲53.9%。表达产物经亲和层析纯化后,Western Blot印迹有明显条带显示。结论纯化后的Der f8具有较高的纯度和较强的免疫学活性,为粉尘螨过敏反应性疾病的特异性诊断和治疗及进一步的实验研究奠定了基础。
- 蒋聪利邬玉兰李维中肖小军杨平常刘志刚
- 关键词：粉尘螨
- 牛奶过敏原β-乳球蛋白的单克隆抗体制备及其双抗体夹心法的建立被引量：6
- 2015年
- 目的制备与鉴定牛奶主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心检测法。方法以β-LG为抗原免疫BALB/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA方法和Western Blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏原的交叉反应性。建立双单克隆抗体夹心法,检测β-LG。结果共获得抗β-LG细胞株6株,分别命名为1H8,4A7,4C3,1F9,1G5,3D11,效价均高于20万。经抗体亚型鉴定,6株抗体均为Ig G1型。Western Blot的结果表明6株抗体能识别β-LG。在特异性检测实验中,6株抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而1G5和3D11与牛奶酪蛋白过敏原有交叉反应性。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现牛奶β-LG蛋白的检出低限为:15.625 ng/m L,标准曲线在15.625~250 ng/m L范围内线性良好。结论获得高效价抗体6株,建立了高效、高特异性的牛奶过敏原β-LG的检测方法,为食品中牛奶过敏原的检测提供了依据。
- 陈献雄邬玉兰吉琼梅杨平常刘志刚
- 关键词：单克隆抗体过敏原检测
- 豚草花粉过敏原的分析、鉴定与纯化被引量：3
- 2010年
- 目的对豚草花粉变应原蛋白进行分析、鉴定与纯化。方法提取豚草花粉粗提液,SDS-PAGE分离其蛋白组分并测定分子量,Western-blotting鉴定其变应原组分,通过离子交换层析对花粉变应原进行初步纯化和免疫印迹鉴定。结果豚草花粉有30条蛋白带,其中主要条带有9条,70kDa、40kDa为其特异性变应原。经离子交换层析纯化出豚草花粉相对分子量为40kDa的变应原主要分布在Ⅰ峰。结论豚草花粉粗提液中主要变应原为70kDa、40kDa蛋白组分。
- 谢水祥朱清仙邬玉兰刘志刚韩立民
- 关键词：变应原
- 东亚飞蝗消化系统蛋白质组双向电泳的分析被引量：4
- 2012年
- 为了优化东亚飞蝗消化系统双向电泳技术,建立东亚飞蝗消化系统蛋白表达图谱,探讨雌、雄东亚飞蝗消化系统蛋白组分的差异,利用pH值为3~10和pH值为4~7的胶条分别对雌、雄东亚飞蝗消化系统进行双向电泳分析,进行蛋白组学分析.研究结果发现：雌性东亚飞蝗消化系统蛋白种类多于雄性,雌性东亚飞蝗消化系统特异蛋白中偏酸性蛋白数量与偏碱性蛋白相当,而雄性东亚飞蝗消化系统特异蛋白中酸性蛋白多于碱性蛋白.在雌、雄东亚飞蝗消化系统相匹配蛋白中,含量差异达3倍以上的蛋白约占总匹配蛋白的50%.可见,雌、雄东亚飞蝗消化系统蛋白组分存在差异.
- 李燕良邬玉兰闫浩杨芷菁陈义坤刘志刚
- 关键词：东亚飞蝗蛋白组分双向电泳
- 椰子花粉过敏原profilin蛋白体外重折叠过程的光谱学研究被引量：1
- 2010年
- 在基因工程技术中,采用原核表达系统获得的重组蛋白通常都是以包涵体的形式存在。利用圆二色性光谱、荧光光谱和同步荧光光谱对尿素诱导的重组椰子花粉泛过敏原profilin蛋白包涵体的复性过程进行了系统的光谱学研究,得到了profilin蛋白复性过程的光谱学特征;结合生物信息学方法,通过对profilin蛋白的二级结构和三级结构的预测,进一步分析了复性过程中profilin蛋白构象变化的特点,初步建立了一种新的检测重组变应原蛋白复性程度的光谱学实验方法,为重组蛋白包涵体复性机理的深入研究进行了有益的探索。
- 罗海梅肖杰邬玉兰刘志刚Jun Lu徐宏
- 关键词：变应原PROFILIN生物信息学
- 小麦品种“中国春”主要过敏原CM16基因的克隆及序列分析
- 2009年
- 为了给小麦主要过敏原CM16蛋白的重组表达和免疫活性鉴定等研究奠定基础,通过生物信息学方法设计并合成简并性引物,利用RT-PCR技术对小麦主要过敏原CM16基因进行克隆,并进行序列分析。结果表明,克隆获得了小麦主要过敏原CM16基因。基因开放阅读框为432个碱基(包括终止密码子),编码143个氨基酸。该序列编码的蛋白相对分子质量约为15 782,等电点为5.17。序列同源性分析发现其与国外报道的已知小麦CM16基因具有很高的同源性(同源性为99%),因此认为其系小麦过敏原基因,在GenBank数据库中的登录号为EU883599。
- 邬玉兰刘志刚余汉谋伍文琪
- 关键词：小麦基因克隆
- 牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建被引量：13
- 2010年
- 采用RT-PCR技术克隆牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的全长基因,并根据序列设计带有酶切位点的特异性引物对所得cDNA的开放阅读框进行扩增,将所得基因片段克隆到PET-28a载体.结果克隆了牛乳主要过敏原α-乳白蛋白的完整基因,所克隆的基因开放阅读框全长为429 bp,编码142个氨基酸,该蛋白相对分子质量约为16 265,等电点为6.10,与理论值相符.通过与Genbank中已有序列比对分析,同源性高达100%.实现构建该基因的PET-28a原核表达载体,为牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的相关研究奠定了基础.
- 闫浩邬玉兰夏立新刘志刚
- 关键词：牛乳Α-乳白蛋白基因克隆原核表达
- 小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化被引量：5
- 2010年
- 从小龙虾(Procambarus clarkii:pc)的肌肉组织中提取其总RNA,设计特异性引物,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)克隆出编码小龙虾钙结合蛋白(sarcoplasmic calcium-binding protein:SCP)基因片段,扩增片段为582bp.该序列与已报道的几类虾SCP序列比对结果表明:在氨基酸水平上同源性为81%～96%.将SCP基因与pET-28a载体连接,构建了原核表达载体pET-28a-pcSCP重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE结果表明:表达蛋白约为22kDa,与预期的相对分子质量大小相符.并用Ni2+亲和层析柱对重组变应原进行纯化,得到了纯度较高的pcSCP.研究重组蛋白pcSCP的获得,为pcSCP变应原性及相关的研究奠定基础.
- 魏波夏立新陈红兵邬玉兰刘志刚
- 关键词：小龙虾钙结合蛋白基因表达
- 东亚飞蝗主要过敏原的分析、鉴定与纯化被引量：3
- 2012年
- 通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis(Meyen)的蛋白质组分并测定其分子量,收集过敏病人血清,采用免疫印迹(Western—blotting)法鉴定其过敏原成分,通过凝胶过滤层析对东亚飞蝗过敏原进行分离纯化。结果表明:东亚飞蝗蛋白粗提液条带大概有30条左右,其中主带大约有10条,相对分子量约为13、15、25、28、40、45、55、70、100、110ku,其中蛋白含量最丰富的约在70ku左右。免疫印迹结果显示,蝗虫过敏条带主要有5条,相对分子量分别约为19、29、38、70、130ku。通过凝胶过滤层析对东亚飞蝗过敏原进行分离纯化,得到了一个高纯度相对分子质量约为70ku东亚飞蝗过敏原,并且发现了一个相对分子质量约为130ku的蝗虫新过敏原。本研究为临床上蝗虫食物变态反应性疾病的诊断和治疗奠定基础。
- 陈义昆邬玉兰刘志刚
- 关键词：东亚飞蝗离子交换层析免疫印迹
- 尘螨变应原及其应用
- 本发明提供了一种尘螨变应原及其应用。本发明提供的粉尘螨变应原属于组织蛋白酶D的同源物，可用于过敏性疾病的诊断、治疗、预防，特别是粉尘螨过敏性疾病，尤其特别的，是用于粉尘螨变应原第34组分引起的过敏性疾病的诊断、治疗、预防...
- 刘晓宇林建立王媛媛梁志林邬玉兰刘志刚
- 文献传递
